蜂胶怎么样用治伤口性关节炎：蜂胶对大鼠皮肤伤口愈合的影响
卞明心 沈若武 刘晓彤 李春雪 李玲 杨永华
[摘要] 意图 评论蜂胶对伤口愈合的影响，并开端评论伤口愈合机制。 办法 60只健康雄性Wistar大鼠随机分为试验组（伤口模型+蜂胶组）20只、对照组（伤口模型+碘伏组）20只、空白组（伤口模型+生理盐水组）20只，每组再随机分为5个时刻点（3、5、7、10、14 d），每组每时刻点各4只，选用手术法仿制大鼠背部皮肤全层1 cm×1 cm的伤口模型，每日换药。别离于各个时刻点处死大鼠，切取创面皮肤安排，核算伤口愈合率，经过HE染色调查创面安排学的改动，免疫安排化学染色法检测血管内皮成长因子（VEGF）和血小板源性成长因子（PDGF）的动态改动。 成果 与对照组比较，试验组能显着提高大鼠伤口愈合速度和愈合率（P<0.05或P<0.01）。与空白组比较，HE染色显现试验组毛细血管、胶原纤维增生显着，表皮再生彻底。免疫安排化学染色显现，试验组在3 d时VEGF表达水平显着高于对照组（P<0.05），试验组在5 d时PDGF表达水平显着高于对照组（P<0.05）。 定论 蜂胶在伤口修正愈合进程中起显着促进效果，可能与其促进血管生成、促进肉芽安排以及瘢痕安排增生等效果有关。
[关键词] 蜂胶；碘伏；伤口愈合；血管内皮成长因子；血小板源性成长因子；中草药
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）01（c）-0011-04
[Abstract] Objective To discuss the influence of propolis on wound healing and study preliminarily on the mechanism of wound healing. Methods 60 healthy and male Wistar rats were randomly divided into experimental group （wound model+propolis，n=20），control group （wound model+povidone iodine，n=20） and blank group （wound model+physiological saline，n=20）.Each group was then randomly divided into 5 time points：3 d，5 d，7 d，10 d and 14 d with there were 4 rats in each time point.The wound model was established by full-thickness skin injury in rats′ back in size of 1 cm×1 cm，changed dressings every day.The rats were executed in every time point and the injuried skin tissues were cut to calculate the wound healing rate，and the change of wound histology was observed by hematoxylin-eosin （HE） staining and the dyanmic change of vascular endothelial growth factor（VEGF） and platelet-derived growth factor（PDGF） was detected by immunohistochemical staining method respectively. Results Compared with control group，the experimental group could obviously improve the healing speed and healing rate of wound in rats （P<0.05 or P<0.01）.Compared with blank group，HE staining revealed that remarkable capillary and collagen fiber hyperplasia，and complete epidermal regeneration was observed in experimental group.Immunohistochemical staining revealed that the expression level of VEGF in experimental group was significantly higher than that of control group in 3 d （P<0.05）.The expression level of PDGF was greatly higher than that of control group in 5 d （P<0.05）. Conclusion The propolis plays a significant promotion role in healing and repair of wound，it may be related to promoting angiogenesis，the role of promoting proliferation of granulation tissue and scar tissue.promote the rebuilding of capillaries，acceletate the regeneration of the epidermis and facilitate the formation of scar.
[Key words] Propolis；Povidone-iodine；Wound healing；Vascular endothelial growth factor；Platelet-derived growth factor；Chinese herbal medicine
蜂胶的药用价值极高，其化学成分包含黄酮类化合物、烯、萜类化合物及很多微量元素等300多种成分，已被证明具有降血糖、抗菌、免疫增强、抗炎，抗氧化等多种药理效果[1-4]，其间抗菌与抗炎效果为伤口愈合供给了药理根底。近年来，国内外已有部分关于蜂胶促愈合的研讨，而在临床医治进程中，碘伏仍是外科伤口的首选消毒、促愈合药物。本文将蜂胶作为促愈合剂用于伤口模型，经过HE染色调查皮肤安排愈合进程，免疫安排化学染色动态调查血管内皮成长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、血小板源性成长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）的表达水平[5]，与碘伏进行比照，调查蜂胶对伤口愈合的影响并开端探究其机制。
1 材料与办法
1.1 试验动物及分组
成年健康的Wistar大鼠60只，雄性，15周，体质量（280±10）g，购自青岛市药品查验所试验动物中心，动物合格证号：SCXK（鲁）20100010。单笼单只养殖于28℃清洁级动物试验室内。随机分红试验组、对照组和空白组，每组20只。
1.2 伤口模型的树立与干涉办法
选用手术法切除大鼠背部皮肤进行造模[6]。造模当天以10%的水合氯醛（0.3 ml/100 g）腹腔打针麻醉，用剃毛器及脱毛剂于大鼠背部胸段两边脱毛，露出皮肤面积约24 cm2。用手术刀于胸段两边作1 cm×1 cm切断，切除全层皮肤至深筋膜，构成两个正方形创面。用无菌棉球擦洗止血，试验组涂改蜂胶（成都宝芝堂生物科技有限公司，G20100714），对照组涂改碘伏，空白组涂改生理盐水，摄影记载。用无菌纱布包扎，纱带固定。大鼠每日自在进食、饮水。每日换药，换药前记载伤口面积。
1.3 安排选材及处理
别离于手术后3、5、7、10、14 d灌流固定试验动物，每组4只，固定前记载伤口面积，不换药。切取以创面为中心的2 cm×2 cm安排块，每只取2块，惯例脱水，通明，白腊包埋，切片，每块安排切3张切片，每组24张，随机分为4个亚组，别离进行惯例HE染色，VEGF、PDGF检测选用SABC免疫安排化学染色，并严厉依照试剂盒阐明进行操作，光镜下调查安排改动。
1.4 免疫安排化学染色成果判别
每个亚组选取6张切片，400倍镜下随机选取5个视界，运用Simple-PCI图画剖析体系对安排相片进行定量剖析。VEGF的表达以阳性细胞表达百分比表明（阳性细胞百分比=阳性细胞数/视界总细胞数×100%）。阳性细胞首要为胞质上色，表达为棕黄色或棕褐色颗粒。判别规范如下：染色面积<10%（-），染色面积≥10%（+）。PDGF的表达以均匀光密度值表明，阳性细胞首要为胞质上色。
1.5 统计学处理
运用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理，计量材料以x±s表明，正态分布查验选用单样本Kolmogorov-Smirnov查验，查验契合正态分布后选用单因素方差剖析对各组均数进行比较，各组均数间两两比较选用SNK查验，以P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 3组不一起刻创面愈合率的比较
3 d时，各组间愈合率差异有统计学含义（F=10.56，P<0.01），经过SNK查验，试验组愈合率显着高于对照组（q=3.57，P<0.01），一起显着高于空白组（q=4.28，P<0.01）；5 d时，各组间愈合率差异有统计学含义（F=4.22，P<0.05），试验组愈合率显着高于空白组（q=2.75，P<0.05），对照组愈合率显着高于空白组（q=2.17，P<0.05）；7 d时，各组间愈合率差异有统计学含义（F=4.58，P<0.05），试验组愈合率显着高于空白组（q=2.77，P<0.05），对照组愈合率显着高于空白组（q=2.44，P<0.05）；10 d时，各组间愈合率差异无统计学含义（F=0.36，P>0.05）；14 d时，各组间愈合率差异有统计学含义（F=127.06，P<0.01），试验组愈合率显着高于对照组（q=5.66，P<0.05），一起显着高于空白组（q=15.74，P<0.01），对照组显着高于空白组（q=10.07，P<0.01）（表1）。
2.2 HE染色成果
3 d时，试验组与对照组仍有单核粒细胞渗出，伴有少数毛细血管增生，空白组中性粒细胞渗出显着，炎细胞滋润程度较高。5 d时，试验组呈现较多毛细血管增生，肉芽安排成长旺盛，成纤维细胞增生，伤口进入典型增殖期。对照组成纤维细胞数量较少，肉芽安排成长状况较弱。7 d时，试验组肉芽安排进一步成长，生发层开端增厚，毛细血管数量增多，表皮细胞开端从伤口边际向中心移行。对照组未见表皮细胞的增殖移行。10 d时，各组均有肉芽安排填埋伤口，纤维安排增生显着，瘢痕安排开端构成，试验组重生上皮较厚，移行较快。14 d时，试验组创面已被填埋，上皮完好，愈合基本完成；对照组与空白组上皮较薄，再生不彻底（图1）。
2.3 3组不一起刻VEGF、PDGF表达水平的比较
VEGF表达水平在3 d时，各组间表达差异有统计学含义（F=4.20，P<0.05），经过SNK查验，试验组VEGF表达水平显着高于对照组（q=2.66，P<0.05），一起显着高于空白组（q=2.32，P<0.05）；5 d时，各组间表达差异有统计学含义（F=3.94，P<0.05），试验组VEGF表达水平显着高于对照组（q=2.81，P<0.05）；7 d时，各组间表达差异有统计学含义（F=4.22，P<0.05），试验组VEGF表达水平显着高于对照组（q=2.56，P<0.05），空白组VEGF表达水平显着高于对照组（q=2.47，P<0.05）。PDGF表达水平在5 d时，各组间表达差异有统计学含义（F=6.48，P<0.05），经过SNK查验，试验组PDGF表达水平显着高于对照组（q=3.56，P<0.01）；7 d时，各组间表达差异有统计学含义（F=7.685，P<0.01），试验组PDGF表达水平显着高于对照组（q=3.84，P<0.01），空白组PDGF表达水平显着高于对照组（q=2.59，P<0.05）；10 d时，各组间表达差异有统计学含义（F=6.47，P<0.05），对照组PDGF表达水平显着高于试验组（q=3.57，P<0.01）；14 d时，各组间表达差异有统计学含义（F=8.61，P<0.01），试验组PDGF表达水平显着低于对照组（q=3.78，P<0.01），一起显着低于空白组（q=3.37，P<0.01）（表2、图2）。
3 评论
蜂胶广泛的药理效果使其即可内服又可外用，而且具有外用伤口药的遍及效果效果[7-8]，在2010年版的《中华人民共和国药典》（简称《我国药典》）中就记载了蜂胶“外用解毒消肿，收敛生肌”的成效[9]，促愈合效果明显。
本试验成果显现，对照组、试验组的伤口愈合率均显着高于空白组（P<0.05），阐明蜂胶具有显着促进伤口愈合的效果。3 d时，试验组伤口愈合率显着高于对照组（P<0.05），阐明蜂胶与碘伏比较，可以有用促进创面的缩短，削减创面面积及表皮匍匐规模，加快愈合。从惯例HE染色成果得出，试验组肉芽安排从3 d开端呈现显着增殖现象，肉芽毛细血管丰厚，成长旺盛，加快愈合，阐明蜂胶能加快肉芽安排的构成，在必定程度上促进成纤维细胞的增殖，使伤口修正加快进入增殖期。
VEGF是特异性最高一起也是效果最强的血管成长因子，其可促进血管内皮祖细胞增殖，添加血管的通透性，促进血管的生成，一起与肿瘤的发作、开展具有必定的相关性[10-12]。琚晨焰等[13]发现，胃癌安排中VEGF阳性表达率显着较高，与胃癌的开展、侵袭和搬运有密切关系。经过动物试验，陈芳等[14]发现，VEGF高水平表达极大地促进了肿瘤血管的成长，对血管内皮细胞的损害具有拮抗效果。伤口安排中丰厚的重生血管为创面供给了足够的氧气和营养物质，确保了肉芽安排敏捷增生。本研讨免疫安排化学染色中，VEGF在伤口愈合前期起明显效果，试验组3 d时表达水平与对照组、空白组比较差异均有统计学含义（P<0.05），阐明试验组能有用影响VEGF的生成，促进伤口安排毛细血管的增生、增殖，为创面愈合供给必需的物质条件。
PDGF能使成纤维细胞和血管内皮细胞直接参与肉芽安排的构成，促进炎症细胞的滋润，促进细胞产品增多，使胶原组成增多，还可以促进VEGF转录和排泄然后促进血管生成[15-18]。Hom等[19]经过病例研讨发现，运用PDGF医治可以促进患者伤口内肉芽安排得到充沛填埋； LaRochelle等[20]发现，PDGF与卵巢、肾、肺等部位的癌症患者均有必定的相关性，可促进肿瘤的侵袭。创面安排中PDGF的含量凹凸可以很好地反映创面增殖期伤口的愈合状况。本研讨免疫安排化学染色中，PDGF在5 d时呈高表达，5、7 d时表达水平与对照组比较差异有统计学含义（P<0.05），阐明试验组可以更早构成很多的肉芽安排，激起肉芽安排的增殖成长，加快创面充填，加快愈合。
综上所述，蜂胶在伤口修正方面效果可观，与单纯擦洗碘伏比较具有更好的促愈合效果，值得在临床伤口修正医治中推广运用。
称谢：感谢夏玉军教授对文章评论部分提出的宝贵意见，感谢李阳、严金光同学对试验进程的大力协助。
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（收稿日期：2015-09-23 本文修改：许俊琴）