消化道颈淋巴结搬运 消化道肿瘤淋巴结搬运灶P53、bcl—2、survivin与化疗药敏性的联系研讨
陈希++赵建华
[摘要] 意图 研讨消化道肿瘤淋巴结搬运灶P53、bcl-2、survivin与化疗药敏性的联系。 办法 挑选62例消化道恶性肿瘤患者的原发灶及搬运淋巴结的肿瘤安排，进行四氮唑盐（MTT）法原代细胞培育体外化疗药敏性试验，对肿瘤细胞对顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、紫杉醇（PTX）、甲氨蝶吟（MTX）4种常用化疗药物的体外化疗药敏性进行检测，并选用免疫安排化学法（SP）对原发灶及搬运灶中的P53、bcl-2、survivin的表达进行检测。 成果 P53与bcl-2在原发灶和搬运灶间的表达呈显着相关性（P<0.05），而survivin无显着相关性（P>0.05）。DDP、VCR、MTX对搬运灶的肿瘤细胞按捺率显着低于原发灶（P<0.05），而PTX在原发灶与搬运灶对肿瘤细胞的按捺状况无显着差异（P>0.05）；原发灶中的化疗药物按捺率均与P53、bcl-2、survivin不相关（P>0.05）；而在淋巴结搬运灶中，P53与DDP对肿瘤细胞的按捺率呈负相关（P<0.05），survivin及bcl-2均与PTX按捺率呈负相关（P<0.05）。 定论 消化道肿瘤淋巴结搬运灶中P53、bcl-2、survivin的表达状况及化疗药敏性均体现出异质性，术后化疗应尽量防止化疗靶方针的误差，以提高癌症归纳医治的作用。
[关键词] 消化道肿瘤；淋巴结；凋亡按捺蛋白；化疗药敏性
[中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）25-0012-03
Research of relationship between expression of P53， bcl-2， survivin and chemosensitivity in lymph node metastases of gastrointestinal tumors
CHEN Xi ZHAO Jianhua
Department of Oncology， the First Peoples Hospital of Jingdezhen City in Jiangxi Province， Jingdezhen 333000， China
[Abstract] Objective To explore the relationship between expression of P53， bcl-2， survivin and chemosensitivity in lymph node metastases of gastrointestinal tumors. Methods The tumor tissue and metastasis lymph nodes of 62 patients with gastrointestinal tumors were collected， and the tumor cells chemosensitivity to DDP， VCR， PTX， MTX were detected by MTT assay，meanwhile the expression of P53， bcl-2 and survivin in primary tumors and lymph node metastases were detected by immunohistochemically. Results The expression of P53 and bcl-2 in primary tumors and lymph node metastases were significant correlation（P<0.05），while survivin were not（P>0.05）. The inhibition of tumor cells of DDP， VCR， MTX in lymph node metastases were significantly lower than those in primary tumors（P<0.05）， while PTX were not（P>0.05）. There were no correlation between expression of P53， bcl-2， survivin and inhibition rate of tumor cells（P>0.05）， but in lymph node metastases，the expression of P53 was negative correlation with inhibition rate of tumor cells for DDP inhibition（P<0.05）， and both of survivin and bcl-2 were negative correlation for PTX（P<0.05）. Conclusion The expression of P53， bcl-2， and survivin chemosensitivity in lymph node metastases of gastrointestinal tumors are different from primary tumors， so it is necessary to avoid the deviation of chemotherapy target postoperative as far as possible to improve the comprehensive curative effect.
[Key words] Gastrointestinal tumors； Lymph node； Apoptosis inhibiting protein； Chemosensitivity
消化体系恶性肿瘤在我国各类体系肿瘤的发病率中占首位，其间胃癌、食管癌、结直肠癌、肝癌的逝世总数占前10位，在恶性肿瘤中的份额占到40.75%[1]。术后辅佐化疗是医治消化道恶性肿瘤的重要手法。研讨标明，大都化疗药物抗肿瘤的机制都是经过对凋亡相关基因或肿瘤细胞DNA发挥作用、诱导细胞凋亡来完成的[2，3]。但是化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡却会受凋亡按捺蛋白的按捺作用，发作多药耐药（multi-drug resistance，MDR）表型，然后严重影响化疗的作用。P53是一种重要的凋亡调理基因，bcl-2与survivin是两种新发现的耐药基因蛋白。本研讨对消化道肿瘤淋巴结搬运灶P53、bcl-2、survivin与化疗药敏性的相关性进行了评论，现报导如下。
1 材料与办法
1.1一般材料
挑选2015年1月～2016年5月的62例消化道恶性肿瘤并伴淋巴结搬运患者，疾病诊断均经手术及病理证明，扫除术前放、化疗者。其间男35例，女27例；年纪29～78岁，均匀（59.44±4.16）岁；胃癌28例，食管癌17例，大肠癌17例。本研讨契合医学道德要求，且获得一切患者的知情赞同。
1.2 肿瘤细胞培育及化疗药敏性试验
收集患者的原发灶及搬运淋巴结的肿瘤安排置于双抗培育液中，在2 h内进行四氮唑盐（MTT）法原代细胞培育体外化疗药敏性试验。选用4种常用化疗药物：顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、甲氨蝶吟（MTX）、紫杉醇（PTX），药物终浓度以血浆峰值药物浓度为准，以不加药物的细胞为对照，每种药物均设3个复孔，接种细胞悬液200 μL/孔，振动混匀后参加5%CO2饱和湿度的培育箱培育48 h，温度控制在37℃，加5 g/L噻唑蓝（MTT）20 μL/孔再进行3～24 h的培育。停止培育后进行离心处理弃上清，之后参加二甲基亚矾（DMSO）100 μL/孔，混匀后运用酶标仪570 nm对各孔吸光度（A）进行测验。肿瘤细胞成长按捺率（IR）=（1-给药孔A/对照组A）×100%。
1.3免疫安排化学法（SP）测定
选用SP法对原发灶及搬运淋巴结的P53、bcl-2、survivin进行测定，严厉按试剂盒阐明书操作。由深圳市国赛生物技术有限公司供给鼠抗人P53、bcl-2、survivin单克隆抗体及免疫安排化学染色试剂盒。用已知阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）替代一抗作阴性对照。每张切片取5个高倍视界，各计数100个细胞，P53染色阳性表现为胞核着黄色，bcl-2与survivin均为胞膜和（或）胞质着黄色。上色强度计分规范与阳性细胞率计分规范参阅李勇[4]的研讨，依据二者的积分乘积判别阴阳性，即乘积=1为（-）；乘积2～3为（+）；乘积4～7为（++）；乘积≥8为（+++）。
1.4 统计学办法
选用SPSS18.0统计学软件进行数据处理，计量材料以（x±s）表明，比较选用配对t查验及直线相关剖析，等级材料选用Wilcoxon配对秩和查验与Spearman等级相关剖析，P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1 原发灶和淋巴结搬运灶的P53、bcl-2、survivin表达状况
P53在原发灶和淋巴结搬运灶中的表达一起率为68.04%（36/62），survivin为25.81%（16/62），bcl-2为43.55%（27/62）；P53与bcl-2的表达一起率较高，而survivin较低。三者在原发灶和淋巴结搬运灶中的表达强度无显着差异（P>0.05）。P53与bcl-2在原发灶和淋巴结搬运灶间的表达呈显着相关性（P<0.05），而survivin无显着相关性（P>0.05）。
2.2 4种化疗药物对原发灶和淋巴结搬运灶的肿瘤细胞按捺率比较
PTX对原发灶和淋巴结搬运灶的肿瘤细胞按捺率无显着差异（P>0.05），但DDP、VCR、MTX对淋巴结搬运灶肿瘤细胞按捺率显着低于原发灶（P<0.05）。直线相关剖析显现，MTX对原发灶和淋巴结搬运灶的肿瘤细胞按捺率呈正相关性。
2.3原发灶和淋巴结搬运灶P53、bcl-2、survivin表达与化疗药物按捺率的联系
原发灶中的P53、bcl-2、survivin均与化疗药物按捺率无显着相关性（P>0.05）。而在淋巴结搬运灶中，P53与DDP对肿瘤细胞的按捺率呈负相关（r=-0.426，P<0.05）；survivin及bcl-2均与PTX按捺率呈负相关（r=-0.399，r=-0.483，P<0.05）。
3评论
淋巴结搬运是影响恶性肿瘤预后的独立风险要素[5]，消化体系恶性肿瘤发作淋巴结搬运的份额到达60%～80%[6，7]。在肿瘤发展过程中，亚克隆细胞群的侵袭才能、化疗药敏性等部分细胞学特性可能会发作异质改动。肿瘤的MDR与不同信号转导通路和谐的级联样网络式调理机制及多种基因/蛋白的表达有密切联系[8]，其呈现的显着异质性改动触及到肿瘤发展过程中不同细胞亚群发作的基因及大分子改动[9]，但现在国内尚缺少有关消化道肿瘤搬运灶凋亡按捺蛋白的表达与化疗耐药性的联系的研讨报导。
P53、bcl-2及survivin是三种具有细胞凋亡调理功用的凋亡按捺蛋白，也是与消化道肿瘤耐药相关的因子之一。本研讨显现，P53与bcl-2在原发灶和淋巴结搬运灶中的表达一起率较高，而survivin较低，提示消化道肿瘤淋巴结搬运灶凋亡按捺蛋白的表达发作了异质性改动；4种常用化疗药物对原发灶与搬运灶肿瘤细胞的按捺率有显着差异，提示搬运灶的化疗药敏性也具有异质性。
现在以为，MDR构成机制至少包含两个途径，其一为经典耐药途径，其二为化疗药物作用于肿瘤细胞后发作的凋亡反抗[10，11]。化疗药物可对肿瘤细胞DNA构成损坏，细胞可经过P53通路反式激活P21WAF/CIP1基因程序而诱导细胞凋亡，与野生型P53不同，突变型P53不具有对bcl-2及survivin负反馈调理作用[12]；bcl-2可经过影响自扰细胞色素线粒体正常开释而搅扰蛋白酶级联反响激活，是终究凋亡调控点；而survivin可经过直接按捺caspase阻断细胞凋亡。故化疗药物作用于靶点时，bcl-2与survivin这两种抗凋亡蛋白可对化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡发作按捺作用，然后呈现MDR表型[13，14]。
相关性剖析提示原发灶中的P53、bcl-2、survivin均与化疗药物按捺率无显着相关性，而在淋巴结搬运灶中却与不同化疗药物的按捺率呈负相关，提示搬运灶与原发灶具有MDR异质性，首要耐药相关因子不同而使化疗药物的按捺率有所差异，这可能与肿瘤细胞对化疗药物的MDR是触及多种基因/蛋白一起参加、机制杂乱的多环节网络化调理有关。孙延霞[15]研讨指出，肿瘤安排耐药相关因子表达与某种化疗药物对肿瘤细胞的按捺率表现出负相关的联系，阐明该耐药相关因子高表达时对某种药物敏感性下降表现出相对化疗耐药。
综上所述，消化道肿瘤淋巴结搬运灶中P53、bcl-2、survivin的表达状况及化疗药敏性均体现出异质性，提示术后化疗应尽量防止化疗靶方针的误差，以提高癌症归纳医治的作用。
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（收稿日期：2016-06-22）