医护人员撤销夜班费 长时间夜班作业医护人员肠道菌群结构的改变
罗科学 王钦贤 陈富兴
[摘要] 意图 查询长时间夜班作业医务人员肠道菌群结构的改动，评论肠道菌群与长时间夜班作业所造成的缓慢疾病的联络。办法 搜集30例有5年以上夜班作业经历的医务人员（实验组）及30例非夜班作业的健康志愿者（健康对照组）的粪便，运用荧光定量PCR办法定量剖析两组人群肠道首要菌群结构的改动。 成果 实验组与健康对照组比较，长时间夜班作业的医护人员的拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌含量均有下降，差异有高度统计学含义（P<0.01）。而肠球菌和肠杆菌则较健康对照组有所升高，其间肠球菌组间比较，差异有高度统计学含义（P<0.01），肠杆菌组间比较，差异有统计学含义（P<0.05）。 定论 长时间夜班作业医务人员肠道内益生菌拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌削减，条件致病菌肠球菌和肠杆菌增多，存在较显着的肠道菌群结构失调。
[关键词] 长时间夜班作业医务人员；肠道菌群；荧光定量PCR；查询
[中图分类号] R378 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）28-0126-04
[Abstract] Objective To investigate the changes of intestinal flora structure in medical staff taking long-term night shift， and to explore the relationship between intestinal flora and chronic diseases caused by long-term night work. Methods Faeces of 30 cases of medical personnel with more than 5 years working experience of night work（experimental group） and 30 healthy volunteers who had no night work（healthy control group） were collected. Fluorescence quantitative PCR method was used to quantitatively analyze the changes of main intestinal flora structure in the two groups. Results Compared with the healthy control group， the contents of Bacteroides， Bifidobacterium and Lactobacillus in the medical staff taking long-term night shift were all decreased in the experimental group. There were statistically significant differences between the two groups（P<0.01）. The contents of Enterococcus and Enterobacteriaceae were higher than those in the healthy control group， and there was significant difference in Enterococcus between two groups（P<0.01）. The difference in Enterobacteriaceae was significant between two groups（P<0.05）. Conclusion The contents of intestinal probiotics such as Bacteroides， Bifidobacterium and Lactobacillus are decreased in the medical staff taking long-term night shift， while the conditioned pathogens such as Enterococcus and Enterobacteria are increased. There are more significant intestinal flora structural disorders.
[Key words] Medical staff taking long-term night shift； Intestinal microflora； Fluorescence quantitative PCR； Investigation
医务作业者作业繁忙，作业节奏快，作业压力大，会影响到自身的心身健康。尤其是长时间夜班作业的医护人员，长时间的睡觉-觉悟周期不规则，缺少运动，饮食不规则，以及常常面临夜班突发应激事情，不光会引起作业倦怠，导致亚健康状况，使医疗作业效率下降，甚至会呈现医疗过失。并且也会导致疲惫综合征、肥壮、高血压、缓慢胃炎、郁闷症等疾病[1]。
肠道菌群参加人体的消化、营养物质的吸收、能量的供给、脂肪代谢、免疫调理等许多环节，不管是在健康状况仍是在疾病状况下的人体代谢进程均会受肠道菌群的影响[2-3]。长时间夜班作业有或许会导致肠道菌群的改动，而这种改动或许是导致亚健康状况和相关缓慢疾病发作的关键因素。因而，研讨夜班作业医务人员肠道菌群的改动，不光对相关缓慢疾病有防备含义，一起能够进一步针对肠道菌群为靶点进行医治。但是专门针对医护人员肠道菌群改动的研讨较少，单纯细菌培育办法有很大局限性，已有研讨显现肠道菌群结构失调是在“种属”的水平发作的，因而，有必要用不同种属的细菌份额研讨肠道菌群结构改动[4]。本文运用荧光定量PCR办法经过研讨5年以上夜班作业经历医务人员的肠道菌群改动，比较其与健康人群腸道菌群的差异。endprint
1 材料与办法
1.1一般材料
选取我院作业的医护作业者，归入及扫除规范：①年纪20～50岁之间；②1周内需轮值夜班1次，接连5年以上；③扫除既往有心脏病、肝脏、肾脏等重要器官以及内排泄体系疾病者；④扫除消化体系疾病病史，未进行过胃肠道手术，1个月内无急性腹泻症状的急性肠流行症；⑤前3个月内未运用各种抗生素，1个月内未服用肠道益生菌、质子泵按捺剂、胶体铋剂。终究当选30例为实验组。并随机选取没有轮值夜班的契合上述①、③、④、⑤条件的健康志愿者30例为健康对照组。其间实验组平均年纪（36.0±5.2）岁，健康对照组平均年纪（36.0±7.2）岁，男女份额均为1∶1，两组年纪、性别等一般材料比较，差异无统计学含义（P>0.05），具有可比性。
1.2 办法
1.2.1 标本的搜集 搜集实验组和健康对照组成员粪便样品，样品均用无菌容器搜集，置于干冰上，30 min内送至实验室，-80℃冻存。
1.2.2 粪便DNA提取 ①标本于常温下融冻，取0.2 g大便，加1 mL磷酸盐缓冲液（PBS），0.05 mol/L，pH7.4，充沛混匀5 min；②1000 rpm离心10 min，取上清液，按上述办法重复3次；③搜集悉数上清液14000 rpm离心10 min后，弃上清留取沉渣；④加1 mL PBS混匀沉渣，14000 r/min离心15 s，弃上清；反复用PBS洗刷4次。⑤DNA的纯化：将上述菌体液14000 r/min离心15 s后，取200 μL上清，为别离出的细菌。⑥取200 μL DNA提取A液于0.5 mL离心管中，每管别离参加待检细菌液50 μL，倒置数次充沛混匀，室温静置3 min。⑦参加250 μL DNA提取B液，倒置数次充沛混匀。⑧13000 rpm离心10 min，取上清。⑨参加200 μL DNA提取C液，倒置数次混匀。⑩13000 rpm离心5 min，吸弃上清，室温或55℃放置2～5 min晒干。参加20 μL样品稀释液混悬沉淀物，时间短离心使液体落于管底，取上清行PCR。
1.2.3 引物的规划组成 PCR特异扩增引物片段长度和序列见表1。
1.2.4 荧光定量PCR ①阳性规范品及其梯度的制备：（规范曲线定量法）；②阳性规范品的制备：预实验PCR扩增的阳性产品经过2%低熔点琼脂糖凝胶电泳（含溴化乙胺啶，用TAE缓冲液制造），在长波紫外灯下，割下意图条带。用收回试剂盒（QIA quick CEL Extraction KIT）收回纯化，克隆。提取阳性克隆质粒，即为阳性规范品。③阳性标品梯度的制备：取阳性规范品50 μL按10倍稀释（加水45 μL并充沛混匀），顺次稀释下去，制备成阳性定量规范品梯度，倍比稀释必定要精确，不然影响定量成果。每次上机有必要新鲜装备阳性定量规范品梯度，正式上机时以包含一切样本的4个梯度上机即可。④反响体系及反响条件。选用iQTMSYBR Green supermix（Bio-Rad，USA）装备定量PCR反响体系，25 μL总体积含2×Supermix 12.5 μL和上下游引物（12.5 μmol）各1 μL。⑤待测样本Ct值均落在规范曲线上，经过各Ct值在规范曲线上所对应的拷贝数得到待测样本拷贝数。因依照试剂盒提取阐明0.2 g粪便安排共提取200 μL基因组，检测前待测样本按不同倍数稀释到同一浓度，最终成果需乘以总稀释倍数，计算出每克粪便的细菌拷贝数，单位换算成1 g copies/g湿便，进行统计学剖析。
1.3 统计学办法
使用SPSS 13.0软件包进行统计学剖析，契合正态分布的计量材料用（x±s）标明，非正态分布参数经天然对数转化后进行统计剖析，多重组间比较选用单因素方差剖析办法，组间两两比较选用q查验，组内医治前后比较选用配对规划t查验，数据相关剖析选用Pearson直线相關性剖析，P<0.05为差异有统计学含义，P<0.01为差异有高度统计学含义。
2 成果
实时荧光定量PCR成果显现，实验组与健康对照组比较，长时间夜班作业的医护人员的拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌含量均有下降，三者组间比较差异有高度统计学含义（P<0.01）。而肠球菌和肠杆菌则较健康对照组有所升高，其间肠球菌组间比较，差异有高度统计学含义（P<0.01），肠杆菌组间比较，差异有统计学含义（P<0.05），见表2。
3 评论
本研讨发现长时间夜班作业医务人员的肠道菌群结构与健康对照组比较发作了显着的改动，其间拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌含量均有下降；而肠球菌和肠杆菌则比健康对照组数量有增高。
拟杆菌是肠道中最首要的厌氧菌。有研讨发现，其在协助宿主分化多糖、促进肠黏膜的血管再生和免疫体系的发育方面有重要效果，有利于保持肠道微生态的平衡[5]；研讨发现拟杆菌属中有多种细菌对肠黏膜反抗力有利[6]。拟杆菌门/厚壁菌门这一比值与血糖浓度和肥壮呈正相关[7-8]。
双歧杆菌能够粘附于肠上皮细胞外表，能够避免病原菌或条件致病菌的定植[9]；作为免疫原可诱导增强机体的各种免疫功用，然后增强机体免疫功用[10]；可使胆固醇转化为人体无法吸收的粪甾醇，随粪便排出体外，因而能够起到降血酯效果[11]；有研讨者经过对高脂膳食喂食的小鼠饲喂寡果糖益生元来改进肠道内双歧杆菌的含量，发现双歧杆菌能够改进糖耐量、下降内毒素血症、削减细菌移位，使低浓度炎症好转[12-13]。
乳酸杆菌可促进肠道黏蛋白排泄，按捺大肠杆菌、产气荚膜梭菌等有害菌对黏液、肠上皮细胞的粘附，对保护、安稳肠黏液层屏障功用有重要效果[14]。可按捺有害菌的繁衍，对胃肠道的感染具有防备与医治效果[15]；能激活机体的免疫体系，特别是巨噬细胞、天然杀伤细胞（NK）细胞和B淋巴细胞；乳酸菌还具有下降血清胆固醇等效果[16]。上述三种细菌是有利菌，能够协助消化、保持肠道屏障、降血脂、增强免疫功用等，其数量在长时间夜班作业医务人员的肠道较健康人下降，阐明长时间频频的夜班作业现已使肠道菌群结构发作了改动，使机体更简单呈现肠功用紊乱、高血脂、免疫反常等疾病。endprint
本研讨发现长时间夜班作业医务人员肠球菌和肠杆菌较健康对照组有所升高。肠杆菌和肠球菌是人体内常驻菌群，正常生理状况下不引起疾病，但在必定条件下可导致感染。有研讨显现，肠杆菌细胞壁可发作LPS，导致脂多糖LPS开释添加，当肠道黏膜屏障功用受损时，LPS经过肠道屏障吸收入血，易导致内毒素血症，影响很多炎性因子发作，这些炎性因子参加保持机体的长时间缓慢低度炎性反响状况[17]；也有研讨发现肠球菌属与脂代谢水平相关，肠球菌属和肠球菌属占总细菌的份额与甘油三酯水平呈明显正相关联络，其份额与高密度脂蛋白呈明显负相关[18]。两种是条件致病菌，其数量的添加，会添加肠道的通透性，简单导致缓慢低度的炎症反响状况，呈现胰岛素反抗，然后使长时间频频的夜班作业的医务人员更简单呈现肥壮、高血压、冠心病等一系列的代谢紊乱性疾病。
近几年，肠道菌群对人体健康的重要性跟着研讨的不断深入已逐步显现出来，人类的肠道内定值的肠道菌群共约500～1000个不同的种属，其细胞总量超越1000万亿[19]。肠道菌群是与人体共生、相互影响的杂乱体系，几乎是一个被忘记的器官[20]。许多研讨标明[21]，肠道菌群失调不只会导致多种胃肠道疾病，如幽门螺杆菌感染、腹泻、便秘、炎症性肠病等，一起还会诱发肥壮、糖尿病、代谢综合征、心血管疾病和过敏疾病等。因而，能够经过调理肠道菌群防备疾病，促进健康，改进症状，缩短病程。
研讨发现和事实证明频频的夜班，作业量大，长时间在高风险、高压力下超负荷、快节奏的作业，使机体常常处于应激状况。应激状况下机体内会发作内排泄、神经生化及免疫功用的改动，长时间的影响会导致机体内環境失衡，呈现多体系的功用障碍，进一步发作焦虑、郁闷心情反常[22]。一起依据微生态原理，每一个人肠道微生态菌群的构成和结构与其饮食结构和生存环境亲近相关[23]。医务人员长时间在细菌、病毒高浓度的环境中作业，也或许引发肠道菌群结构的改动。本研讨选用实时荧光定量PCR办法从种属的水平、定量的视点检测长时间夜班作业医务人员和非夜班健康人肠道菌群的反常，证明长时间夜班作业医护人员的肠道菌群结构发作了明显地改动，存在失调状况。这种肠道菌群结构的失调或许是导致亚健康状况、疲惫综合征、肥壮、代谢紊乱和郁闷症等一系列疾病的前期病理生理根底。在临床医治中，也能够运用微生态试剂靶向调控肠道菌群结构，并经过改进肠道菌群结构改进亚健康状况及导致的多种疾病。
现在，对肠道菌群的研讨多聚集于某种特定的疾病，只是针对长时间夜班作业简单导致的几种疾病有相关研讨。如关于肥壮和代谢综合征，许多研讨发现肠道菌群是衔接饮食结构反常到肥壮和代谢综合征发作的重要桥梁，其根本机制：影响组成脂肪的基因，导致脂肪过度堆集[24]；损坏肠屏障，肠道通透性添加，引发代谢性内毒素血症，然后引发宿主全身的低度、体系性的缓慢炎症，诱发胰岛素反抗，进而导致肥壮、代谢综合征等疾病[25]。关于缓慢疲惫综合征，研讨发现，与健康人比较，缓慢疲惫综合征患者肠道菌群发作了改动，包含双歧杆菌和大肠杆菌的数量削减，粪链球菌则很多添加，部分患者体现有Lactonifactor和Alistipes增多[26]。本研讨关于肠道菌群的研讨突破了只是环绕某种疾病的固有领域，针对某个特定的作业的特定人群，不光拓宽了肠道菌群研讨的目标，并且也为更多的作业病及地方病研讨供给了一种新的思路和办法。
虽然本研讨显现长时间夜班作业医护人员的肠道菌群较健康人发作了改动，提醒了长时间夜班作业所导致的缓慢疾病与肠道菌群之间有亲近的联络，但关于两者之间的因果联络和详细机制，仍有很多不确定之处。并且，本研讨所用的荧光定量PCR办法，只能检测到肠道中的优势菌，下一步可使用更先进的高通量测序的办法进行研讨，希望能更全面地检测肠道中的完好菌群。
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（收稿日期：2017-02-23）endprint