芪参益气滴丸 芪参益气滴丸对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化的影响
李良萍+冯越+杨家虎
[摘要] 意图 评论芪参益气滴丸对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞纤维化的影响。 办法 将成功构建糖尿病模型的30只Wistar大鼠随机分为对照组和医治组，每组各15只。医治组给予芪参益气滴丸混悬液35 mg/（kg·d）灌胃，对照组给予等量生理盐水灌胃。两组别离于第3、6、9、12、15周处死大鼠，每组3只。选用TTC染色调查心肌梗死区域，选用Masson染色觀察心肌安排胶原状况。 成果 Masson 染色显现第9、12、15周医治组大鼠心肌间质胶原纤维较对照组削减。第12、15周医治组大鼠心肌胶原纤维面积百分比低于对照组（P<0.05）。 定论 芪参益气滴丸具有按捺糖尿病心肌纤维化发作的效果，可防备糖尿病大鼠心肌纤维化。
[关键词] 芪参益气滴丸；糖尿病心肌病；大鼠；心肌纤维化
[中图分类号] R587.2；R542.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）35-0032-03
[Abstract] Objective To investigate the effect of Qishenyiqi dropping pills on cardiomyocyte fibrosis in diabetic cardiomyopathy rats. Methods 30 successfully constructed diabetic model Wistar rats were randomly divided into control group（n=15） and treatment group（n=15）. The treatment group was given Qishenyiqi dropping suspension 35 mg/（kg·d） gavage， and the control group was given the same amount of saline gavage. The rats in both groups were sacrificed at the third week， the sixth week， the ninth week， the twelfth week and the fifteenth week， with 3 rats in each group. TTC staining was used to observe the myocardial infarction area. Masson staining was used to observe the myocardial collagen. Results Masson staining showed that the myocardial interstitial collagen fibers in the treatment group were lower than those in the control group in the ninth week， the twelfth week and the fifteenth week. The percentage of myocardial collagen fibers area in the treatment group was lower than that in the control group in the twelfth week and the fifteenth week（P<0.05）. Conclusion Qishenyiqi dropping pills can inhibit the occurrence of diabetic myocardial fibrosis and prevent myocardial fibrosis in diabetic rats.
[Key words] Qishenyiqi dropping pills； Diabetic cardiomyopathy； Rat； Myocardial fibrosis
糖尿病心肌病（Diabetic Cardiomyopathy，DCM）是糖尿病发病进程中发作的特异性心肌危害，是糖尿病的首要并发症之一。一般以为长时间的糖脂代谢紊乱影响糖尿病患者心肌安排的代谢，引起心肌微血管病变，导致大范围的心肌结构反常，然后发作左心室肥壮、缩短及舒张功用妨碍，终究可导致心力衰竭的构成。糖尿病心肌病的首要病理改动为心肌细胞肥壮、凋亡和心脏间质纤维化。这种病理生理改动与高血压、心肌缺血等危害要素无显着相关[1]。芪参益气滴丸是由黄芪、丹参、三七、降香经科学配伍，提取有用化学成分精制而成的现代中药滴丸剂型，方中重用黄芪，取其大补元气，使气旺以促血行，祛瘀而不伤正；气旺以促津行，行津利尿，则水肿自消。丹参具有活血祛瘀、通经止痛的效果。三七具有通络效果，与丹参共为臣药。降香气香辛散，温通行滞。诸药合用益气活血，利水消肿，通络止痛，得以气血运转正常，诸证自愈[2]。许多现代药理研讨也从不同的研讨方向为芪参益气滴丸改进心脏功用的效果机制供给了根据[3-5]。本研讨经过树立糖尿病心肌病大鼠模型，评论芪参益气滴丸对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化的影响，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 试验动物
40只Wistar大鼠，雄性，体重200～220 g，8周龄，购于浙江省试验动物中心，出产许可证号：SCXK（浙）2014-0001。一切动物于浙江省试验动物中心屏障环境养殖，运用许可证号：SYXK（浙）2014-0008。
1.2 药品与试剂
高脂高糖饲料（浙江省试验动物中心制备），链脲佐菌素（STZ）（Sigma公司，批号：WXBC2044V），羧甲基纤维素钠（成都市科龙化工试剂厂，批号2014052901），芪参益气滴丸（为中药提纯浸膏，首要成分为黄芪261 g、丹参240 g、三七42 g、降香19 g，由天津天士力制药股份有限公司出产），三诺安稳血糖测试仪+三诺安稳血糖试条（试条批号：2622NK），0.9%氯化钠打针液（浙江莎普爱思药业股份有限公司，批号：130629-2），碘伏（德州欣瑞达消毒制品有限公司，批号：120712）。endprint
1.3 糖尿病大鼠模型构建
40只8周龄Wistar大鼠，习惯养殖1周后，给予高脂高糖膳食4周，促发胰岛素反抗，继以腹腔打针2次链脲佐菌素（STZ）（25 mg/kg+m2），距离2 d]。调查大鼠的状况，于第2次腹腔打针STZ第6天，丈量禁食血糖（FBG）、随机血糖，以2次禁食血糖（FBG）≥11.1 mmol/L或（和）随机血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病大鼠成功造模规范[6]。
1.4 动物给药
将上述成功构建糖尿病模型的大鼠30只随机分为医治组和对照组，每组各15只。称取必定量的芪参益气滴丸，用0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）配成芪参益气滴丸混悬液。医治组给予芪参益气滴丸混悬液灌胃，每日给药剂量为35mg/kg。对照组予以等量生理盐水灌胃。两组别离于灌胃第3、6、9、12、15周处死大鼠，每次两组各3只。
1.5 调查目标
1.5.1 TTC染色调查心肌梗死区域 别离于灌胃第3、6周后，麻醉快速处死医治组和对照组大鼠，取新鲜的心脏安排，置于-20℃速冻30 min。将冷冻的心脏安排制造成切片，厚3～5 mm，接连切片；将安排切片置于装有TTC染色液的器皿中，37℃避光孵育20～30 min，在孵育进程中，需调查样本的色彩改动；取出染色后的安排切片，用安排冲刷使用液将安排外表剩余的染色液冲刷掉；肉眼调查并摄影剖析。
1.5.2 Masson 染色调查心肌安排纤维化程度 医治组和对照组大鼠别离于第9、12、15 周灌胃医治后，称体重，然后麻醉快速处死，取新鲜的心脏经过安排包埋，制造切片。别离进行Masson丽春红和苯胺蓝染色，封片后于显微镜下调查心肌安排纤维化状况。每只大鼠取切片两张，200倍下随机挑选视界6处，使用Image J软件进行图画剖析，核算心肌胶原纤维面积占整个心肌安排面积的百分比。
1.6 统计学办法
使用SPSS22.0软件进行统计学剖析，计量材料以均数±规范差（x±s）标明，一切数据经正态查验及方差齐性剖析，选用两独立样本t查验。P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 TTC染色成果
TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光灵敏复合物，是呼吸链中吡啶核苷结合酶系统的质子受体。TTC 与正常安排中的呼吸酶反响呈赤色，而缺血安排内呼吸酶活性下降，不能反响，不发作改动呈白色，即非梗死区染为赤色，梗死区染为灰白色，赤色区与白色区之间为缺血区，试验成果见封三图2、3。根据成果图片，心肌安排经 TTC 染色后仍为赤色，未发现灰白色区，所以第3周、第6周糖尿病心肌病大鼠未见显着心肌梗死区域。
2.2 Masson 染色成果
Masson 染色时胶原纤维呈蓝色（被苯胺蓝所染），肌纤维呈赤色（被丽春红所染）。对照组大鼠心肌间质、血管周围蓝色胶原纤维显着增多，摆放紊乱；医治组大鼠心肌间质胶原纤维较对照组显着削减。试验成果见封三图4～6。
2.3 对照组与医治组大鼠心肌胶原纤维面积百分比比较
第12、15周医治组大鼠心肌胶原纤维面积百分比较对照组显着削减。见表1、封三图7。
3 评论
跟着现在糖尿病的高发，糖尿病心肌病也出现上升趋势。Framingham心脏研讨中心的研讨显现：糖尿病患者罹患心力衰竭的可能性是同龄健康对照男性的2倍和女人的5倍[7]。
糖尿病心肌病被界说为糖尿病所造成的患者的心肌运动功用妨碍及心脏结构改动[8]。但现在糖尿病导致心肌危害的发病机制尚不清晰，在糖尿病心肌改动进程中存在细胞氧化危害、糖脂代谢反常以及心肌细胞外基质堆积等病理改动[9，10]，与心肌微血管病变、大范围心肌结构反常相关，然后发作左心室肥壮、缩短及舒张功用妨碍，终究可导致心力衰竭的构成。虽然很多的临床和流行病学数据均标明糖尿病患者罹患心肌梗死的危险显着添加，且前期和晚期的死亡率均高于非糖尿病患者，但关于糖尿病动物模型对缺血的灵敏性依然存在争议。对此，现在的研讨多以为与糖尿病的严重性、病程、试验动物的种属、动物模型（体内或体外）及操作进程有关[11，12]。本研讨中第3、6周糖尿病心肌病大鼠的心肌安排经TTC染色后未见显着心肌梗死区域，可能与大鼠的糖尿病病程较短有关，详细原因值得进一步评论。
现代医学的开展使得中医药对糖尿病心肌病也有深化的研讨。芪参益气滴丸包含黄芪、丹参、三七以及降香，提取其间有用的化学成分制造而成。许多现代药理研讨从不同的研讨方向为芪参益气滴丸改进心脏功用的效果机制供给根据。长时间高血糖时，因为葡萄糖转运因子1与4的损耗，葡萄糖由外界进入心肌细胞的速度及数量均下降，导致心肌细胞供能妨碍[13]。一起体内过量的糖本身代谢添加，发作很多反响性氧簇（ROS），发动氧化应激反响，导致糖基化终末产品（AGEs）过度堆集，AGEs可联合细胞表里胶原安排并导致纤维安排堆集[14]。黄芪的首要活性成分之一是黄芪多糖，具有双向调理血糖的效果，对正常小鼠的血糖含量无显着影响，但却使葡萄糖负荷后小鼠的血糖水平显着下降，并能显着对立肾上腺素引起的小鼠血糖升高反响和苯乙双胍致小鼠试验性低血糖[15]。黄芪多糖可削减糖基化终末产品（AGEs）的过度堆集，进而削减细胞表里胶原安排的增生。很多的ROS以及一系列反常糖类代谢中心物的堆集可导致心肌细胞炎症及DNA危害，然后引起反常基因表达并发动一系列细胞凋亡程序[16]。三七总皂苷是三七的首要有用成分，近年研讨发现三七总皂苷对多种试验性炎症模型具有杰出的抗炎活性，可促进按捺性核转录因子（NF-κB）的表达然后按捺相关炎症因子的生成[17]。王大英等[18]研讨证明降香可下降 AngⅡ水平，调理心肌Bcl-2和Bax蛋白表达，减轻心肌细胞凋亡。心肌细胞坏死所造成的的炎症反响可促进心肌成纤维细胞很多排泄胶原安排并堆积于细胞外基质。最近研讨发现，细胞外基质重构是糖尿病心肌病的重要发病机制，包含细胞外基质胶原堆积、胶原成分和构型的改动。胶原的堆积、胶原的过量生成与安排型金属蛋白酶按捺剂的排泄密切相关。丹参的有用成分为水溶性的丹参素和脂溶性的丹参酮，具有进步机体抗凝和纤溶活性、抗凝血和按捺血栓构成、按捺血小板组成和开释前列腺素类物质、按捺血小板集合、下降全血黏度、改进微循环妨碍、阻断羟自由基的发作、阻挠脂质过氧化的效果，是一种有用的氧自由基铲除剂[19]。研讨显现，丹参酮ⅡA对糖尿病心肌病的效果是经过TGF-β1/Smad途径，减轻线粒体超微结构的改动，按捺心肌细胞凋亡，可以添加左心室射血分数以及左室缩短末压，左室舒张压也显着添加，显着改进左心室功用[20]。丹参具有改进心肌微循环、改进心肌细胞供能、削减心肌细胞炎症及坏死的效果，然后削减心肌成纤维细胞排泄胶原安排，终究削减心肌纤维化。本研讨成果显现第12、15周对照组大鼠心肌间质、血管周围蓝色胶原纤维增多，摆放紊乱；而芪参益气滴丸医治组大鼠心肌间质胶原纤维较对照组显着削减，因而本文以为芪参益气滴丸具有按捺糖尿病心肌纤维化发作的效果，可防备糖尿病大鼠心肌纤维化。endprint
心肌纤维化是糖尿病心肌病的常见体现，也是终究导致心力衰竭的首要原因。芪参益气滴丸经过按捺心肌纤维化的程度，推迟心肌病的进程，然后起到改进心肌病的效果，对糖尿病心肌病具有必定的医治效果。现在对糖尿病心肌病的病理进程没有彻底说明，多种危害机制仍有待完善，并且较单一的化学药物而言，芪参益气滴丸的有用成分多种多样，其对糖尿病心肌病的详细效果和机制值得更进一步的评论，以期为糖尿病心血管并发症的防治供给理论根据。
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（收稿日期：2017-09-13）endprint