紫外线过敏症状 黄芪多糖对中波紫外线辐射皮肤角质构成细胞损害的影响
李杨 安方玉 明海霞 刘永琦
摘要：意图 调查黄芪多糖对中波紫外线（UVB）辐射损害皮肤角质构成细胞（HaCaT细胞）的影响，开始评论其效果机制。办法 选用UVB辐射HaCaT细胞进行造模。分为空白对照组、模型组、阳性对照组及黄芪多糖低、中、高剂量组，各药物组给予相应药物干涉。MTT法测定细胞生机；生化比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量；ELISA检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）含量。成果 与空白对照组比较，模型组SOD、CAT、GSH-Px含量下降，MDA、TNF-α、IL-6含量升高（P<0.05）；与模型组比较，各药物组SOD、GSH-Px、CAT含量升高，MDA、TNF-α、IL-6含量下降（P<0.01）。定论 黄芪多糖可在必定程度上减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损害。
要害词：黄芪多糖；中波紫外线；皮肤角质构成细胞；维护效果
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）05-0044-03
Effects of Astragalus Polysaccharides on Damage of Keratinocytes in UVB Radiation Skin LI Yang， An Fang-yu， Ming Hai-xia， LIU Yong-qi （Provincial-Level Key Laboratory for Molecular Medicine of Major Diseases and the Prevention and Treatment with Traditional Chinese Medicine Research， Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China）
Abstract： Objective To investigate the effects of Astragalus polysaccharide （APS） on damage of keratinocytes in ultraviolet B （UVB） radiation skin in HaCaT cells； To preliminarily explore its mechanism of action. Methods HaCaT cells were treated by UVB irradiated for modeling. Blank control group， model group， UVB irradiation group and low-， medium- and high-dose APS interventional groups were set up. Each medication group was given relevant medicine. MTT assay was used to determine the cell activity； GSH-Px， CAT， SOD activity and MDA content were detected by biochemical colorimetric method； contents of TNF-α and IL-6 were detected by ELISA. Results Compared with the control group， the contents of SOD， CAT and GSH-Px in the model group decreased significantly， while the contents of MDA， TNF-α and IL-6 increased significantly （P<0.05）； compared with the mode group， the contents of SOD， CAT and GSH-Px in the medication groups increased significantly， while the contents of MDA， TNF-α and IL-6 were reduced significantly （P<0.01）. Conclusion APS can reduce the oxidative stress injury of UVB to HaCaT cells to some extent.
Key words： Astragalus polysaccharides； ultraviolet B； HaCaT cells； protective effect
黄芪为豆科草本植物内蒙黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var. mongholicus（Beg.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）
基金项目：甘肃省高校严峻疾病分子医学与中医药防治研讨省级重点试验室培育基金项目（2013年）
通讯作者：刘永琦，E-mail：liuyongqi73@163.com
Bge.的枯燥根，有补气固表、托毒排脓、敛疮生肌等成效。黄芪含有多糖、皂苷、黄酮等多种有用成分，其间黄芪多糖（Astragalus polysaccharide，APS）是其首要有用成分之一，具有抗炎、抗氧化和调理机体免疫等成效。黄芪作为增强体质、扶正固本、延年益寿之要药，古今中外研讨许多，但没有见抗紫外线损害的相关研讨报导。本试验在体外培育皮肤角质构成细胞（HaCaT细胞），以必定剂量中波紫外线（UVB）辐射树立模型，调查APS对UVB辐射损害皮肤HaCaT的影响，开始评论其效果机制。
1 试验资料
1.1 药物
APS，陕西昂盛生物医药科技有限公司，批号Uhqdt130527；使用时将APS干粉剂用生理盐水溶解，灭菌，4 ℃冰箱保存备用；维生素C片，广东华南药业有限公司，批号140406。
1.2 细胞株
HaCaT细胞株，上海轩研生物科技有限公司。
1.3 首要试剂与仪器
胎牛血清、HyClone High Glucose DMEM、磷酸盐缓冲液（PBS），赛默飞世尔生物化学制品有限公司；噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO），索莱宝科技有限公司；胰蛋白酶，Gibco公司；过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程研讨所；白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）酶联免疫试剂盒，北京福瑞生物工程公司。紫外分光光度计（上海精细科学仪器有限公司），UVB辐射度监视器、SUV-100UVB辐射仪（美国SIGMA公司），CO2细胞培育箱（香港力康发展有限公司），超速离心机（金坛市恒丰仪器厂）。
2 试验办法
2.1 细胞培育、分组及处理
将HaCaT细胞培育于含10%胎牛血清的DMEM 培育基中（含青、链霉素各100 IU/mL），37 ℃、5%CO2饱满湿度的培育箱中惯例培育，当细胞达90%融合时弃去培育液，PBS冲刷3遍，加2 mL胰酶，置于孵育箱中消化10 min，当细胞变圆、空隙变大时参加DMEM培育基停止消化，用无菌吸管吹打成单个细胞，1000 r/min离心5 min，弃上清液并参加培育基吹打成细胞悬液，以1∶2份额传代，取得满足的细胞用于试验。取对数生长期3～5代的HaCaT细胞接种于96孔板内，分为空白对照组、模型组、阳性对照组和APS低、中、高剂量组。空白对照组为正常培育细胞；模型组细胞以紫外线辐射损害细胞[1]；APS低、中、高剂量组细胞别离在APS 100、200、400 μg/mL培育液中预孵育24 h后，别离以紫外线辐射损害细胞；阳性对照组细胞在含有5.68 mmol/L维生素C的培育液中预孵育24 h后，紫外线辐射损害。调整细胞密度为1×105个/mL接种于96孔培育板中，空白对照组用锡箔纸隐瞒，其他各组UVB照耀前汲取培育液并参加PBS掩盖细胞上层，以防止细胞枯燥，露出于15 W UVB灯管下辐照，间隔20 cm，时刻30 min，辐射总剂量别离为30 mJ/cm2 UVB和60 mJ/cm2 UVB后弃去PBS，再别离参加培育液，空白对照组和模型组参加等量培育液，各药物组弃去PBS，参加含药物DMEM培育液持续培育24 h，搜集细胞和培育液进行检测。
2.2 MTT法测定HaCaT细胞生机
各孔加MTT 20 μL持续培育4 h停止，吸去上清液并加200 μL DMSO，常温振动15 min，于酶标仪波长490 nm处测定各孔吸光度（OD）值，记载成果。
2.3 目标检测
搜集各组细胞上清液，生化比色法测定SOD、GSH-Px、CAT、MDA含量，ELISA检测TNF-α、IL-6含量，均严厉参照试剂盒阐明进行检测。
3 计算学办法
选用SPSS17.0计算软件进行剖析。试验数据以—x±s表明，选用方差剖析。P<0.05表明差异有计算学含义。
4 成果
4.1 黄芪多糖对HaCaT细胞生机的影响
MTT测定成果显现，当UVB辐射为0 mJ/cm2时，各药物组细胞生机与模型组比较无显着差异，阐明所加药物对正常的HaCaT细胞无毒性效果；经不同剂量UVB辐射后，模型组细胞生机显着低于APS中、高剂量组和阳性对照组（P<0.05，P<0.01），阐明APS可下降UVB对HaCaT细胞生机的抑制效果。成果见表1。
4.2 黄芪多糖对HaCaT细胞相关目标含量的影响
与空白对照组比较，模型组SOD、CAT、GSH-Px含量均显着下降，MDA、TNF-α、IL-6含量均显着升高（P<0.05）；与模型组比较，APS高、中剂量组和阳性对照组SOD、GSH-Px、CAT含量均显着升高，MDA、TNF-α、IL-6含量均显着下降（P<0.01）；APS中、高剂量组和阳性对照组比较，各项目标无显着差异。成果见表2、表3。
5 评论
UVB首要的靶细胞是HaCaT细胞，UVB可构成HaCaT细胞生物学特性的一些改动，导致各种皮肤病。因而，UVB在紫外线对皮肤损害中占重要位置。
中医学以为，正气亏虚，邪气浑水摸鱼，皮肤病的发作是机体脾肺功用下降，调理失衡所造成的；现代医学以为，当免疫系统失掉监控功用就会导致疾病的发作，这一观念与中医学理论相一致。近年来，中药对皮肤的光维护效果日益遭到重视和使用。研讨发现，黄芪制剂有抗皮肤老化和抗紫外线的效果[2]。根据黄芪“走表”的中医理论，辨证选用“补法”调理脾肺之气，运用其调理人体免疫功用的效果，医治多种皮肤病均取得了满足的效果[3]。
露出在皮肤的HaCaT细胞很简单遭到各种物理、化学要素的侵袭并发生氧化应激性的损害。正常的皮肤细胞有较完善的氧化/抗氧化系统，这些防护系统包含SOD、GSH-Px、CAT等。SOD是机体有用铲除活性氧重要酶类之一，维护细胞免受损害，是体内抗氧化酶系统的重要组成部分，其含量可直接反映机体铲除氧自由基的才能。张氏等[4]研讨发现，APS经过进步SOD含量，加强对氧自由基的铲除效果，然后发挥其抗氧化的效果。GSH-Px是机体内存在的催化H2O2分化的酶，可维护细胞膜结构、功用的完好；CAT是一种酶类铲除剂，是生物防护系统的要害酶之一，它促进H2O2分化为氧分子和水，铲除机体内的H2O2，可使细胞免于遭受H2O2的毒害；MDA含量可反映机体内脂质过氧化程度，直接反映受自由基进犯的严峻程度，它是氧化过程中的终究产品之一，是氧自由基进犯生物膜中多不饱满脂肪酸引起脂质过氧化反响而构成的过氧化脂质降解产品。HaCaT细胞在UVB辐射后可开释TNF-α、IL-6、IL-1β等多种促炎症因子。TNF-α是细胞因子网络中心之一，可导致其他多种细胞因子的开释引起细胞凋亡；IL-6是角质构成细胞与成纤维细胞相互效果环路的中介物质，是机体免疫防护、炎症损害中的重要介质，其首要免疫学功用是加强其他细胞因子的效果，IL-6排泄或基因表达反常均可导致一系列疾病。本试验成果显现，APS能进步HaCaT细胞SOD、GSH-Px、CAT的含量，下降MDA、TNF-α和IL-6的含量。
综上，APS可在必定程度上减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损害，增强细胞抗氧化才能，下降炎症细胞因子的排泄，减轻细胞受损程度。
参考文献：
[1] 高薇，侯微，李伟，等.UVB辐射HaCaT细胞损害模型的树立[J].中药药理与临床，2014，30（5）：136-139.
[2] 陈斌，健康，吕中明，等.黄芪甲甙对中波紫外线损害皮肤角质构成细胞的维护效果[J].我国中西医结合皮肤性病学杂志，2009，8（1）：1-4.
[3] 沈晓峰，房新志，宋东.黄芪在皮肤病医治中的使用[J].新疆中医药， 2000，18（2）：57-59.
[4] 张灼，陈立新，宋崇顺，等.黄芪多糖对大鼠心肌缺血-再灌注损害后的维护效果[J].我国中医药信息杂志，2007，14（2）：33-34.