苦杏仁苷 HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量
勾晓丹
[摘要] 意图 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研讨供给根据。 办法 选用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；运用Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸（8∶92）为活动相，流量1.0 ml/min。 成果 树立了HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，苦杏仁苷进样量在0.0824～2.0600 μg范围内，线性关系杰出（r=0.9995），均匀回收率为99.03%，RSD=2.25%（n=6）。 定论 该办法精确、重复性好，可用于止咳平喘丸的质量操控。
[关键词] HPLC；止咳平喘丸；苦杏仁苷
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0007-03
止咳平喘丸由苦杏仁（炒）、麻黄、石膏、紫苏子（炒）、厚朴（姜制）、陈皮、罂粟壳（蜜炙）、甘草、茶叶等中药材加工制成的复方纯中药制剂[1]，收载于《中华公民共和国卫生部药品规范中药方成制剂第三册》[2]。功能主治：清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。该药原规范过于简略，规范中只对其性状和查看项断定了查验规范，无其他检定办法，对其产品的内涵质量无法操控。为操控止咳平喘丸的质量，本试验选用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法拟树立止咳平喘丸的质量操控办法，为该制剂的质量操控供给办法，为定量目标供给根据。
1 资料与办法
1.1 试验仪器
岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包含LC-2010型紫外检测器）；LC Solution色谱工作站。
1.2 试剂与试药
乙腈为色谱纯，其他试剂为剖析纯，水为超纯水。苦杏仁苷对照品（我国药品生物制品检定所，批号：110820-200403）；止咳定喘丸（东芝堂药业有限公司，批号：130203、130303、130403）。
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；活动相：乙腈-0.1%磷酸（8∶92）；柱温：30℃；体积流量：1.0 ml/min；检测波长207 nm；进样量10 μl。理论板数：按苦杏仁苷核算应不低于7000，外标法核算含量。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每毫升含80 μg的溶液。
2.2.2 供试品溶液 取本品粉末3.5 g，精细称定，置塞锥形瓶中，精细参加甲醇25 ml，密塞，称定分量，超声处理30 min，放冷，再称定分量，用甲醇补足减失的分量，摇匀，过滤，精细量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。
2.2.3 阴性对照液 按处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同供试品溶液的制备办法学调查阴性对照品溶液。
2.3 办法学调查
2.3.1 阴性搅扰试验 取“2.2”项下3种溶液各10 μl，别离注入高效液相色谱仪测定。成果色谱图中在苦杏仁苷峰相应的保存时刻邻近未检出搅扰峰（图1）。
图1 止咳定喘丸HPLC色谱图
A.对照品；B.供试品；C.阴性对照
2.3.2 线性关系调查 别离精细汲取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，别离注入液相色谱仪，记载色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），制作规范曲线，得回归方程为Y=117 632X-347 713，r=0.9995。成果标明，苦杏仁苷对照品进样量在0.0824～2.0600 μg范围内与峰面积有杰出的线性关系。
2.3.3 精细度试验 精细汲取对照品溶液10 μl，重复进样6次，记载色谱图，按峰面积核算，成果RSD=0.18%，阐明仪器精细度杰出。
2.3.4 重现性试验 取同一批号样品6份，别离依法处理后测定。成果RSD=0.64%，标明该办法重复性杰出。
2.3.5 安稳性试验 取同一批号样品溶液，在室温条件下放置，按上述色谱条件，别离于0、2、4、8、12、24 h进样，测得峰面积值RSD=0.78%，标明供试品溶液在24 h内根本安稳。
2.3.6 加样回收率试验 精细称取已知含量的供试品（批号：130203，苦杏仁苷含量为3.28 mg/g）6份，每份0.5 g，精细参加苦杏仁苷对照品溶液（0.1950 mg/ml）2 ml，按供试品溶液办法制备，依法测定含量并核算回收率（表1）。
表1 加样回收率试验成果
2.4 样品含量的测定
取3批样品，按供试品溶液办法制备，别离进样10 μl，依法测定，选用外标法核算样品中苦杏仁苷的含量（表2）。
表2 样品中苦杏仁苷的测定成果（n=5）
3 评论
本试验中，苦杏仁苷在207 nm处有最大吸收，选用207 nm作检测波长，苦杏仁苷峰有最大峰面积，其他组分在此无搅扰吸收。
苦杏仁苷的含量测定办法现多用HPLC法[3]。在试验过程中，曾依照参考文献，用各种份额的甲醇-水、乙腈-水作活动相，发现体系的安稳性太差[4-5]，无法检测，且呈现双齿峰，改用乙腈-水后，得到单峰，安稳性显着改进，且灵敏度也有所提高，苦杏仁苷色谱峰根本上达到了基线别离。通过重复试验，终究树立了合适本品的含量测定办法，活动相份额为乙腈-0.1%磷酸（8∶92）。
归纳考虑提取别离中药有效成分常用的各种办法的优缺点，本试验以甲醇为溶剂，因为溶剂浸提法、回流提取法和索式提取法提取时刻较长，超声提取法提取时刻短，且无其他组分峰搅扰，因而挑选超声提取法作为止咳平喘丸中苦杏仁苷的提取办法[6-7]。
经笔者调研发现，在气候变化显着的时节，尤其是秋冬时节，咳嗽气喘的患者许多。此药功能主治为清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。用处广泛且有必定的市场占有率，但原规范过于简略，规范中只对其性状和查看项断定了查验规范，无其他检定办法，笔者以为本研评论述的查验办法专特点强、重现性好、阴性对照无搅扰、办法牢靠，使止咳定喘丸原有的质量规范得到充分和完善[8-9]，更能精确、有效地操控止咳定喘丸的质量规范。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.我国药典一部[M].北京：我国医药科技出版社，2010：187-188.
[2] 卫生部药典委员会.中华公民共和国卫生部药品规范中药方成制剂第三册[M].北京：公民卫生出版社，1991：41.
[3] 袁丹，胡爽，毕开顺，等.HPLC法测定复方制剂中苦杏仁苷含量的研讨[J].药物剖析杂志，2002，22（5）：361.
[4] 刘小平，李湘南，徐海星.中药别离工程[M].北京：化学工业出版社，2005：60-74.
[5] 井山林，袁铸人，彭国平.杏贝止咳颗粒中苦杏仁苷的HPLC测定[J].我国医药工业杂志，2004，35（2）：104-105.
[6] 王力生，邹节明，袁伟恩，等.苦杏仁的编造及有效成分提取和剖析发展[J].剖析测验技能与仪器，2005，11（1）：34-38.
[7] 钟文，唐新，谢培德，等.HPLC测定止带消糜栓中苦杏仁苷的含量[J].中成药，2006，28（5）：766-767.
[8] 何世新，解丹平，封海霞.HPLC测定益肺胶囊中苦杏仁苷的含量[J].我国药事，2007，21（11）：910-913.
[9] 甄攀.麻杏止咳片中杏仁苷的HPLC测定[J].中成药，2003， 25（2）：115-116.
（收稿日期：2013-11-01 本文修改：林利利）
[摘要] 意图 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研讨供给根据。 办法 选用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；运用Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸（8∶92）为活动相，流量1.0 ml/min。 成果 树立了HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，苦杏仁苷进样量在0.0824～2.0600 μg范围内，线性关系杰出（r=0.9995），均匀回收率为99.03%，RSD=2.25%（n=6）。 定论 该办法精确、重复性好，可用于止咳平喘丸的质量操控。
[关键词] HPLC；止咳平喘丸；苦杏仁苷
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0007-03
止咳平喘丸由苦杏仁（炒）、麻黄、石膏、紫苏子（炒）、厚朴（姜制）、陈皮、罂粟壳（蜜炙）、甘草、茶叶等中药材加工制成的复方纯中药制剂[1]，收载于《中华公民共和国卫生部药品规范中药方成制剂第三册》[2]。功能主治：清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。该药原规范过于简略，规范中只对其性状和查看项断定了查验规范，无其他检定办法，对其产品的内涵质量无法操控。为操控止咳平喘丸的质量，本试验选用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法拟树立止咳平喘丸的质量操控办法，为该制剂的质量操控供给办法，为定量目标供给根据。
1 资料与办法
1.1 试验仪器
岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包含LC-2010型紫外检测器）；LC Solution色谱工作站。
1.2 试剂与试药
乙腈为色谱纯，其他试剂为剖析纯，水为超纯水。苦杏仁苷对照品（我国药品生物制品检定所，批号：110820-200403）；止咳定喘丸（东芝堂药业有限公司，批号：130203、130303、130403）。
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；活动相：乙腈-0.1%磷酸（8∶92）；柱温：30℃；体积流量：1.0 ml/min；检测波长207 nm；进样量10 μl。理论板数：按苦杏仁苷核算应不低于7000，外标法核算含量。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每毫升含80 μg的溶液。
2.2.2 供试品溶液 取本品粉末3.5 g，精细称定，置塞锥形瓶中，精细参加甲醇25 ml，密塞，称定分量，超声处理30 min，放冷，再称定分量，用甲醇补足减失的分量，摇匀，过滤，精细量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。
2.2.3 阴性对照液 按处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同供试品溶液的制备办法学调查阴性对照品溶液。
2.3 办法学调查
2.3.1 阴性搅扰试验 取“2.2”项下3种溶液各10 μl，别离注入高效液相色谱仪测定。成果色谱图中在苦杏仁苷峰相应的保存时刻邻近未检出搅扰峰（图1）。
图1 止咳定喘丸HPLC色谱图
A.对照品；B.供试品；C.阴性对照
2.3.2 线性关系调查 别离精细汲取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，别离注入液相色谱仪，记载色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），制作规范曲线，得回归方程为Y=117 632X-347 713，r=0.9995。成果标明，苦杏仁苷对照品进样量在0.0824～2.0600 μg范围内与峰面积有杰出的线性关系。
2.3.3 精细度试验 精细汲取对照品溶液10 μl，重复进样6次，记载色谱图，按峰面积核算，成果RSD=0.18%，阐明仪器精细度杰出。
2.3.4 重现性试验 取同一批号样品6份，别离依法处理后测定。成果RSD=0.64%，标明该办法重复性杰出。
2.3.5 安稳性试验 取同一批号样品溶液，在室温条件下放置，按上述色谱条件，别离于0、2、4、8、12、24 h进样，测得峰面积值RSD=0.78%，标明供试品溶液在24 h内根本安稳。
2.3.6 加样回收率试验 精细称取已知含量的供试品（批号：130203，苦杏仁苷含量为3.28 mg/g）6份，每份0.5 g，精细参加苦杏仁苷对照品溶液（0.1950 mg/ml）2 ml，按供试品溶液办法制备，依法测定含量并核算回收率（表1）。
表1 加样回收率试验成果
2.4 样品含量的测定
取3批样品，按供试品溶液办法制备，别离进样10 μl，依法测定，选用外标法核算样品中苦杏仁苷的含量（表2）。
表2 样品中苦杏仁苷的测定成果（n=5）
3 评论
本试验中，苦杏仁苷在207 nm处有最大吸收，选用207 nm作检测波长，苦杏仁苷峰有最大峰面积，其他组分在此无搅扰吸收。
苦杏仁苷的含量测定办法现多用HPLC法[3]。在试验过程中，曾依照参考文献，用各种份额的甲醇-水、乙腈-水作活动相，发现体系的安稳性太差[4-5]，无法检测，且呈现双齿峰，改用乙腈-水后，得到单峰，安稳性显着改进，且灵敏度也有所提高，苦杏仁苷色谱峰根本上达到了基线别离。通过重复试验，终究树立了合适本品的含量测定办法，活动相份额为乙腈-0.1%磷酸（8∶92）。
归纳考虑提取别离中药有效成分常用的各种办法的优缺点，本试验以甲醇为溶剂，因为溶剂浸提法、回流提取法和索式提取法提取时刻较长，超声提取法提取时刻短，且无其他组分峰搅扰，因而挑选超声提取法作为止咳平喘丸中苦杏仁苷的提取办法[6-7]。
经笔者调研发现，在气候变化显着的时节，尤其是秋冬时节，咳嗽气喘的患者许多。此药功能主治为清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。用处广泛且有必定的市场占有率，但原规范过于简略，规范中只对其性状和查看项断定了查验规范，无其他检定办法，笔者以为本研评论述的查验办法专特点强、重现性好、阴性对照无搅扰、办法牢靠，使止咳定喘丸原有的质量规范得到充分和完善[8-9]，更能精确、有效地操控止咳定喘丸的质量规范。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.我国药典一部[M].北京：我国医药科技出版社，2010：187-188.
[2] 卫生部药典委员会.中华公民共和国卫生部药品规范中药方成制剂第三册[M].北京：公民卫生出版社，1991：41.
[3] 袁丹，胡爽，毕开顺，等.HPLC法测定复方制剂中苦杏仁苷含量的研讨[J].药物剖析杂志，2002，22（5）：361.
[4] 刘小平，李湘南，徐海星.中药别离工程[M].北京：化学工业出版社，2005：60-74.
[5] 井山林，袁铸人，彭国平.杏贝止咳颗粒中苦杏仁苷的HPLC测定[J].我国医药工业杂志，2004，35（2）：104-105.
[6] 王力生，邹节明，袁伟恩，等.苦杏仁的编造及有效成分提取和剖析发展[J].剖析测验技能与仪器，2005，11（1）：34-38.
[7] 钟文，唐新，谢培德，等.HPLC测定止带消糜栓中苦杏仁苷的含量[J].中成药，2006，28（5）：766-767.
[8] 何世新，解丹平，封海霞.HPLC测定益肺胶囊中苦杏仁苷的含量[J].我国药事，2007，21（11）：910-913.
[9] 甄攀.麻杏止咳片中杏仁苷的HPLC测定[J].中成药，2003， 25（2）：115-116.
（收稿日期：2013-11-01 本文修改：林利利）
[摘要] 意图 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研讨供给根据。 办法 选用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；运用Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸（8∶92）为活动相，流量1.0 ml/min。 成果 树立了HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，苦杏仁苷进样量在0.0824～2.0600 μg范围内，线性关系杰出（r=0.9995），均匀回收率为99.03%，RSD=2.25%（n=6）。 定论 该办法精确、重复性好，可用于止咳平喘丸的质量操控。
[关键词] HPLC；止咳平喘丸；苦杏仁苷
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0007-03
止咳平喘丸由苦杏仁（炒）、麻黄、石膏、紫苏子（炒）、厚朴（姜制）、陈皮、罂粟壳（蜜炙）、甘草、茶叶等中药材加工制成的复方纯中药制剂[1]，收载于《中华公民共和国卫生部药品规范中药方成制剂第三册》[2]。功能主治：清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。该药原规范过于简略，规范中只对其性状和查看项断定了查验规范，无其他检定办法，对其产品的内涵质量无法操控。为操控止咳平喘丸的质量，本试验选用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法拟树立止咳平喘丸的质量操控办法，为该制剂的质量操控供给办法，为定量目标供给根据。
1 资料与办法
1.1 试验仪器
岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包含LC-2010型紫外检测器）；LC Solution色谱工作站。
1.2 试剂与试药
乙腈为色谱纯，其他试剂为剖析纯，水为超纯水。苦杏仁苷对照品（我国药品生物制品检定所，批号：110820-200403）；止咳定喘丸（东芝堂药业有限公司，批号：130203、130303、130403）。
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；活动相：乙腈-0.1%磷酸（8∶92）；柱温：30℃；体积流量：1.0 ml/min；检测波长207 nm；进样量10 μl。理论板数：按苦杏仁苷核算应不低于7000，外标法核算含量。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每毫升含80 μg的溶液。
2.2.2 供试品溶液 取本品粉末3.5 g，精细称定，置塞锥形瓶中，精细参加甲醇25 ml，密塞，称定分量，超声处理30 min，放冷，再称定分量，用甲醇补足减失的分量，摇匀，过滤，精细量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。
2.2.3 阴性对照液 按处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同供试品溶液的制备办法学调查阴性对照品溶液。
2.3 办法学调查
2.3.1 阴性搅扰试验 取“2.2”项下3种溶液各10 μl，别离注入高效液相色谱仪测定。成果色谱图中在苦杏仁苷峰相应的保存时刻邻近未检出搅扰峰（图1）。
图1 止咳定喘丸HPLC色谱图
A.对照品；B.供试品；C.阴性对照
2.3.2 线性关系调查 别离精细汲取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，别离注入液相色谱仪，记载色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），制作规范曲线，得回归方程为Y=117 632X-347 713，r=0.9995。成果标明，苦杏仁苷对照品进样量在0.0824～2.0600 μg范围内与峰面积有杰出的线性关系。
2.3.3 精细度试验 精细汲取对照品溶液10 μl，重复进样6次，记载色谱图，按峰面积核算，成果RSD=0.18%，阐明仪器精细度杰出。
2.3.4 重现性试验 取同一批号样品6份，别离依法处理后测定。成果RSD=0.64%，标明该办法重复性杰出。
2.3.5 安稳性试验 取同一批号样品溶液，在室温条件下放置，按上述色谱条件，别离于0、2、4、8、12、24 h进样，测得峰面积值RSD=0.78%，标明供试品溶液在24 h内根本安稳。
2.3.6 加样回收率试验 精细称取已知含量的供试品（批号：130203，苦杏仁苷含量为3.28 mg/g）6份，每份0.5 g，精细参加苦杏仁苷对照品溶液（0.1950 mg/ml）2 ml，按供试品溶液办法制备，依法测定含量并核算回收率（表1）。
表1 加样回收率试验成果
2.4 样品含量的测定
取3批样品，按供试品溶液办法制备，别离进样10 μl，依法测定，选用外标法核算样品中苦杏仁苷的含量（表2）。
表2 样品中苦杏仁苷的测定成果（n=5）
3 评论
本试验中，苦杏仁苷在207 nm处有最大吸收，选用207 nm作检测波长，苦杏仁苷峰有最大峰面积，其他组分在此无搅扰吸收。
苦杏仁苷的含量测定办法现多用HPLC法[3]。在试验过程中，曾依照参考文献，用各种份额的甲醇-水、乙腈-水作活动相，发现体系的安稳性太差[4-5]，无法检测，且呈现双齿峰，改用乙腈-水后，得到单峰，安稳性显着改进，且灵敏度也有所提高，苦杏仁苷色谱峰根本上达到了基线别离。通过重复试验，终究树立了合适本品的含量测定办法，活动相份额为乙腈-0.1%磷酸（8∶92）。
归纳考虑提取别离中药有效成分常用的各种办法的优缺点，本试验以甲醇为溶剂，因为溶剂浸提法、回流提取法和索式提取法提取时刻较长，超声提取法提取时刻短，且无其他组分峰搅扰，因而挑选超声提取法作为止咳平喘丸中苦杏仁苷的提取办法[6-7]。
经笔者调研发现，在气候变化显着的时节，尤其是秋冬时节，咳嗽气喘的患者许多。此药功能主治为清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。用处广泛且有必定的市场占有率，但原规范过于简略，规范中只对其性状和查看项断定了查验规范，无其他检定办法，笔者以为本研评论述的查验办法专特点强、重现性好、阴性对照无搅扰、办法牢靠，使止咳定喘丸原有的质量规范得到充分和完善[8-9]，更能精确、有效地操控止咳定喘丸的质量规范。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.我国药典一部[M].北京：我国医药科技出版社，2010：187-188.
[2] 卫生部药典委员会.中华公民共和国卫生部药品规范中药方成制剂第三册[M].北京：公民卫生出版社，1991：41.
[3] 袁丹，胡爽，毕开顺，等.HPLC法测定复方制剂中苦杏仁苷含量的研讨[J].药物剖析杂志，2002，22（5）：361.
[4] 刘小平，李湘南，徐海星.中药别离工程[M].北京：化学工业出版社，2005：60-74.
[5] 井山林，袁铸人，彭国平.杏贝止咳颗粒中苦杏仁苷的HPLC测定[J].我国医药工业杂志，2004，35（2）：104-105.
[6] 王力生，邹节明，袁伟恩，等.苦杏仁的编造及有效成分提取和剖析发展[J].剖析测验技能与仪器，2005，11（1）：34-38.
[7] 钟文，唐新，谢培德，等.HPLC测定止带消糜栓中苦杏仁苷的含量[J].中成药，2006，28（5）：766-767.
[8] 何世新，解丹平，封海霞.HPLC测定益肺胶囊中苦杏仁苷的含量[J].我国药事，2007，21（11）：910-913.
[9] 甄攀.麻杏止咳片中杏仁苷的HPLC测定[J].中成药，2003， 25（2）：115-116.
（收稿日期：2013-11-01 本文修改：林利利）