铜绿假单胞菌杀死 中西药联合对多重耐药铜绿假单胞菌体外抗菌效果研讨
房华++++++汪瑞忠++++++张晓雪++++++柳树++++++汪海刚
[摘要] 意图 研讨中西药联合对多重耐药铜绿假单胞菌（MDR-PA）抗菌效果，为临床中西药联合医治MDR-PA感染供给依据。 办法 赤芍、五倍子、野菊花、鱼腥草、小檗碱，煎煮法制备提取液，选用两倍稀释法调查中药对细菌的抑菌效果；选用棋盘格稀释法测定中西药的MIC，经过核算部分联合抑菌指数（FIC）的散布点评中西药联合效果。 效果 五种中药对MDR-PA有不同程度抑菌效果，五倍子对MDR-PA抑菌效果最强；亚胺培南与小檗碱、头孢他啶与五倍子联合有较好的协同相加效果，协同相加率超越80%。环丙沙星与五种中草药联合显现无关效果；三种抗生素与五种中草药联合均无拮抗效果。 定论 赤芍、五倍子、野菊花、鱼腥草、小檗碱对MDR-PA有不同程度按捺效果；亚胺培南与小檗碱、头孢他啶与五倍子联合能够添加各自对MDR-PA抗菌效果的敏感性。
[关键词] 中西药联合；多重耐药铜绿假单胞菌；抗菌活性；协同效果
[中图分类号] R969.4 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）31-0107-04
[Abstract] Objective To study the antimicrobial effect of integrated Chinese and western medicine on multi-drug resistant pseudomonas aeruginosa（MDR-PA）， and provide the clinical basis for the integrated Chinese and western medicine treatment of MDR-PA infection. Methods Extract liquid from Radix Paeoniae Rubra， Chinese Gall， wild chrysanthemum， Houttuynia cordata， berberine was prepared by decocting method. The antibacterial effect of traditional Chinese medicine on bacteria was observed by double dilution method. The MIC of Chinese and western medicine was determined by checkerboard dilution method. The effect of integrated Chinese and western medicine was evaluated by calculating the distribution of partial fractional inhibitory concentration （FIC）. Results Five types of traditional Chinese medicine had different degrees of antibacterial effect on MDR-PA， in which the antibacterial effect of Chinese Gall on MDR-PA was the strongest； imipenem had a favorable synergistic effect with berberine， ceftazidime and Chinese Gall， and the synergistic rate combined was over 80%. Ciprofloxacin combined with the five Chinese herbs showed no effect； three types of antibiotics combined with five types of Chinese herbs had no antagonistic effect. Conclusion Radix Paeoniae Rubra， Chinese Gall， wild chrysanthemum， Houttuynia cordata， berberine have different degrees of inhibitory effect on MDR-PA. The combination of imipenem with berberine， ceftazidime and Chinese Gall can increase their susceptibility to antibacterial effect against MDR-PA.
[Key words] Integrated Chinese and western medicine； Multi-drug resistant pseudomonas aeruginosa（MDR-PA）； Antimicrobial activity； Synergistic effect
铜绿假单胞菌是临床常见的条件致病菌，也是院内感染重要致病菌之一，常引起呼吸道感染、尿路感染、创伤感染、败血症等。跟着广谱抗菌药在临床的广泛运用，近年来多重耐药铜绿假单胞菌别离率不断上升，已成为临床感染医治的难题。我国中医中药医治疾病已有千年前史，不少中药具有抗菌、抑菌活性、反转细菌耐药性。为了研讨中西药联合对多重耐药铜绿假单胞菌（multidrug resistant pseudomonas aeruginosa MDR-PA，）抗菌效果，本文選取五种抗菌效果较好的中草药别离与临床常用抗生素进行联合药敏试验，旨在为临床中西药联合医治MDR-PA感染供给依据，现报导如下。
1 材料与办法endprint
1.1 菌株来历
2015年5月～2016年12月临床别离断定的30株MDR-PA（除掉重复别离菌株），30株临床菌株经过法国梅里埃VITEK2-Compact断定与药敏检测。标本构成：痰液17株、尿液6株、创伤分泌物4株、血液3株（MDR菌株参照相关文献[1] 的判别规范）。质控菌株：ATCC27853，购自上海市临床查验中心。
1.2 中药水煎剂
赤芍、五倍子、野菊花、鱼腥草（购自养和堂药房），小檗碱（粉剂，我国药品生物检定所），M-H肉汤（购自上海伊华公司）、常用抗生素均由本院药剂科供给。
1.3 办法
1.3.1 中药原液的制备 别离称取上述中药50 g，按5倍量参加蒸馏水浸泡，4℃冰箱内放置24 h后，加热100 ℃ 30 min，过滤，将滤渣再加5倍水加热100 ℃ 30 min。将两次滤液混合加热浓缩至50 mL，生药含量为1 g/mL，调度pH为7.6，离心后留取上清，进行高压灭菌，4℃冰箱保存备用，参阅穆廷杰[2]的中药原液制备办法。
1.3.2 菌悬液制备 MDR-PA菌株复苏后，从18～24 h 35℃培育的血琼脂培育基上选择几个菌落于生理盐水中，调到0.5麦氏浓度（1.5×108 CFU/mL），稀释30倍，向两倍稀释好的药液的1～11支试管加100 μL菌悬液，终究接种量为5×105 CFU/mL。
1.3.3 药液的倍比稀释 中草药抗菌试验选用中草药抗菌试验试管法，参照相关文献[3]进行。药液选用2倍稀释法，即取72支无菌试管，每组12支编号，每管加1 mL肉汤；取上述中药原液，先在第一管加1 mL，混匀后参加第二管中，以此类推，至第10管吸出1 mL弃去，使1～10管含有倍比稀释的药液为1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，1：128，1：256，1：512，1：1024。
1.3.4 加菌 MDR-PA菌株复苏后，从18～24 h 35℃培育的血琼脂培育基上选择几个菌落于生理盐水中，调到0.5麦氏浓度（1.5×108 CFU/mL），稀释30倍，向两倍稀释好的药液的1～11支试管加100 μL菌悬液，终究接种量为5×105 CFU/mL，第11管为阳性对看管，第12管不加菌为阴性对看管。
1.3.5 中草药抗菌试验效果判读 35℃孵育18～24 h后调查，阳性对看管长菌需呈污浊状，而肉汤空白对看管不长菌呈通明清亮状，在此前提下调查试验组的污浊状况，MIC 是用肉眼在试管中所见能彻底按捺细菌成长的最低抗菌药物浓度。
1.3.6 中西药联合药敏试验 联合药敏试验选用棋盘格微量稀释法检测药物的联合效果，选用9个稀释度，药物最高浓度为其MIC的4倍，顺次倍比稀释为1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256倍浓度，两种药物别离在96孔培育板上按纵列和横列进行联合。接种菌量为5×105 CFU/mL，35℃孵育18～24 h后调查效果。
1.3.7 联合抑菌效应判别 依据部分抑菌浓度（fractional inhibitory concentration，FIC）散布判别联合用药效果。FIC的核算：FIC=MIC甲药联合/MIC甲药单用+ MIC乙药联合/MIC乙药单用，其间MIC为最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）。效果判别：（1）FIC指数≤0.5断定甲乙两药为协同效果；（2）0.5
1.4 统计学办法
选用SPSS 17.0统计学软件对数据进行统计剖析，中西药联合与独自运用时MIC数据为呈正态散布的计量材料，选用（x±s）标明，比较选用配对t查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 效果
2.1 中药单药抗菌效果
五种中药对MDR-PA均有不同程度抑菌效果，抑菌效价为五倍子512～1024，鱼腥草32～64，野菊花8～16，赤芍4～8，小檗碱2～4，抑菌效果强弱次序为五倍子>鱼腥草>野菊花>赤芍>小檗碱。
2.2 中西药联合用药时FIC指数散布
经过核算FIC值点评联合药敏试验效果，得出30株MDR-PA对不同中西药物组合时FIC指数散布。亚胺培南与小檗碱联合效果最佳，60%菌株呈现协同效果，40%菌株呈现相加效果，头孢他啶与五倍子联合有30%菌株呈现协同效果，50%菌株呈现协同效果，协同相加率超越80%。环丙沙星与五种中草药联合显现无关效果；三种抗生素与五种中草药联合均无拮抗效果。见表1。
2.3 不同中西药组合独自与联合运用状况下MIC值比较
头孢他啶与五倍子组、亚胺培南与小檗碱组独自与联合运用状况下MIC值的比较，中西药联合时用药量低于独自运用时用药量。选用配对t查验，两者存在显著性差异（P<0.05）。见表2。
3 评论
铜绿假单胞菌是革兰阴性非发酵菌，是一种条件致病菌。跟着广谱抗生素碳青霉烯类药物在临床广泛及不合理运用，多重耐药菌不断添加乃至呈现泛耐药菌株[4]，MDR-PA存在金属酶、外排泵、膜孔蛋白改动等杂乱的耐药机制，单一抗菌药物医治往往失利，尤其是泛耐药铜绿假单胞菌需求多种药物联合医治[5，6]。新药的研制速度远跟不上细菌耐药的速度，加之许多抗生素有很大的毒副效果，给临床抗感染医治带来极大困难[7]。中药抗菌效果有着悠长的前史，近年来的研讨现已标明，中药的確有抗菌、推迟、消除细菌耐药性的效果[8-10]。中药的抗菌机制能够分为两类，一类是经过各种途径直接对细菌进行按捺；第二类是经过前进人体的免疫力来抗菌。对中药前进人体免疫力抗菌的这种直接办法研讨较少；现在专心于中药药物直接抗菌效果研讨较多，也取得了许多效果。许多抗菌抑菌的中药材，一种药材中或许含有多种抑菌抗菌的活性成分，有多种抑菌抗菌的效果靶点，细菌不易对这样的单一中药材发生抗药性骤变[11]。某些中药的抑菌成分，或许经过多条抑菌灭菌途径起效果，也具有多种效果靶点，如金建玲等[12]发现小檗碱能与细菌核酸结合而具有按捺细菌DNA仿制、RNA转录、蛋白质翻译等多项功用，能与细菌蛋白质结兼并因而搅扰多种酶的活性[13]，还能添加细菌细胞膜的通透性[14]。近几年，中药反转耐药机制作为中药抗菌研讨的一个新的邻域悄然兴起，也有了必定的效果，这就给医疗带来巨大的幻想空间，中药联合可否改动行将面对无药可用的为难局势？为了发挥中西药在抗菌医治方面的各自优势，本课题从中西药联合运用视点来探究医治多重耐药铜绿假单胞菌办法。
从本研讨效果上看，五种中药提取物对多重耐药铜绿假单胞菌具有必定抗菌效果，与相关文献[15]报导共同，五倍子抗菌效果最好，抑菌效价到达215～1024，抑菌效果由强至弱为：五倍子>鱼腥草>野菊花>赤芍>小檗碱。对30株MDR-PA的中西药联合药敏试验，亚胺培南与小檗碱联合效果最佳，协同相加率为100%，亚胺培南的药物浓度均匀下降至本来2/3，小檗碱的药物浓度从275 mg/mL降至20.80 mg/mL（P<0.01）；头孢他啶与五倍子联合协同相加率为80%，头孢他啶与五倍子药物浓度均匀下降至本来浓度1/2（P<0.05）；环丙沙星与五种中草药联合显现无关效果；三种抗生素与五种中草药联合均无拮抗效果。中草药蒸煮提取物成分杂乱，运用剂量也比较大[16]，恰当的中西药联合将大幅前进中药与西药的抗菌抑菌才能。跟着科学技术的前进，中药活性成分的提取物也得到迅速开展。前进中草药活性成分的抗菌效价，必将使中药在抗菌医治方面得到长足开展。发挥中西药联合运用在对立细菌抗药性方面的优势是现在抗菌医治的新的方向，中西药配伍对临床常见菌株有杰出的体外抗菌效果[17]。中药的水煎液与含药血清与抗生素联合运用均有较好的效果，石庆新等[18]发现中药联用能够大大前进亚胺培南对耐药菌的抑菌和灭菌效果，这与本研讨效果根本共同。中药的成分杂乱，在体内或许经过各种代谢途径发挥其抗菌效果，如促进细胞的抗原递呈效果，增强吞噬细胞对细菌的吞噬才能；或发挥中药的免疫调度效果，影响机体的健康状况，进而对机体微生态形成影响。尽管本文运用中西药对细菌的体外联合药敏试验，反映中西药对细菌的直接抗菌效果，但也可阐明中药的某些成分与西药有协同抗菌效果。临床实践中，中西药联合医治疾病的比如有许多，如肠炎[19]、胃炎[20]、肾盂肾炎[21]、盆腔炎[22]等的医治。这也直接证明本研讨中西药联合医治多重耐药铜绿假单胞菌感染的可行性。
总归，中药研讨现已成为人们重视的热门，中药的现代化也已列入国家中长期开展规划。中西药联合运用成为缓解和操控细菌耐药性难题的一条可行途径。中西药联合在医治多重耐药菌或泛耐药菌感染方面也应该得到开展，这方面的研讨应该得到重视。
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（收稿日期：2017-08-12）endprint