济南血液病医院专业正规 治疗效果如何 众多患者从这康复
刘群++吴然+吕超+张卫东+柳润辉
[摘要]麝香保心丸（SBP）是医治冠心病的经典复方，其间人参皂苷类化合物是其发挥药效的首要成分之一。该文选用液相色谱串联质谱（LCMS/MS）的办法，研讨心梗大鼠屡次灌胃麝香保心丸、人参提取物（GE）及5种人参皂苷类单体化合物后人参皂苷类化合物的药代动力学特性。研讨发现人参皂苷类化合物整体吸收较差，各组Cmax均小于200 μg·L-1。比较各组剖析物的Tmax发现人参提取物组和麝香保心丸组中人参皂苷类化合物均比各单一化合物组吸收快，提示人参提取物及复方中均存在促进人参皂苷成分吸收的成分。麝香保心丸组中的各人参皂苷成分的给药剂量在一切给药组中最小，但相应的AUC0t和AUCINF数值最大，标明配伍后麝香保心丸中人参皂苷类成分吸收最好，阐明复方是中医药用的最佳方式。
[关键词]麝香保心丸； 人参提取物； 人参皂苷类； 心肌梗死； 药代动力学
麝香保心丸（SBP）源于南宋《和平惠民和剂局方》中收载的苏合香丸，由麝香、蟾酥、人参提取物、苏合香、牛黄、肉桂、冰片组成，具有芳香温通、益气强心之成效。近40年来，麝香保心丸广泛使用于临床医治冠心病、心绞痛及心肌梗死等疾病[12]，疗效明显。现代药理研讨标明麝香保心丸具有舒张血管[3]、安稳易损斑块[4]、缩小心肌梗死面积[5]、按捺血管钙化[6]和促进血管重生[7]等效果。为了阐释麝香保心丸组方的科学内涵，自上市以来对其进行药效物质根底及效果机制方面的研讨从未接连。本课題组前期选用现代别离剖析手法结合血清药化的办法对麝香保心丸的药效物质根底进行了全面研讨[89]，进一步选用药理学及代谢组学办法对其效果机制进行了研讨[1013]。
近年来，中药药代动力学研讨在阐释中药复方药效物质根底及效果机制方面的使用越来越广泛。中药药代动力学是使用动力学原理与处理办法，定量地描绘中药有用成分、有用部位、单味中药和复方中药经过各种途径进入机体后吸收、散布、代谢和分泌等进程的动态改动规则，在阐明中药效果机制及其科学内涵、规划及优选给药计划、促进新药研制和剂型改善等方面起着严重效果[14]。现在，课题组已对麝香保心丸中的首要药效成分人参皂苷类[1516]、蟾蜍甾体二烯类[17]以及挥发性成分（异冰片、冰片、麝香酮和肉桂醛）[18]在正常大鼠体内的药代动力学进行了研讨。众所周知，药物终究用于患者医治疾病，因而研讨疾病状态下的中药药代动力学更有意义，且与临床更相关[19]。有文献报导，大鼠心肌梗死后胃肠功能[20]、内分泌水平[21]及血浆纤维蛋白含量[22]均会发作改动，这些由心功能受损引起血流动力学的改动和病理改动都可导致药物血浆药动学和安排散布的改动，影响药物的体内进程。因而本文对麝香保心丸中人参皂苷类成分在心肌梗死模型大鼠体内的药代动力学特征进行了研讨。
本文在前期血清药化及药代动力学研讨的根底上选取5种人参皂苷类化合物（Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1）作为方针剖析物，比较剖析心肌梗死大鼠别离屡次灌胃5种人参皂苷类单体化合物、人参提取物（GE）和麝香保心丸后5种人参皂苷类化合物的药代动力学特性差异，评论麝香保心丸中人参皂苷类成分在病理状态下的体内代谢进程，为阐释麝香保心丸的效果机制供给依据。
1资料
11仪器及试剂安捷伦1200系列高效液相色谱体系（Agilent Technologies，USA）；G6410B三重四级杆质谱检测器，ESI离子源（Agilent Technologies，USA）；MassHunter软件搜集和处理数据（B0301版别，Agilent Technologies，USA）。人参皂苷Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1及地高辛（内标，IS）对照品均购自上海鼎瑞化工有限公司（我国上海），纯度>98%。待测化合物及内标的结构，见图1。人参提取物（批号150412）和麝香保心丸制剂（批号150603）由上海和黄药业（我国上海）供给。乙腈为质谱纯，购自Merck公司（Germany）；甲醇和甲酸别离购自百灵威科技有限公司（我国北京）；SigmaAldrich公司（USA），均为色谱级；其他试剂均为剖析纯。试验中所用的超纯水是由Milli Q50 SP纯水体系制备。
解于10 mL量瓶，超声提取30 min，14 000 r·min-1离心10 min，取上清液。022 μm微孔滤膜过滤，得供试液。别离制造麝香保心丸和人参提取物样品3份，选用LCMS/MS体系进行剖析，进样体积为10 μL。依据规范曲线剖析，并取均匀浓度。最终测得Rg1，Re，Rb3，Rb1，Rc在麝香保心丸中质量分数别离为247，251，423，671，268 mg·g-1；在人参提取物中质量分数别离为1001，1074，1719，2648，1218 mg·g-1。
24血浆样品制备选用液液萃取法，取100 μL血浆样品置于15 mL离心管中，参加1 mL正丁醇（含内标地高辛25 μg·L-1）。将此混合物涡旋10 min，14 000 r·min-1，4 ℃离心10 min，上清液转移至洁净离心管中，45 ℃ N2流下挥干，50 μL甲醇复溶，涡旋10 min，14 000 r·min-14 ℃下离心10 min，取上清液，即得样品溶液。10 μL样品溶液进LCMS/MS体系剖析。
25给药及采血试验前一切心梗大鼠禁食12 h，可自在饮水。给药后4 h即可饮水。别离称取麝香保心丸细粉，人参皂苷提取物细粉，Rg1，Re，Rb3，Rb1和Rc，用05%羧甲基纤维素钠（CMCNa）水溶液制造成混悬液。42只心梗大鼠随机分组后，别离灌胃7种药物，包含麝香保心丸组（180 mg kg-1·d-1，n=6），人参皂苷提取物组（80 mg·kg-1·d-1，n=6），Rg1组、Re组、Rb3组、Rc组、Rb1组给药剂量与样本数均相同（40 mg·kg-1·d-1，n=6）。一切大鼠称重，接连灌胃5 d。第5天灌胃后，别离在5，15，30，45 min，1，15，2，4，6，8，10，24 h眼眶静脉取血，每次采血量约250 μL，搜集的样品搜集在预先涂有肝素钠的15 mL 离心管中。一切样本立即在4 ℃，3 500 r·min-1下离心10 min，取上清液，血浆样品保存在-20 ℃冰箱中待剖析。
3成果
31色谱行为及专一性地高辛（IS），Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1相使用于定量的transitions别离为m/z 7794/4752，8452/6371，9455/188，1 0775/1488，1 0777/1907，1 1073/1188。空白大鼠血浆、空白血浆添加各待测物及内标所得的最低定量限（LLOQ）处的血浆样品及大鼠灌胃麝香保心丸后实践的血浆样本，得到的典型MRM色谱图，见图2。IS，GRg1，GRe，GRb3，GRc，GRb1的保存时刻别离为339，537，533，696，668，653 min。各待测物及内标无显着搅扰，该办法选择性杰出，见图3。
32血浆样品规范曲线经过剖析规范血浆样品得到规范曲线，每一浓度平行5份。每条规范曲线是由6个非零浓度点组成。横坐标为待测物的血
4评论
本文使用LCMS/MS剖析了心肌梗死大鼠接连5 d灌胃麝香保心丸、人参提取物及单体化合物后各时刻点的5种人参皂苷化合物的血药浓度，并核算其药代动力学参数和时刻均匀血药浓度曲线。
药动学参数Cmax反映了药物在血浆中的最大浓度，一切给药组中人参皂苷的Cmax均小于200 μg·L-1，阐明人参皂苷类化合物灌胃给药吸收较差，或许是因为人参皂苷类化合物在吸收进程中被胃酸损坏、肠道菌降解、肠壁吸收差及肝首过效果所造成的[2425]。各人参皂苷化合物在麝香保心丸组和人参提取物组的Cmax均大于相应的单体化合物给药组，且麝香保心丸组Cmax高于人参提取物组。血浆蛋白结合率为药代动力学重要参数之一，对血浆蛋白结合率的协同效果能够影响到药物游离体的血浆浓度，文献报导，人参皂苷Rg1与Rb1兼并使用氯吡格雷后二者血浆蛋白结合率均下降约10%，使得游离皂苷浓度添加[26]。中药复方及中药提取物中均含有多种成分，因而服用中药制剂相当于药物联合使用。麝香保心丸及人参皂苷提取物中或许含有一些成分，可与人参皂苷类成分竞争性结合血浆蛋白，导致其Cmax升高。心肌缺血后药物能够透过受损血管更多地散布于缺血区，一起，因为缺血区血流削减，使得透过药物在缺血区的停留时刻延伸。这种因缺血导致的心肌区药物散布改动称为透过增强与停留效应，是现在遍及认同的心肌缺血区被迫靶向的首要机制[27]。正常大鼠灌胃附近剂量的5种人参皂苷单体化合物后Cmax为1996 ～7014 μg·L-1 [2831]，大于模型动物灌胃相应的单体人参皂苷化合物的Cmax，提示在心肌缺血模型大鼠体内，人参皂苷类化合物或许存在心肌缺血区被迫靶向的现象，使得心肌缺血区药物散布多，而血药浓度较低。
心梗大鼠灌胃全方、提取物和人参皂苷类单体化合物后，各组Rb1和Re药时曲线均有双峰现象，这与正常大鼠的相关报导共同[2829]。药物的双峰现象一般由肝肠循环、成分间转化或药物再散布导致。文献报导人參皂苷Rd在大鼠体内经代谢可生成Rb1[32]；一起，人参皂苷Rb1在空肠的吸收量、吸收速率及累积吸收率，较回肠和十二指肠明显进步[33]，提示人参皂苷Rb1的双峰现象或许由人参皂苷Rd转化及其自身在不同肠断吸收不同导致。
Tmax反映了药物到达最大血药浓度所需求的时刻。比较各组相应剖析物的Tmax发现，麝香保心丸组及人参皂苷提取物组中5种人参皂苷与相应的单体化合物组比较较小，且麝香保心丸组中人参皂苷的Tmax小于人参提取物组，阐明提取物组和麝香保心丸组中人参皂苷均比各单一化合物吸收快，提示不只各人参皂苷类化合物能够互相促进吸收速率，并且复方中的其他成分对人参皂苷的吸收速率具有促进效果。
一切给药组的T1/2和MRT均较长，或许因为人参皂苷类化合物的胆汁及肾脏的分泌率低、肠道分泌慢、血浆蛋白结合率高导致[24，34]。比较各组相应剖析物的T1/2和MRT发现，麝香保心丸组中各剖析物的T1/2最大，阐明复方配伍后5种人参皂苷在体内起效时刻或许会延伸。正常大鼠灌胃麝香保心丸后5种人参皂苷成分的T1/2在2053～3634 h[16]，大于其灌胃于心梗大鼠后各剖析物相应的T1/2，或许因为心梗大鼠较正常大鼠小肠推动率添加导致[35]。
药代动力学参数AUC和AUCINF是点评药物吸收程度的重要目标，反映药物在体内的露出特性。正常大鼠灌胃附近给药浓度的5种人参皂苷单体化合物后AUC和AUCINF别离为13 3637～63 5000，14 9909 ～ 66 8000 μg·L-1·h[2831]，远大于心梗大鼠灌胃各单体化合物的AUC和AUCINF，提示正常大鼠关于这5种人参皂苷类化合物吸收优于心梗大鼠。该现象或许因为大鼠心梗后胃排空减慢[20]、血浆中纤维蛋白含量添加[22]及小肠推动率添加[35]导致。在各给药组中，麝香保心丸组中的各人参皂苷成分的给药剂量均最小，但其对应的AUC0t和AUCINF的数值最大，人参提取物组中各人参皂苷的AUC0t和AUCINF其次，成果阐明人参皂苷提取物中存在促进人参皂苷单体吸收的成分，一起全方中其他配伍组分也能促进人参皂苷成分的吸收，与之前的研讨成果共同[36]。经过药代动力学参数比较能够发现，中药有用成分在配伍后的复方中发挥药效的才能最强，表现了中药复方配伍的科学性，由此阐明复方是中医用药的最佳方式。
[参考文献]
[1]戴瑞鸿 我与麝香保心丸[J] 我国中西医结合杂志， 2001， 20（2）：32
[2]Song H Pharmacology studies and evaluation of clinical application on Shexinag Baoxin pills[J] Chin Tradit Pat Med， 2002， 24（2）：131
[3]周丽杰 麝香保心丸对急性冠脉综合征患者血清MMP2表达的影响[J] 辽东学院学报：自然科学版， 2014， 21（4）：300
[4]顾明晖， 孙鲁申 麝香保心丸对家兔急性心肌缺血时心率变异的影响[J] 心脏杂志， 1998， 10（4）：266
[5]王大英， 李勇， 范维琥 麝香保心丸对心肌梗死大鼠梗死面积和血管重生的效果[J] 中成藥， 2004， 26（11）：912
[6]张旭升， 朱平先， 黄战军， 等 麝香保心丸对试验大鼠血管钙化的效果[J] 中西医结合心脑血管病杂志， 2015， 13（1）：52
[7]汪姗姗， 李勇， 范维琥， 等 麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培育的血管内皮细胞的促血管生成效果[J] 中西医结合杂志， 2013， 23（2）：128
[8]Jiang P， Liu R H， Dou S S， et al Analysis of the constituents in rat plasma after oral administration of Shexiang Baoxin pill by HPLCESIMS/MS[J] Biomed Chromatogr， 2009， 23（12）：1333
[9]王喜军 中药血清药物化学的研讨现状及未来开展[J] 亚太传统医药， 2005（1）：59
[10]吕超， 黄慧梅， 畅婉琳， 等 麝香保心丸促进血管重生效果的活性成分挑选[J] 药学实践杂志， 2014， 32（5）：344
[11]韩琳， 吕超， 李敏， 等 麝香保心丸抗心肌细胞缺氧复氧损害活性成分挑选[J] 药学实践杂志， 2014， 32（3）：209
[12]Xiang L， Han L， Jiang P， et al metabolomics study of protective effects of Shexiang Baoxin pill and its bioactive constitutes combination in treating the early period of acute myocardial infarction in rats [J] Alternat Integrat Med， 2013， doi：104172/232751621000127
[13]Xiang L， Jiang P， Wang S P， et al metabolomic strategy for studying the intervention and the synergistic effects of the shexiang baoxin pill for treating myocardial infarction in rats [J] Evid based Complement Altermat Med， 2013， 2013（1）：823121
[14]韩玲 多成分中药药代动力学研讨的现状及考虑[J] 我国中药杂志， 2008， 33（21）：2442
[15]Jiang P， Liu R H， Dou S S， et al Analysis of the constituents in rat plasma after oral administration of Shexiang Baoxin pill by HPLCESIMS/MS[J] Biomed Chromatogr， 2009， 23（12）：1333
[16]Peng C C， Yang Y G， Lv C， et al Pharmacokinetic study of five ginsenosides using a sensitive and rapid liquid chromatographytandem mass spectrometry method following single and multiple oral administration of Shexiang Baoxin pills to rats [J] Biomed Chromatogr， 2014， 29（3）：425
[17]Huang H M， Yang Y G， Lv C， et al Pharmacokinetics and tissue distribution of five bufadienolides from the Shexiang Baoxin Pill following oral administration to mice [J] J Ethnopharmacol， 2014（161）：175
[18]Chang W L， Hai L， Huang H M， et al Simultaneous determination of four volatile compounds in rat plasma after oral administration of Shexiang Baoxin Pill by HSSPDEGCMS/MS and its application to pharmacokinetic studies [J] J Chromatogr B， 2014（963）：47
[19]巩仔鹏，陈颖，张瑞杰，等 疾病状态下的中药药代动力学研讨进展[J] 我国中药杂志，2015， 40（2）：169
[20]刘世雄， 严祥， 宋少莉，等 急性心肌梗死大鼠胃排空的改动[J] 中华晚年医学杂志， 2006， 25（3）：209
[21]陈伟，顾仁樾，方军，等 心梗后心室重构大鼠循环内分泌体系的改动及通心络的干涉效果[J] 我国中医根底医学杂志，2003， 9（11）：28
[22]王凌燕， 朱广瑾， 段岩平， 等 大鼠试验性心肌，堵塞时血浆蛋白C、纤溶活性改动及人参皂甙效果的研讨[J] 解剖学报， 1995， 26（3）：309
[23]Noble J， Bourassa M G， Petitclerc R， et al Myocardial bridging and milking effect of the left anterior descending coronary artery：normal variant or obstruction[J] Am J Cardiol， 1976， 37（7）：993
[24]韓旻， 傅韶， 方晓玲 三七皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1口服吸收及其体内药代动力学的研讨和比较[J] 药学学报， 2007， 42（8）：849
[25]Han M， Han L M， Wang Q S， et al Mechanism of oral absorption of Panax notoginseng saponins[J] Acta Pharm Sin， 2006， 41（6）：498
[26]马世堂， 戴国梁， 赵文珠，等 根据液相色谱质谱联用氯吡格雷人参皂苷血浆蛋白结合率协同效应[J] 南边医科大学学报， 2015（1）：109
[27]王利娜， 林晓， 沈岚，等 临床常见疾病对中药药代动力学的影响[J] 我国试验方剂学杂志， 2015， 21（18）：206
[28]Jie Z， Chang S， Yang C， et al Determination of ginsenosides Rb1， Rb2， and Rb3 in rat plasma by a rapid and sensitive liquid chromatography tandem mass spectrometry method：application in a pharmacokinetic study [J] Planta Med， 2012 （3）：94
[29]Joo K M， Lee J H， Jeon H Y， et al Pharmacokinetic study of ginsenoside Re with pure ginsenoside Re and ginseng berry extracts in mouse using ultra performance liquid chromatography/mass spectrometric method [J] J Pharm Biomed Anal， 2010， 51（1）：278
[30]Xu R， Ying P， Wang M， et al Effects of broadspectrum antibiotics on the metabolism and pharmacokinetics of ginsenoside Rb1：a study on rats′ gut microflora influenced by lincomycin [J]. J Ethnopharmacol， 2014，158：338
[31]Chu Y， Zhang H C， Li S M， et al Determination of ginsenoside Rc in rat plasma by LCMS/MS and its application to a pharmacokinetic study[J] J Chromatog B， 2013 （3）：75
[32]刘霞 人参皂苷 Rd 口服吸收及其体内药代动力学的研讨[D] 兰州：兰州大学，2011
[33]李文兰， 南莉莉， 季宇彬，等 人参中人参皂苷Rg1，Rb1在体肠吸收影响要素的研讨[J] 我国中药杂志， 2009， 34（20）：2627
[34]Takino Y， Odani T， Tanizawa H， et al Studies on the absorption， distribution， excretion and metabolism of ginseng saponins I Quantitative analysis of ginsenoside Rg1 in rats [J] Chem Pharm Bull， 1982， 30（6）：2196
[35]卢小芳 心肌梗死后大鼠胃肠功能紊乱发病机制及通心络的防治效果[D] 石家庄：河北医科大学， 2014
[36]Jiang P， Fu P， Xiang L， et al The effectiveness of borneol on pharmacokinetics changes of four ginsenosides in Shexiang Baoxin pill in vivo[J] Biomed Chromatogr， 2013， 28（3）：419
[责任编辑曹阳阳]