动脉粥样硬化好治 虎杖苷对动脉粥样硬化ApoE—/—小鼠血管功用的影响
林园园
[摘要]意图 研讨虎杖苷對动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠血管功用的影响。办法 选取高脂饲料喂食ApoE-/-小鼠16只，制备动脉粥样硬化小鼠模型。将造模后的小鼠随机分为模型组、试验组，每组8只；且随机抽取8只SPF级C57/BL6小鼠为对照组。试验组选用虎杖苷进行16周的医治，模型组和对照组不做医治。收集医治前后各组小鼠的血清，用酶联免疫吸附试验检测总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL-c）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、超敏C-反响蛋白（hs-CRP）、总抗氧化才能（T-AOC）、丙二醛（MDA）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、高密度脂蛋白（HDL-c）、超氧化物歧化酶（SOD）、白细胞介素-10（IL-10）。医治周期完毕后，制造小鼠动脉血管安排切片，选用油红O染色法，比较各组小鼠动脉血管的斑块面积比。成果 模型组和试验组医治前的TC、TG、LDL-c、TNF-α、IL-1β、IL-6、hs-CRP、T-AOC、MDA、MCP-1水平高于对照组，HDL-c、SOD、IL-10水平低于对照组（P<0.05）。试验组小鼠医治后的TC、TG、LDL-c、TNF-α、IL-1β、IL-6、hs-CRP、T-AOC、MDA、MCP-1水平低于模型组，HDL-c、SOD、IL-10水平高于模型组（P<0.05），且试验组动脉血管斑块面积明显削减（P<0.05）。定论 虎杖苷对动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠有必定的缓解和防备效果，能有用下降血脂，下降炎性细胞因子、趋化因子，添加血清免疫功用。
[关键词]动脉粥样硬化；虎杖苷；血脂；趋化因子；血管功用
[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）4（b）-0021-04
Influence of Polydatin on vascular function in the ApoE-/- mice with atherosclerosis
LIN Yuan-yuan
Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430074，China
[Abstract]Objective To study the influence of Polydatin on vascular function in the ApoE-/- mice with atherosclerosis.Methods To prepare the mouse model with therosclerosis，16 ApoE-/- mice with high fat diet were selected.The model mice were randomly divided into the model group and the experimental group，and 8 normal mice were chosen as the control group.The experimental group was treated with Polydatin for 16 weeks，while the model group and the control group was not treated.After and before the treatment，the serum was collected，and the triglyceride （TG），low density lipoprotein （LDL-c），tumor necrosis factor α （TNF-α），interleukin 1β （IL-1β），interleukin 6 （IL-6），high sensitive C-reactive protein （hs-CRP），total antioxidant capacity （T-AOC），malondialdehyde （MDA），monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1），high density lipoprotein （HDL-c），superoxide dismutase （SOD） and interleukin 10 （IL-10） were detected by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）.The tissue sections of mouse arterial blood vessels were made and the plaque area ratio of arterial blood vessels in each group was compared by oil red O staining.The plaque area ratio of arterial vessels in each group was compared.Results Before the treatment，compared with the control group，the level of TC，TG，LDL-c，TNF-α，IL-1β，IL-6，hs-CRP，T-AOC，MDA，MCP-1 in serum from the model group and the experimental group were significantly increased （P<0.05）；the level of HDL-c，SOD and IL-10 of that were significantly reduced （P<0.05）.After the treatment，compared with the model group，the level of TC，TG，LDL-c，TNF-α，IL-1β，IL-6，hs-CRP，T-AOC，MDA and MCP-1 in serum from the experimental group were significantly lower，and the HDL-c，SOD and IL-10 increased significantly （P<0.05）.And the area of arterial plaque decreased significantly （P<0.05）.Conclusion The Polydatin may relieve and prevent certain effect on atherosclerosis in ApoE-/- mice，reduce blood fat，inflammatory cytokines，chemokines，and increase serum immune function.
[Key words]Atherosclerosis；Polydatin；Blood lipids；Chemokines；Vascular function
心脑血管疾病是发病率较高的疾病。动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是导致心脏病、脑卒中等心脑血管疾病的主要原因[1]，其病理根底为脂质代谢紊乱、胆固醇和三酰甘油（TG）的堆积以及血管的缓慢炎症病变[2]。过量的脂质引起细胞的凋亡，然后开释出脂质，构成粥样斑块[3-4]。在我国，跟着人口比例的老龄化趋势，心脏病、脑卒中等疾病的发病率逐年上升，对人们的生命财产构成丢失[5]。虎杖苷（Polydatin）的主要成分为白黎芦醇和葡萄糖的结合产品，主要从蓼科蓼属虎杖的根茎中提取，具有强心、改进微循环的成效[6-8]。本研讨以ApoE-/-小鼠为目标，以高脂食物喂食，构建AS模型，选用虎杖苷医治，旨在调查虎杖苷对AS ApoE-/-小鼠血管功用的影响，评论虎杖苷对患有AS病症小鼠的影响。
1目标与办法
1.1试验目标
ApoE-/-小鼠品系C57/BL6，（购于北京华阜康生物科技股份有限公司），无处理的SPF级C57/BL6小鼠与ApoE-/-小鼠无遗传差异，体重（19.3±0.6）g，养殖温度为（25±1）℃。
1.2试剂和仪器
虎杖苷（Sigma，产品编号 15721），胆固醇（Sigma，产品编号 200-353-2），Leica 1900 冰冻切片机（德国 Leica），酶标仪（美国 Bio-Tek）。
1.3模型树立和分组
本试验分为对照组、模型组、试验组。试验共有SPF级C57/BL6小鼠8只，ApoE-/-小鼠16只。随机抽取的16只ApoE-/-小鼠，用一般配方饲料暂养1周后，投喂高脂配方饲料（含1.5%胆固醇，15.0%脂肪酸，83.5%一般饲料），接连喂食12周，随机选取造模成功的8只ApoE-/-小鼠组成试验组，以虎杖苷药物医治，每天灌胃0.2 g/kg；剩余8只小鼠不做医治，组成模型组。随机选取8只无遗传差异C57/BL6小鼠作为对照组，投喂一般饲料，并给予平等剂量的生理盐水，医治继续16周。
1.4检测目标
测定医治前后每组小鼠血清中的总胆固醇（TC）、TG、低密度脂蛋白（LDL-c）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、超敏C-反响蛋白（hs-CRP）、总抗氧化才能（T-AOC）、丙二醛（MDA）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、高密度脂蛋白（HDL-c）、超氧化物歧化酶（SOD）、白细胞介素-10（IL-10）等各项目标，采样前禁食12 h，眼眶取血，离心分离后，取上清液，依照ELISA试剂盒（购买于南京建成生物工程研讨所）说明书的过程检测以上目标。
各组给药完毕后，用乙醚麻醉小鼠后开胸，以0.01 mol/L的PBS液经心室灌流，取胸腔主动脉根部，制造80张冷冻切片，每隔5张进行油红O染色，并做面积变量剖析，用Image Pro Plus 6.0（Media Cybernetics USA）软件剖析斑块面积，并核算斑块占血管面积比。
本文对动物的处理均契合湖北省中医院所制定的有关试验动物维护和运用的攻略，并经本单位试验动物道德委员会同意。
1.5计算学办法
选用SPSS 22.0计算软件对数据进行剖析，计量材料以均数±标准差（x±s）表明，两组间比较选用t查验，多组间比较选用方差剖析，计数材料以率表明，选用χ2查验，以P<0.05为差异有计算学含义。
2成果
2.1小鼠血清中脂质含量改变的比较
模型组和试验组医治前的TC、TG、LDL-c水均匀高于对照组，HDL-c水平低于对照组（P<0.05）。模型组医治后的TC、TG、LDL-c水均匀高于医治前，HDL-c水平低于医治前（P<0.05）。试验组医治后的TC、TG、LDL-c水均匀低于模型组，HDL-c水平高于模型组（P<0.05）（表1）。
表1 小鼠血清中脂质含量的比较（g/L，x±s）
与同组医治前比较，▲P<0.05；与对照组医治前比较，*P<0.05；与模型组医治后比较，#P<0.05
2.2各组小鼠炎性细胞因子和免疫才能的比较
模型組和试验组小鼠医治前的TNF-α、IL-1β、IL-6水均匀高于对照组，IL-10水平低于对照组（P<0.05）。模型组医治后的TNF-α、IL-1β、IL-6水均匀高于医治前，IL-10水平低于医治前（P<0.05）；试验组医治后的TNF-α、IL-1β、IL-6水均匀低于模型组（P<0.05），IL-10水平高于模型组（P<0.05）（表2）。
表2 各组小鼠血清的炎性细胞因子和免疫才能的比较（ng/L，x±s）
与同组医治前比较，▲P<0.05；与对照组医治前比较，*P<0.05；与模型组医治后比较，#P<0.05
2.3血清抗氧化才能的比较
与对照组医治前比较，模型组和试验组医治前的T-AOC和MDA含量均高于对照组，SOD低于对照组（P<0.05）。模型组小鼠医治后的T-AOC和MDA含量均高于医治前，SOD低于医治前（P<0.05）。试验组医治后的MDA低于模型组（P<0.05），SOD高于模型组（P<0.05）（表3）。
表3 各组小鼠血清抗氧化才能的比较（x±s）
与同组医治前比较，▲P<0.05；与对照组医治前比较，*P<0.05；与模型组医治后比较，#P<0.05
2.4各组小鼠血清中黏附分子的比较
与对照组医治前比较，模型组和试验组小鼠医治前的MCP-1、ICAM-1、VCAM-1水平高于对照组（P<0.05）。模型组医治后的MCP-1、ICAM-1、VCAM-1水均匀高于医治前（P<0.05）。治试验组医治后的MCP-1、ICAM-1、VCAM-1水平低于模型组（P<0.05）（表4）。
2.5各组小鼠血清中趋化因子的比较
模型组和试验组医治前的PCT和hs-CRP水平高于对照组（P<0.05）；模型组医治后的PCT和hs-CRP水平高于医治前（P<0.05）。试验组医治后的PCT、hs-CRP水平低于模型组（P<0.05）（表5）。
2.6小鼠动脉斑块的比较
试验组医治后的主动脉斑块面积低于模型组（P<0.05）（表6）。
表6 各组小鼠主动脉斑块的比较（x±s）
与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05
3评论
动脉血管粥样硬化的诱因是多方面的，最主要的诱因是三酰甘油代谢紊乱，在动脉血管粥样硬化炎性病变的初期，内皮功用损害，进而影响机体发生炎性细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-1β等）、黏附分子（如ICAM-1和VCAM-1等）、趋化因子（如MCP-1）等[9-10]。投喂高脂食物的ApoE-/-小鼠血清中TC、TG、HDL-c和LDL-c含量均明显升高。在虎杖苷的效果下，ApoE-/-小鼠血清中TC、TG、HDL-c和LDL-c含量均明显下降。血管的炎症反响可能是诱导AS斑块的主要原因[11]。炎症细胞因子能损害内皮，促进蛋白溶解，下降其修正效果，添加斑块的不稳定性。当小鼠血清中hs-CRP、TNF-α和IL-6含量较高时，可构成血管内膜损害、血管痉挛，并导致斑块掉落[12]。TNF-α是一种非糖基化转膜蛋白，可介导炎症反响，参加内皮细胞损害的活动，并集合炎性细胞，促进炎性递质的开释[13]。TNF-α水平越高，则AS病症越严峻。周畅等[14]用虎杖苷灌胃动脉粥样硬化小鼠后，明显进步了小鼠血管的抗氧化才能。本研讨中，投喂高脂食物的ApoE-/-小鼠血清中hs-CRP、TNF-α和IL-6水均匀明显升高，而以虎杖苷医治后，其含量均明显下降，提示虎杖苷对患有AS的小鼠有降脂和下降炎症反响的效果。SOD能铲除自由基，抗氧化，下降脂质过氧化物的含量[15]。模型组小鼠血清中T-AOC和MDA明显升高，SOD含量则明显下降，可能是因为体内过多的自由基耗费了SOD。以虎杖苷医治后，SOD含量升高，T-AOC和MDA含量下降，明显进步抗氧化才能，内皮功用明显进步。趋化因子MCP-1与AS的构成以及斑块的稳定性休戚相关，可为动脉粥样硬化的确诊根据[16-18]。本研讨中，试验组小鼠血清中MCP-1含量明显下降，动脉粥样硬化的程度逐步缓解。在AS初期，吸烟、高血压、高血脂等影响能够激起内皮损害和功用障碍，并激起炎性反响。内皮细胞激活导致ICAM-1和VCAM-1等黏附因子添加。ICAM-1和VCAM-1调理白细胞在血管中的黏附才能，愈加促进内皮的损害。在正常血管中，ICAM-1和VCAM-1的含量十分低，而在AS构成的前期，ICAM-1和VCAM-1含量升高，与AS的病变程度有关[19-20]。试验组小鼠经过虎杖苷医治后，ICAM-1和VCAM-1含量明显下降，有用缓解内皮功用的损害。
综上所述，虎杖苷经过下降血管中脂质的含量，下降炎性细胞因子水平，调理黏附因子和趋化分子，到达对脂质代谢紊乱构成AS的小鼠降血脂和下降血管炎症反响的效果，进步内皮血管功用，有用减缓乃至避免AS的开展。
[参考文献]
[1]Lusis AJ.Atherosclerosis[J].Nature，2000，407（6801）：233-241.
[2]Rosales C，Davidson WS，Gillard BK，et al.Speciated high-density lipoprotein biogenesis and functionality[J].Curr Athe-roscler Rep，2016，18（5）：1-8.
[3]Twigg MW，Freestone K，Homervanniasinkam S，et al.The LOX-1 scavenger receptor and its implications in the treatment of vascular disease[J].Cardiol Res Pract，2012，2012（4）：632408.
[4]Shashkin P，Dragulev B，Ley K.Macrophage differentiation to foam cells[J].Curr Pharm Des，2005，11（23）：3061.
[5]祝曉庆，杨洁，邵娟，等.复方总黄酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响[J].我国药理学通报，2017，33（2）：180-184.
[6]夏婷婷，杨珺超，刘清源，等.虎杖药理效果研讨进展[J].浙江中西医结合杂志，2016，26（3）：294-297.
[7]Kullo IJ，Rooke TW.CLINICAL PRACTICE.Peripheral artery disease[J].N Engl J Med，2016，374（9）：861-871.
[8]Ming D，Ding W，Liao Y，et al.Polydatin prevents hypertrophy in phenylephrine induced neonatal mouse cardiomyocytes and pressure-overload mouse models[J].Eur J Pharmacol，2015，746：186-197.
[9]Libby P.History of discovery：inflammation in atherosclerosis[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2012，32（9）：2045.
[10]Deshmane SL，Kremlev S，Amini S，et al.Monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1）：an overview[J].J Interferon Cytokine Res，2009，29（6）：313.
[11]吳世陶，王建平，杨期东，等.Annexin A1、Lp-PLA2、Bax与人颈动脉粥样硬化斑块的联系[J].中华神经医学杂志，2012，11（10）：1010-1014.
[12]王秀艳，袁建新，王轶瑾，等.血清超敏C反响蛋白与急性脑梗死的相关性研讨[J].临床神经病学杂志，2006，19（3）：210-212.
[13]艾斯，郑健，林青，等.肾康灵调控系膜细胞炎性反响因子的机制研讨[J].国际中医药，2015，（2）：236-242.
[14]周畅，胡婷婷，王志刚，等.虎杖苷经过降血脂抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的效果[J].安徽医药，2016，20（12）：2226-2229.
[15]杜平，曹邓晗.高胆固醇血症患者氧化目标、炎症因子及血管内皮功用的改变及含义[J].海南医学院学报，2016， 22（23）：2818-2821.
[16]Hartung D，Petrov A，Haider N，et al.Radiolabeled Monocyte Chemotactic Protein 1 for the detection of inflammation in experimental atherosclerosis[J].J Nucl Med，2007，48（11）：1816-1821.
[17]Moreno S，Alvarez B，Poderoso T，et al.Porcine monocyte subsets differ in the expression of CCR2 and in their responsiveness to CCL2[J].Vet Res，2010，41（5）：76.
[18]Kruth HS，Anzinger JJ，Chang J，et al.Native low-density lipoprotein uptake by macrophage colony-stimulating factor differentiated macrophages is mediated by macropinocytosis and micropinocytosis[J].Cytokine，2009，48（1-2）：2022.
[19]Singh RJR，Mason JC，Lidington EA，et al.Cytokine stimulated vascular cell adhesion molecule-1 （VCAM-1） ectodomain release is regulated by TIMP-3[J].Cardiovasc Res，2005，67（1）：39-49.
[20]Davies MJ，Gordon JL，Gearing AJ，et al.The expression of the adhesion molecules ICAM-1，VCAM-1，PECAM，and E-selectin in human atherosclerosis[J].J Pathol，1993，171（3）：223.
（收稿日期：2017-12-27 本文修改：祁海文）