海洋矿藏泥面膜 7种海洋矿藏药的比较分析研究

司玮+阿如娜+李尚蓉+张静娴+吴婉莹+崔亚君

[摘要]《我国药典》2010年版收载的海洋矿藏药首要包含珍珠、珍珠母、蛤壳、牡蛎、瓦楞子、海螵蛸、石决明等，该类药材化学成分组成类似，首要是碳酸钙和少数的蛋白质。该文选用EDTA络合滴定法测定碳酸钙的含量；选用X射线粉末衍射，测定其碳酸钙晶型；选用紫外分光光度法对水解后样品中总氨基酸进行测定。经过体系的比较研讨，寻觅该类药材的差异性，成果显现，所搜集的样品中牡蛎所含碳酸钙为三方晶系方解石，石决明及珍珠母晶型为三方晶系方解石与斜方晶系文石混合晶型，其他4种均为斜方晶系文石；一切样品的碳酸钙质量分数在86%～96%；海螵蛸中总氨基酸质量分数最高达1.70%、蛤壳中最低，均匀为0.16%。经过对7种海洋矿藏药中碳酸钙和总氨基酸的剖析，树立了一种对海洋矿藏药质量操控的有用办法。

[关键词]海洋矿藏药；X射线衍射；碳酸钙；氨基酸；EDTA络合滴定；紫外分光光度法

《我国药典》收载的海洋来历的矿藏药首要包含珍珠、珍珠母、蛤壳、牡蛎、瓦楞子、海螵蛸、石决明，珍珠具有安神定惊，明目消翳，解毒生肌，润肤祛斑的效果，其他贝壳类药材多具有平肝潜阳，软坚散结的成效^[1]，药材药效清晰，使用广泛，可是质量操控令人堪忧。该类药材化学组成根本类似，可分为无机成分和有机成分，其间以无机成分为主，首要由碳酸钙组成；有机成分以含量不等的蛋白质为主。文献报导，珍珠母中碳酸钙质量分数在91%～96%，珍珠、珍珠母中约含2.5%～7.0%氨基酸 [2]。瓦楞子、蛤壳中以碳酸钙为主，约含0.4%～4.7%的氨基酸 [3]。牡蛎首要成分为碳酸钙、微量元素及氨基酸 [4]。

《我国药典》2010年版只对牡蛎、石决明和蛤壳中碳酸钙树立了含量测定办法，对本文研讨的其他矿藏药无含量测定项^[1]。根据现在研讨现状，本文以该类药材首要成分为研讨方针，从3个方面进行了体系的比较研讨。挑选EDTA络合滴定法作为碳酸钙含量测定办法；X射线粉末衍射测定碳酸钙晶型；选用紫外分光光度法，对海洋矿藏类药中总氨基酸含量进行测定。经过碳酸钙和氨基酸成分剖析，树立一种海洋矿藏类药材的质量操控办法。

1 资料

UV-2450紫外分光光度计（日本岛津）；QT-1旋涡混合器（上海琪特剖析仪器有限公司）；84-1磁力拌和器（上海梅颖浦仪器仪表制作有限公司）；Bruker D8 advance X-射线衍射仪（德国Bruker公司）； EYELA SB-2000水浴锅（上海爱浪仪器有限公司）； BT 25 S 1/10 万电子天平（北京赛多利斯有限公司）；Elmasonic P180H 超声波清洗仪（荷兰必能信有限公司）；箱式电阻炉（上海跃进医疗器械厂）。

甘氨酸对照品（140624-200805）购自我国食品药品检定研讨院；基准氧化锌（20045660）购自天津市化学试剂研讨所；茚三酮、磷酸二氢钾、氢氧化钠、盐酸、苯酚、氢氧化钾、氯化铵、乙二胺四乙酸二钠、钙黄绿素、甲基红、氯化钠、氯化钾、氨水（氢氧化铵）均为剖析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；铬黑T（F1320033）购自上海晶纯生化科技股份有限公司。

一切药材均为市售品及产地搜集，经我国科学院上海药物研讨所果德安研讨员判定，样品搜集信息见表1。

2 办法与成果

2.1 碳酸钙测定

2.1.1 EDTA-2Na滴定液标定

取于800 ℃灼烧至恒重的基准物氧化锌0.12 g，精细称定5份，加稀盐酸3 mL使溶解，加水25 mL，加0.025%甲基红乙醇溶液1滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加水25 mL，氨-氯化铵缓冲液（pH 10.0）10 mL，再加铬黑T指示剂少数，用滴定液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，并将滴定的成果用空白试验校对。每1 mL EDTA-2Na（0.05 mol·L^-1）适当于4.069 mg的氧化锌。成果标明，EDTA-2Na溶液均匀消耗量为28.99 mL，经核算本滴定液浓度为0.050 9 mol·L^-1，每1 mL此滴定液适当于5.090 mg碳酸钙。

2.1.2 含量测定

参照《我国药典》2010年版，蛤壳项下碳酸钙含量测定办法，取样品细粉约0.12 g于锥形瓶中，参加3 mL稀盐酸，加热至微沸溶解，加水100 mL摇匀，加甲基红指示液一滴，滴加10%氢氧化钾至溶液显黄色，持续多加6 mL，加钙黄绿素指示剂少数，用EDTA-2Na滴定液滴定至溶液黄绿色荧光消失而显橙色。按上述办法对搜集的样品进行碳酸钙含量测定，见图1。

从碳酸钙含量测定成果能够看出，珍珠、珍珠母、蛤壳、牡蛎、瓦楞子和石决明样品均匀碳酸钙质量分数在91%～96%；海螵蛸中碳酸钙含量略低，88%左右，与文献报导其质量分数在87.3%～

91.7%相符^[5]。海洋矿藏药碳酸钙含量无显着差异，因而以碳酸钙含量为目标关于种类辨别含义不大^[6]。

2.2 碳酸钙晶型测定

取样品粉末，进行X射线粉末衍射，扫描规模3°～40°，扫描速度为0.1 s·step^-1，X射线管管压为40 kV，管流40 mA记载其谱图，与碳酸钙3种同质多变体规范品图谱^[7]进行比照，见图2。

碳酸钙有3种同质多象变体：斜方晶系文石（Aragonite），三方晶系方解石（Calcite），六方晶系球文石（Vaterite）。文石于2θ 26.22°，27.22°，31.14°，32.74°，33.16°，36.14°，37.26°，37.90°，38.40°，38.62°，41.20°，42.90°，45.86°，48.32°，48.46°，50.24°，51.90°，52.50°，52.92°，53.06°和53.96°有特征峰，方解石于2θ 23.10°，29.46°，31.52°，36.04°，39.48°，43.24°，47.22°，47.62°和48.62°有特征峰，球文石于2θ 20.90°，24.88°，27.02°，32.72°，40.62°，42.56°，43.80°，49.02°，49.92°，51.02°，52.224°，55.72°有特征峰。经过与3种规范谱图比照，7种海洋矿藏药中，珍珠（A）、蛤壳（B）、瓦楞子（C）和海螵蛸（D）的图谱与文石碳酸钙图谱彻底对应，均归于文石碳酸钙；牡蛎（E）与方解石图谱彻底对应，归于方解石碳酸钙；珍珠母（F）和石决明（G）图谱中含有一切文石的特征峰，并在2θ29.53°呈现方解石的特征峰，估测其碳酸钙晶型为文石和方解石混合晶型。endprint

2.3 总氨基酸测定

2.3.1 对照品溶液制备

精细称取甘氨酸对照品5 mg于100 mL量瓶中，加蒸馏水适量溶解，定容至刻度，摇匀，即得（每1 mL含甘氨酸0.05 mg）。

2.3.2 供试品溶液的制备

取样品粉末适量，精细称定，参加2 mL乙醇，混匀，置磁力拌和器上拌和，缓慢参加稀盐酸溶液（过量），拌和至反响彻底，离心，弃去上清，挥干乙醇即得壳角蛋白。将得到的壳角蛋白转移至10 mL安瓿瓶中，参加5 mL 6 mol·L^-1盐酸溶液，参加2～3滴苯酚，充N2，封口，置110 ℃烘箱中水解24 h后取出，放冷，转移至10 mL量瓶中，参加6 mol·L^-1氢氧化钠溶液定5 mL容至刻度，用0.45 μm滤膜滤往后即得。取必定量水解样品，参加1 mL pH 6.8的磷酸盐缓冲溶液混匀，参加1.5 mL 2%茚三酮溶液，于100 ℃沸水浴中反响20 min后，取出放冷，转移至10 mL量瓶，以蒸馏水洗刷试管3次后，定容至刻度，混匀，于568 nm处测定吸光度。

2.3.3 总氨基酸含量测定

2.3.3.1 检测波长挑选 取供试品溶液和对照品溶液适量，照紫外-可见光分光光度法，在分光光度计上400～800 nm 扫描，供试品溶液与甘氨酸对照品溶液最大吸收波长均在568 nm，因而挑选568 nm作为检测波长。

2.3.3.2 显色条件挑选 选用正交试验规划对显色反响有影响的4个要素，显色剂用量（A）、显色时刻（B）、显色温度（C）、冰浴时刻（D）进行了调查，别离设定3个水平，规划L9（34）正交试验，以吸光度为目标，断定最佳显色条件。以珍珠样品为研讨目标，试验组织及成果见表2。

由直观剖析可知，对显色条件影响次序为A>C>B>D，因而断定最佳显色条件为A3B3C3D1，即参加显色剂1.5 mL，100 ℃水浴下反响20 min，取出静置至室温。

2.3.3.3 缓冲盐pH调查 精细移取样品溶液1.0 mL于具塞试管中，别离参加pH 4.8，5.8，6.8，7.8，8.8磷酸缓冲盐溶液1 mL，每个条件下平行制备2份，依照优化好的显色办法显色，于568 nm下测定吸光度。成果标明，当缓冲盐溶液pH为4.8时，样品溶液不显色，当pH达6.8时，显蓝紫色，吸光度最大，当缓冲盐pH为8.8时，显紫红色，吸光度低。因而，挑选pH 6.8的缓冲盐溶液。

2.3.3.4 规范曲线 精细移取甘氨酸对照品溶液（0.05 g·L^-1）0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 mL于具塞试管中，按显色办法显色，于568 nm进行测定。以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，得回归方程Y=256.64X-0.007 6，相关系数r为0.999 96，甘氨酸在0.5～4.0 mg·L^-1线性关系杰出。

2.3.3.5 准确度 精细移取珍珠样品溶液0.75 mL于具塞试管中，平行制备6份，别离参加甘氨酸对照品溶液（0.05 g·L^-1） 0.29 mL（适当于原样品中甘氨酸含量100%的量），进行显色，于568 nm处测定吸光度值，依照公式核算回收率，回收率（%）=（实丈量-原样品量）/加标量，成果显现，6份样品的回收率均在95%～105%，均匀回收率为102.1%，RSD<2%，标明该办法准确度杰出，见表3。

2.3.3.6 精细度试验 重复性调查即依照优化好的供试品制备办法，平行制备6份供试品溶液进行测定，核算成果的RSD；日间精细度即平行制备3份样品进行测定，接连剖析3 d，核算成果的RSD；成果显现RSD均小于2%，标明该办法精细度杰出。

2.3.3.7 安稳性调查 安稳性调查即测定1份供试品溶液于0，15，30，45，60 min时测定吸光度。成果显现RSD小于2%，供试品溶液在1 h内安稳。

2.3.4 样品测定

按优化好的试验办法，对一切样品水解液中总氨基酸进行测定，见图3。从图中能够看出，海螵蛸中总氨基酸质量分数最高，可达1.7%以上。其次为珍珠、珍珠母，均匀质量分数在1.50%左右。石决明总氨基酸质量分数均匀在1.20%，但3批样品含量不同较大，或许受样品产地影响较大。牡蛎、蛤壳、瓦楞子中氨基酸质量分数均未到达0.4%，以蛤壳中含量最低，质量分数均匀在0.16%，牡蛎和瓦楞子中含量适当，均匀质量分数在0.30%左右。

3 评论

3.1 碳酸钙剖析

选用EDTA络合滴定法测定碳酸钙含量办法老练牢靠，本研讨参阅《我国药典》2010年版中蛤壳中碳酸钙含量测定办法，经重复性试验调查，接连测定6份样品，碳酸钙含量RSD<1%，重复性杰出。

3.2 氨基酸剖析

本文初次选用茚三酮显色法对海洋来历矿藏药中总氨基酸的含量进行测定，选用正交规划和单要素试验办法对试验条件进行了调查，并对该办法进行了办法学验证。

3.3 差异性剖析

本文从3方面临7种海洋矿藏药进行了体系的比较剖析研讨，见表4，经过碳酸钙晶型测定，能够清晰得辨别出牡蛎，一起对石决明和珍珠母样品进行开始辨别；碳酸钙含量测定成果显现，海螵蛸中碳酸钙质量分数偏低，均匀值88%，这与文献报导海螵蛸中碳酸钙质量分数在87.3%～91.7%成果共同^[5]，其他样品质量分数均大于92%；关于氨基酸，珍珠、珍珠母和海螵蛸中质量分数偏高，石决明中略低，而牡蛎，瓦楞子和蛤壳中质量分数很低，尤其是蛤壳，总氨基酸质量分数缺乏0.2%。经过以上剖析能够开始的将7种海洋矿藏药差异开来。

4 定论endprint

碳酸钙为海洋矿藏药的首要成分，在树立中药质量规范经常选用首要成分为目标，但经过本研讨对7种海洋矿藏药碳酸钙及氨基酸成分比较剖析，显着看出仅以碳酸钙的含量作为点评目标，难以清晰地反响出药材之间的差异及内涵质量。本文经过对碳酸钙晶型、碳酸钙含量和总氨基酸含量的归纳剖析，为海洋矿藏药的质量操控供给必定根据。

[称谢]本文得到了我国科学院上海药物所梅雪峰课题组李莎教师对X射线衍射部分供给的技术支持与辅导。

[参阅文献]

[1] 我国药典. 一部[S]. 2010：215.

[2] 欧阳茜茜， 杨磊， 罗剑秋， 等. 珍珠的成分结构及呈色机理研讨进展 [J]. 广州化工， 2012， 40（12）：23.

[3] 张绍琴， 李文旭， 犹卫. 几种海洋动物药中氨基酸的测定 [J]. 天然产品研讨与开发， 1993， 5（2）：37.

[4] 张晗， 张磊， 刘洋. 龙骨、牡蛎化学成分、药理效果比较研讨 [J]. 我国中药杂志， 2011， 36（13）：1839.

[5] 赵中杰， 江佩芬， 李昂. 海螵蛸中碳酸钙、微量元素和氨基酸的测定[J]. 我国中药杂志， 1990， 15（1）：41.

[6] 书正，陈鸿平，陈林，等. 石决明、牡蛎、珍珠母三味平肝潜阳药碳酸钙的含量测定及其比较研讨[J]. 中药与临床，2012，3（4）：10.

[7] Song J， Cheng H X， Shen X Y， et al. Characterization of calcium carbonate crystals in pigeon yolk sacs with different incubation times [J]. Micron， 2014，60：39.

Comparative analysis of seven marine biological source of mineral drugs

SI Wei1，2， A Ru-na1， LI Shang-rong2， ZHANG Jing-xian2， WU Wan-ying2*， CUI Ya-jun1*

（1.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine College of Traditional Chinese medicine， Shanghai 201203， China；

2. National Engineering Laboratory for TCM Standardization Technology， Shanghai Research Center for Modernization of

Traditional Chinese Medicine， Shanghai Institute of Materia Medica， Chinese Academy of Sciences， Shanghai 201203， China）

[Abstract]The marine biological source of mineral drugs recorded in Chinese Pharmacopoeia （2010 version） mainly including pearl， nacre， clam shell， common oyster shell， ark shell， cuttle bone， and sea-ear shell are widely used in clinical. Calcium carbonate and a small amount of protein are the main components in this type of drugs. In this paper， a systematical and comparable study were carried out by determination of calcium carbonate by EDTA titration method， the crystal of calcium carbonate by X-Ray powder diffraction and the total amino acids （TAAs） of the hydrolyzed samples by ultraviolet spectrophotometry method. As a result， the crystal structure is calcite for common oyster shell， mixture of calcite and aragonite for nacre and sea-ear shell， aragonite for the other drugs. The content of calcium carbonate ranged from 86% to 96%. Cuttle bone has the highest amount of TAAs among the seven drugs which reached 1.7% while clam shell has the lowest content of 0.16% on average. In conclusion， an effective method was developed for the quality control of marine mineral drugs by comprehensive analysis of calcium carbonate and TAAs in the seven marine mineral drugs.

[Key words]marine biological source of mineral drugs； X-ray powder diffraction； calcium carbonate； total amino acids； EDTA titration method； ultraviolot spectrophotometry method

doi：10.4268/cjcmm20141722

[责任编辑 孔晶晶]endprint