碘化钾滴眼液 复方碘化钾滴眼液无菌查看办法的验证
余晓霞 邱凯锋 廖庆权
【摘要】 意图 树立复方碘化钾滴眼液无菌查看办法。 办法 按《我国药典》2010年版二部无菌查看法中薄膜过滤法对复方碘化钾滴眼液的无菌查看办法进行验证。 成果 该制剂的无菌查看选用薄膜过滤法， 以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌， 冲刷总量100 ml。定论 经办法学验证， 该法可行， 成果牢靠。
【关键词】 复方碘化钾滴眼液；无菌查看；验证
Validation of sterility test of compound potassium iodide eye drops YU Xiao-xia， QIU Kai-feng， LIAO Qing-quan. Department of Pharmacy， Sun Yat-sen Memorial Hospital of Sun Yat-sen University， Guangzhou 510120， China
【Abstract】 Objective To establish the method of sterility test of compound potassium iodide eye drops. Methods According to sterility test in the appendix of Chinese Pharmacopoeia 2010 （section 2）， the membrane filteration used in the sterility test of compound potassium iodide eye drops was validated. Results The membrane filteration was used in the sterility test of compound potassium iodide eye drops， and staphylococcus aureus was used as positive control germs and the total amount of irrigation fluid was 100 ml. Conclusion Through the technological validation， the method is applicable and the result is reliable.
【Key words】 Compound potassium iodide eye drops； Sterility test； Validation
复方碘化钾滴眼液为中山大学孙逸仙留念医院制造的眼用制剂。其主要成分为碘化钾、碘化钠、维生素C和维生素B1等。具有弥补电离子和维生素的效果， 临床适用于前期白内障。《我国药典》2005年版仅要求滴眼液需做微生物极限查看[1]， 而《我国药典》2010年版对滴眼液的要求提高到无菌查看水平[2]。因而， 对复方碘化钾滴眼液无菌查看办法进行验证， 以确保办法的可行性和成果的牢靠性。
1 仪器与资料
1. 1 仪器 一次性全封闭无菌集菌过滤器（北京牛牛基因技能有限公司）、WJ-6无菌查看仪（天津罗根科技）、303A-1生化培育箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）、SPX-100B生化培育箱（上海悦丰仪器表有限公司）。
1. 2 试剂 养分琼脂培育基（批号：140308）， 玫瑰红钠琼脂培育基（批号：140228）， 养分肉汤培育基（批号：130521）， 改进马丁培育基（批号：1401222）， 改进马丁琼脂培育基（批号：130910）， 硫乙醇酸盐流体培育基（批号：1401152）， （以上均来源于北京三药科技开发公司）。复方碘化钾滴眼液（标准：10 ml/瓶， 批号：201312258、201312268、201312278， 中山大学孙逸仙留念医院）。
1. 3 菌种 大肠埃希菌（escherichia coli） [CMCC（B）44 102]， 枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis） [CMCC（B）63 501]， 金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）[CMCC（B）26 003]， 生孢梭菌（clostridum sporogens） [CMCC（B）64 941]， 白色念珠菌（candida albicans） [CMCC（F）98 001]， 黑曲霉（aspergillus niger） [CMCC（F）98 003]， 铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10 104]（以上菌种的冻干菌均购自我国食品药品生物检定研究院）。
2 办法与成果
2. 1 菌液制备 取经30～35℃培育18～24 h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培育物， 用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每毫升含菌数为<100 cfu的菌悬液。取经30～35℃培育18～24 h的生孢梭菌硫乙醇酸盐液体新鲜培育物， 用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每毫升含菌数<100 cfu的菌悬液。取经23～28℃培育24～48 h的白色念珠菌液体培育物， 用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每毫升含菌数<100 cfu的菌悬液。取经23～28℃ 培育1周的黑曲霉斜面培育物， 参加3～5 ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的 0.9%无菌氯化钠溶液， 将孢子洗脱。然后， 用适合的办法吸出孢子悬液至无菌试管内， 用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每毫升含孢子数<100 cfu的孢子悬液。（以上菌液的运用均不超越5代。）
2. 2 最少查验数量、查验量的断定 实验用样品的装量为10 ml， 按《我国药典》2010年版二部附录Ⅺ H无菌查看法表1， 最少查验数量应为10个；按表2， 每支供试品接入每种培育基的最少数为2 ml。
2. 3 供试品管的制备 取本品30支（批号：201312258、201312268、201312278）分2份， 15支/份， 用2套一次性三联管全封闭无菌集菌过滤器， 先用少数0.1%无菌蛋白胨水溶液湿润滤膜， 调理集菌仪转速为160 r/min， 按薄膜过滤法全量过滤， 每膜用0.1%无菌蛋白胨水溶液100 ml 分2次冲刷， 在最终50 ml冲刷液中参加菌液1 ml， 过滤至干， 作为供试品管。
2. 4 对看管的制备 取过滤器， 参加50 ml 0.1%无菌蛋白胨水溶液， 参加相应的菌液1 ml， 滤干， 作为对看管。
2. 5 无菌查看办法的验证 别离取含大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌和生孢梭菌的供试品管， 各参加硫乙醇酸盐流体培育基100 ml；含白色念珠菌和黑曲霉的供试品管， 各参加改进马丁培育基100 ml， 置相应培育温度培育。
取对看管6管， 其间4管别离参加硫乙醇酸盐流体培育基100 ml， 再别离参加大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌和生孢梭菌菌液各1 ml；另2管别离参加改进马丁培育基100 ml， 再别离参加白色念珠菌和黑曲霉菌液各1 ml， 置相应培育温度培育。一起， 取上述菌液各1 ml， 按微生物极限查看法平皿法（《我国药典》2010年版二部附录Ⅺ H）计数， 每个菌株平行制备2个平皿， 生孢梭菌用硫乙醇酸盐流体培育基作液体计数， 测定所加菌数。成果见表1。
3 小结
综上所述， 实验中与对看管比较， 供试品管中的实验菌均成长杰出， 阐明供试品在本法的查验条件下无抑菌效果或其抑菌效果能够忽略不计， 可照此查看办法和查看条件进行供试品的无菌查看。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）.北京：我国医药科技出版社， 2005：附录XIJ.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.（二部）.北京：我国医药科技出版社， 2010：附录XIH.
[收稿日期：2014-06-23]endprint