乳腺病理活检解读 病理活检安排主动脱水办法及改善

李孜孜

[摘要] 意图 保证活检安排标本脱水和浸蜡的质量，削减试剂的损耗，制造优质的白腊安排块。 办法 2013年11月～2015年7月运用全主动脱水机的脱水进程中，通过试剂替换和管道清洗，以及对脱水机运用、保护、保养和常见毛病扫除等方面进行评论。 成果 活检标本处理质量高，HE 染色后形状明晰。坚持了安排原有的形状和最挨近细胞生计状况中的蛋白质和DNA，为免疫安排化学、特别染色、分子病理等技能办法奠定根底。 定论 脱水是病理技能中的重要环节，需求技能人员高度的职责心，并通过调查总结出一套合适本科室作业的脱水办法和流程。

[要害词] 病理制片；活检标本；固定液；脱水试剂；HE染色

[中图分类号] R361.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）25-0109-03

Automatic dehydration method and improvement of pathological biopsy tissue

LI Zizi

Department of Pathology， the Fifth Hospital Affiliated to SunYat-sen University， Zhuhai 519000， China

[Abstract] Objective To ensure the quality of dehydrated and paraffin wax， reduce the loss of the reagent， and make the high quality paraffin block. Methods From November 2013 to July 2015， the dehydration process of the automatic dehydration machine， the use of reagent and pipeline cleaning to discuss the use， maintenance， maintenance and common trouble shooting of the dewatering machine. Results The quality of the biopsy specimen was improved， and the morphology of HE staining was clear. To maintain the original form of the organization and the most close to the cell viability of the protein and DNA， as the immune tissue chemistry， special staining， molecular pathology and lay the foundation for other technical methods. Conclusion Dehydration is an important part in the pathology technology， it needs a high degree of responsibility， and a summary a practical system for this work.

[Key words] Pathological section； Biopsy； Formalin； Dehydrator； HE stain

跟着医院门诊及手术量的添加，越来越多的医生会对患者进行活体安排查看，希望能通过此项查看给予疾病明晰的确诊，并关于后续的医治给予正确的方向。跟着病理技能的进一步开展，对安排标本的处理要求日益进步，其间包含免疫安排化学查看以及个性化、私家订制的分子病理查看。现在也是在脱水后的白腊包埋标本上进行制造，因而坚持活体安排的形状、保存细胞中的蛋白质和DNA显得特别重要。全主动密闭式安排脱水机是现在广阔医院脱水的根本设备，是病理技能作业的重要组成部分。高质量的处理标本，削减毛病率，坚持脱水机的正常作业，以至于每日选材标本都能准时制片，最终能才够保证病理陈述的准时宣布，因而显得尤为重要[1]。

安排脱水进程是一个物理化学变化的进程，乙醇作为脱水剂，是因为乙醇易溶于水，能与水以任何份额混合。安排浸泡在乙醇后，安排内水分被乙醇所代替。安排在梯度酒精内完全脱水后，通过二甲苯作为前言，置换出安排中的乙醇，然后被消融的白腊所填充。

1 资料与办法

1.1 资料与仪器

我院活检标本和外科手术标本。仪器：Thermofisher Excelsior ES型全主动密闭式安排脱水机，每台顺便不锈钢脱水篮1只，可包容300个包埋盒，塑料包埋盒为国内产品。咱们科室在2013～2015年置办了Thermofisher Excelsior ES脱水机，运用进程中在科学理论指导下，联系实际，总结出一套合适广东气候和本科室作业程序的脱水程序。

1.2 办法

标本选材后放入脱水机，总时刻为13 h。该脱水程序，合适内镜标本、皮肤标本以及手术标本。脱水设置程序为4%中性甲醛Ⅰ30 min、4%中性甲醛Ⅱ45 min、70%乙醇45 min、80%乙醇45 min、95%乙醇60 min、95%乙醇75 min、无水乙醇Ⅰ90 min、无水乙醇Ⅱ90 min、二甲苯Ⅰ20 min、二甲苯Ⅱ20 min、二甲苯Ⅲ20 min、白腊Ⅰ60 min、白腊Ⅱ90 min、白腊Ⅲ90 min[2-4]。

1.2.1 初度固定 选用10%中性缓冲福尔马林浸泡标本。其运用广泛，易于制造，穿透速度快，安排硬化程度小。保存细胞的根本形状，坚持挨近细胞日子状况的蛋白质和DNA且细胞核和细胞质的微细部分均保存杰出，也可进行免疫组化染色。咱们科室在收到当天的门诊活检标本或手术标本均固定至次日，待标本充沛固定后再选材。

1.2.2 二次固定 选材时也将取好的安排块放置于10%中性缓冲福尔马林，这样在选材的数小时中可以让标本进一步的固定，让处于标本深部当地充沛固定[5]。

1.2.3 三次固定 选材结束后，将标本放置入全主动脱水机中持续固定，咱们科室常用AAF 液（甲醛150 mL、95%乙醇800 mL、冰醋酸50 mL 配成1000 mL），固定时刻为2 h[6]。

1.3 调查目标

通过主动脱水机处理较好的安排，色彩呈均匀淡黄色、硬度适中、无发白区、放置一段时刻后安排无洼陷、适合包埋和切片[7]。制造出的切片无缺、厚度适合、核深色明晰、核质清楚、通明度好。用于制造HE染色、特别染色、免疫安排化学染色、分子病理等，利于医生判读和确诊[8]。优质切片质控目标见表1。

表1 优质切片质控目标

2 成果

2.1 处理作用

经该程序处理的安排标本脱水、通明和浸蜡充沛，软硬适中，有弹性，作用好，安排切片厚2～3 μm。制造的切片到达优质切片质量标准，优质切片每项分数都要求到达90%以上[9]。

2.2 HE染色色彩亮堂

色彩艳丽，苏木素和伊红色彩清楚，细胞核结构明晰，特别是内镜和穿刺标本安排等细微标本中制造优秀上色佳[10]。

2.3 特别染色阳性色彩杰出

阳性成果反响色彩易于区别和辨认，层次清楚，比照显着。

2.4 免疫安排化学染色、特异性染色区域和阴性区域清楚[11]

安排切片中棕黄色反响产品上色明晰可见，上色均匀，阴阳比照显着。

2.5 分子病理利于DNA的扩增和探针的杂交

DNA结构保存无缺，信号强度明晰，易于判读。

2.6 毛病率下降

在运用的3年时刻内，脱水机毛病率为零。

2.7 脱水作用

不同染色HE染色比较示例[12]。①腺瘤性息肉标本：图1脱水作用欠安，细胞结构不清，不利于确诊；图2脱水作用佳，细胞结构明晰，确诊较明晰。②鼻咽未分化型非角化性癌标本：图3脱水作用欠安，通明度欠好，不利于确诊；图4脱水作用佳，色彩清楚，核明晰，确诊较明晰。

3 评论

安排处理几点重要要素：固定应及时、脱水要完全、通明宜充沛、浸蜡需满足。

3.1 固定安排固定的意图

固定安排固定的意图在于保存安排根本结构和形状，是脱水的第一步也是最要害的一步。固定欠安的安排形状模糊不清，免疫安排染色欠安[13]。活检安排离体后要赶快放置进入固定液。这样不只可以防止安排的自溶改动，而且还可以防止安排中的蛋白质和DNA分化和变性。所以，固定标本特别是固定大块或条索状标本时要尽或许的坚持标本正常时的状况，不得发作歪曲。淋巴结等不易固定透的安排要切开固定。安排最佳的固定时刻为12～72 h。

3.2固定试剂的替换

二次固定液每天替换，三次固定液运用满1000安排块就需替换一次。每次替换时Thermofisher Excelsior ES脱水机共有两道固定液，每次替换固定液Ⅰ，然后将固定液Ⅱ向前挪，再将新装备的AAF固定液放在固定液Ⅱ缸中。

3.3 脱水试剂的替换

本科室梯度酒精1个月替换1次，一般能处理4000个安排块，根本办法为轮换下第一道酒精，后边的酒精顺次向前挪。二甲苯也1个月替换1次，将二甲苯Ⅰ排出，将二甲苯Ⅱ向前挪，在空置的二甲苯Ⅱ缸中放入新的二甲苯。

3.4 白腊的替换

本科室的白腊为4～5周替换1次，时刻在替换酒精和二甲苯之后，相同也是将第一道白腊排出，将后续的白腊一次向前挪，在最终一道中参加新的白腊。气温高参加多一些的硬蜡，气温低参加多一些的软蜡。白腊替换也可凭技能人员的仔细调查而定，例如白腊稀呈水样，浸蜡不充沛，并附着较大的二甲苯气味，就应该及时替换白腊[14]。

3.5 冲刷

标本取出后，及时冲刷。为了防止管道的阻塞和试剂的彼此混合，冲刷液及水每周都需求替换。每天冲刷结束，放入标本处理缸先用纸巾将冲刷残留液体擦洁净，防止冲刷液和AAF固定液的混合，影响固定作用。而且，将标本处理缸的感应探头擦洁净，是感应探头精确丈量试剂的浓度，防止错报。每天排蜡结束取出标本时，运用纸巾将标本处理缸擦洁净再经行冲刷，这样可削减管道阻塞的时机。

3.6 脱水机职责到人

担任人担任试剂的替换和增加，每天放置标本结束之后查看试剂的页面是否正常，蜡缸是否需求增加。并做好相关问题的记载，防止问题的发作。挂号每天的蜡块数，亲近重视安排块的脱水状况。

3.7 脱水机的定时保养和保护

盖板密封圈外表和周围有白腊残留，发生漏气现象，要留心密封圈的密封功能，如有破损，及时替换。脱水机内部的塑胶管道运用一年半左右需替换，避免破损导致机器罢工[15]。过滤网有残渣吸附，试剂交流受阻。要定时的整理。最好可以定时请厂家为脱水机进行毛病的排查。

综上，在日常作业中脱水机的正常运转，试剂的浓度适合，脱水的程序时刻适中，才能将活检安排脱水充沛，成为制造优质病理切片最要害也是最根底的一步。

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（收稿日期：2015-07-09）