臭氧治膝关节炎 医用臭氧对兔膝骨关节炎炎性因子水平的影响

陈小刚++++++吕一++++++李桂锦++++++曾宇晴

[摘要] 意图 觀察医用臭氧在兔膝骨关节炎中的使用及对关节滑液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）水平的影响。 办法 取新西兰大白兔60只，选用改进Hulth法树立兔膝骨关节炎模型。根据处理办法不同分为空白对照组（n=20）、对照组（n=20）及调查组（n=20）。空白对照组不采纳任何办法处理，对照组灌服生理盐水医治，调查组选用医用臭氧医治。选用酶联免疫吸附试验测定三组医治前后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平，比较三组医治作用。 成果 调查组大白兔选用医用臭氧进行6周处理后关节软骨光泽亮堂，润滑无裂纹，滑膜为白色、光泽、润滑，滑液量相对较少，无色；对照组新西兰大白兔部分软化，部分大白兔出血溃疡，滑膜充血、水肿，而且滑液量相对较多。三组处理前TNF-α、IL-1β、MMP-1水平比较差异无统计学含义（P>0.05）；调查组处理后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平低于对照组和空白对照组（P<0.05），对照组处理后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平低于空白对照组（P<0.05）。 定论 选用医用臭氧医治兔膝骨关节炎作用抱负，能下降关节滑液中TNF-α、IL-1β、MMP-1水平。

[关键词] 医用臭氧；兔膝骨关节炎；关节滑液；TNF-α；IL-1β；MMP-1

[中图分类号] R684.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）34-0004-04

Effect of medical ozone on the levels of inflammatory factors of knee osteoarthritis in rabbits

CHEN Xiaogang LV Yi LI Guijin ZENG Yuqing

Department of Orthopedics， the Third Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University， Hangzhou 310005， China

[Abstract] Objective To observe the application of medical ozone in rabbit knee osteoarthritis and to investigate its effect on the levels of tumor necrosis factor （TNF-α）， interleukin （IL-1β） and matrix metalloproteinase-1（MMP-1） in synovial fluid. Methods 60 New Zealand white rabbits were collected， and the model of rabbit knee osteoarthritis was established by modified Hulth method. They were assigned to the blank control group （n=20）， the control group （n=20） and the observation group（n=20） according to the different treatment methods. The blank control group was not given any treatment method， the control group was orally given normal saline， and the observation group was treated with medical ozone. The level of TNF-α， IL-1β and MMP-1 in the three groups before and after treatment were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. The curative effect was compared among three groups. Results The rabbits in the observation group were treated with medical ozone for 6 weeks. The articular cartilage was bright and smooth without cracks. The synovium was white， shiny， and smooth. The amount of synovial fluid was relatively small and colorless. The local part was softened in the New Zealand rabbits in the control group. Hemorrhage ulcer， synovial congestion and edema could be observed in some rabbits， and the amount of synovial fluid was relatively much； there was no statistically significant difference in the levels of TNF-α， IL-1β and MMP-1 among three groups before the treatment（P>0.05）； the levels of TNF-α， IL-1β and MMP-1 in the observation group after treatment were lower than those in the control group and the blank control group（P<0.05）. The levels of TNF-α， IL-1β and MMP-1 in the control group after the treatment were lower than those in the blank control group（P<0.05）. Conclusion The therapeutic effect of medical ozone in the treatment of knee osteoarthritis is ideal， which can decrease the levels of TNF-α， IL-1β and MMP-1 in synovial fluid.

[Key words] Medical ozone； Rabbit knee osteoarthritis； Synovial fluid； TNF-α； IL-1β； MMP-1

骨性关节炎（osteoarthritis，OA）是临床上常见的疾病，该疾病归于退行性骨关节病，具有较高的发病率、致残率，患者发病后假如不采纳有用的办法医治，将会诱发其他疾病，严重影响患者日子质量[1]。现在，临床上关于OA以对症支撑医治、关节镜整理、人工关节置换术为主，这些办法虽然能改进患者症状，可是长时间作用欠佳，手术医治费用相对较高，医治习惯证较窄，难以满意每位患者医治需求[2，3]。文献报导显现[4，5]，近年来打针疗法因其具有较好的作用、相对减轻全身用药后对身体的副作用少及较低的费用而发展迅速，已广泛使用于临床，其间医用臭氧在OA患者中作用抱负，该办法能有用改进机体症状，促进机体恢复，可是其详细机制尚不彻底知晓。为评论医用臭氧在兔膝骨关节炎中的使用及对关节滑液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）水平的影响，选取2015年1月～2016年7月校动物试验室的新西兰大白兔60只进行试验，现报导如下。

1材料与办法

1.1一般材料

取新西兰大白兔60只，根据处理办法不同分为空白对照组（n=20）、对照组（n=20）及调查组（n=20），男女随机，体重1.6～3.0 kg，均匀（2.3±0.4）kg，所选动物由校动物试验中心供给，动物批号[（2014）120482551]。试验过程中对新西兰大白兔养殖、处理均契合《关于善待试验动物的指导性定见》相关规矩。一切试验均经过医院动物委员会赞同赞同。

1.2 首要仪器和试剂

为确保试验的顺利完成，选用的首要仪器和试剂有动物手术器械一套（试验室前期克己）、-70℃超低温冰箱（试验室供给）、超净工作台（日本Olympus公司）、低速冷冻离心机（北京鼎国生物公司）、离心管、微量加样器（试验室供给）。

1.3 办法

1.3.1 模型的树立 三组均在两边膝关节施行手术，选用改进Hulth法树立兔膝骨关节炎模型，树立模型前选用0.1 mg/kg、浓度为2%的戊巴比妥钠进行耳缘静脉麻醉，术区备皮，惯例消毒后，行膝内侧纵行堵截，逐层切开后充沛露出内侧副韧带，切开关节囊，将兔内侧副韧带、内侧半月板及前穿插韧带堵截，树立兔膝骨关节炎模型。术后新西兰大白兔分笼养殖，不固定伤肢，每只大白兔树立模型后打针40万单位青霉素，接连打针3 d防备感染[6，7]。

1.3.2 处理办法 三组大白兔树立模型后7 d开端施行相应的办法处理。空白对照组不采纳任何办法处理。对照组灌服生理盐水医治，对大白兔每天灌服10 mL生理盐水，每天3次，接连灌服6周（1个阶段）。调查组选用医用臭氧医治，新西兰大白兔仰卧在操作台上，膝关节下垫一个枕头，调整体位充沛露出膝关节。选用2～5 mL浓度为2%的利多卡因麻醉，选用5号针头抽取5 mL膝关节积液，向双膝关节腔内一次性打针浓度为40 μg/mL的医用臭氧5 mL，打针结束后进行包扎[8，9]。

1.4 检测办法

三组医治前后选用5 mL空针抽取2 mL生理盐水，缓慢注入关节腔内，待关节腔周围安排胀大后中止注入，重复抽吸，移到试管内待检。选用酶联免疫吸附试验测定三组医治前后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平，相关操作过程有必要严厉遵从仪器、试剂盒操作阐明[10，11]。

1.5 调查目标

（1）大体调查。三组大白兔处理6周后处死，调查三组新西兰大白兔膝关节形状、光泽、滑液量等。（2）检测TNF-α、IL-1β、MMP-1水平。调查三组处理前后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平。

1.6 统计学剖析

选用SPSS18.0统计学软件处理数据，计数材料以[n（%）]标明，选用χ2查验，计量材料以（x±s）标明，选用t查验及方差剖析，P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 三组大白兔处理6周后膝关节形状

调查组大白兔选用医用臭氧进行6周处理后关节软骨光泽亮堂，润滑无裂纹，滑膜为白色、光泽、润滑，滑液量相对较少，无色；对照组新西兰大白兔部分软化，部分大白兔出血溃疡，滑膜充血、水肿，而且滑液量相对较多，见图1。

2.2 三组大白兔处理前后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平比较

三组大白兔处理前TNF-α、IL-1β、MMP-1水平比较差异无统计学含义（P>0.05）；调查组处理后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平低于对照组和空白对照组（P<0.05），对照组处理后TNF-α、IL-1β、MMP-1水平低于空白对照组（P<0.05），见表1。

3评论

骨性关节炎是临床上常见的疾病，它是一种病因不同，可是生物学、形状学及临床表现类似的疾病，患者发病后不只会引起关节软骨危害，还会累及整个滑膜、软骨、下骨、关节囊和关节周围肌肉，严重者终究会引起关节软骨退变、纤维化、溃疡等，乃至要挟整个关节面。文献报导标明，骨关节炎的发作与炎症、伤口、年纪及肥壮等有关。患者发病后临床表现为关节软骨退变、软骨下硬化、滑膜安排增生等。近年來，医用臭氧在骨关节炎中得到使用，且作用抱负。本课题以大白兔为研讨目标，选用医用臭氧进行医治。本研讨中，调查组大白兔选用医用臭氧进行6周处理后关节软骨光泽亮堂，润滑无裂纹，滑膜为白色、光泽、润滑，滑液量相对较少，无色；对照组新西兰大白兔部分软化，部分大白兔出血溃疡，滑膜充血、水肿，而且滑液量相对较多。医用臭氧是氧气与臭氧根据必定的份额混合的气体，其首要有用成分为臭氧，它是氧的同素异形体，分子由动态不稳定结构的三个氧原子组成，而且化学功用极端不稳定[12-14]。一起，臭氧仍是一种强氧化剂，具有较强的氧化消毒、灭菌才能，能产日子性氧和脂质过氧化物，然后发挥疾病医治作用。国内学者[15]进行一项试验，试验中将48例OA患者随机分为臭氧医治组与玻璃酸钠医治组，比较患者医治前后VAS及关节功用状况，成果显现在免除关节痛苦及关节功用改进的优良率方面，臭氧医治组优于玻璃酸钠组（P<0.05），一起，组间患者医治不良反应发作率比较差异无统计学含义。现在，临床上关于OA的发病机制尚不彻底知晓，发病后以关节软骨降解为主，而TNF-α、IL-1β、MMP-1水平在OA的发作、发展中均发挥重要的作用，医用臭氧的运用能有用地缓解机体关节活动才能约束，然后改进机体关节滑液的氧平衡，及时铲除体内的自由基，减轻氧化压力，然后缓解机体炎症，促进机体病灶关节前期恢复[15-19]。从本研讨能够看出，医用臭氧的使用能下降关节滑液中TNF-α、IL-1β、MMP-1水平，快速改进机体症状，为后续医治奠定根底。可是，关于单一选用臭氧医治作用不抱负者，则能够联合其他办法医治，发挥不同医治计划优势，到达优势互补，进步临床医治作用。

综上所述，兔膝骨关节炎选用医用臭氧医治作用抱负，能下降关节滑液中TNF-α、IL-1β、MMP-1水平，为临床医治膝骨关节炎供给根据和参阅。

[参阅文献]

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（收稿日期：2016-09-22）