芍药苷对照品 HPLC法测定连续接骨丸中芍药苷的含量

孙承浩+谭无名

[摘要] 意图 使用HPLC法测定接连接骨丸中芍药苷的含量。 办法 选用高效液相色谱法测定接连接骨丸中芍药苷的含量。选用色谱柱：Agilent TC-C18（2）5 μm，250×4.6 mm，活动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），流速为1.0 mL/min，检测波长230 nm，进样量为5 μL。 成果 芍药苷在0.02514～1.0056 μg范围内，进样量与峰面积线性关系杰出（r=0.9997）；均匀加样回收率97.43%（RSD=0.79%）。 定论 使用HPLC法测定接连接骨丸中芍药苷的含量操作简洁、成果精确、重现性好。

[关键词] 接连接骨丸；牛黄；赤芍；芍药苷；HPLC

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2016）27-0115-03

接连接骨丸为我市中医院出产的医院制剂，由当归、红花、川芎、延胡索、赤芍、乳香等15味中药材经枯燥，破坏，过筛，混合，每100 g粉末加炼蜜80 g制成大蜜丸，具有活血散瘀，消肿止痛的作用，首要用于医治跌打损伤，青紫胀痛，闪腰岔气，筋断骨折，瘀血作痛。因为本来的医院制剂规范中没有含量测定项，本文参照《我国药典》2015年版一部、四部，并查阅相关文献[1-6]，选用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）定量检测处方中赤芍的芍药苷含量，专特点强，精细度和重复性杰出。选用该办法可进一步操控出产中赤芍投料，为接连接骨丸质量监管供给有力的参阅依据，现报导如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

岛津2010 CH-T型高效液相色谱仪（包含自动进样器、柱温箱、四元低压泵、紫外检测器等重要组成部分）；BP211-D电子天平。LabAlliance HS3120 超声清洗器。

1.2 试剂

乙腈为色谱纯，乙醇、磷酸为剖析纯，芍药苷对照品（批号110736-201640，含量为95.2%）由我国食品药品检定研讨院供给。接连接骨丸样品由辽阳市中医药制剂室供给，批号别离为160324、160420、160526。

2 办法与成果

2.1色谱操作条件及体系适用性

选用色谱柱：Agilent TC-C18（2） 5 μm，250×4.6 mm，活动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），流速1.0 mL/min，波长230 nm，进样量 5 μL，柱温30℃；

2.2 溶液的制备

（1）样品溶液制造：取样品适量，剪碎，混匀，取样品约3 g，精细称量置于锥形瓶中，参加稀乙醇溶液50 mL，密塞，称定分量，超声处理30 min，冷却至室温，再称定分量，将上述混合溶液补足减失的分量，摇匀，滤过，取续滤液（图1）。（2）对照品溶液制造：取芍药苷对照品约20 mg精细称定，至100 mL容量瓶中，加稀乙醇适量溶解，取5 mL上述溶液至20 mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度即得（图2）。（3）阴性样品溶液的制备 按工艺办法制备短少赤芍的阴性样品，并依据“（1）”办法制备（图3）。

2.3 线性关系调查

精细称取芍药苷对照品25.14 mg置于50 mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储藏溶液。精细量取对照品储藏溶液0.1、0.2、0.5、1、2、4 mL，别离置于10 mL量瓶中，加稀乙醇或甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件进样，记载色谱图，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归剖析。回归方程为：Y=12063.5X-19118，r=0.9997（n=6），标明芍药苷在0.02514～1.0056 μg范围内，线性关系杰出。

2.4 精细度试验

取50.28 μg/mL芍药苷对照品溶液，进样量为5 μL，接连测定5次，以峰面积核算，RSD为0.8%，阐明仪器精细度杰出[5，7-10]。

2.5重复性试验

见表1。

2.6稳定性试验

取样品测定项下的供试品溶液在常温条件下放置0、2、4、6 h后别离进样测验，记载色谱图，按峰面积核算，RSD为0.81%，成果标明供试品在常温条件下6 h内稳定性杰出。见表2。

2.7 加样回收率试验

取已知含量（0.854 mg/g）的样品6份，精细称定，然后别离精细参加0.2618 mg/mL的对照品溶液5、10、15 mL，再别离精细参加稀乙醇45、40、35 mL，称定分量，超声处理（功率200 W，频率40 KHz）30 min，冷却至室温，再称定分量，用稀乙醇补足减失的分量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。照样品测定项下办法测定，见表3。

2.8耐用性试验

别离选用3根不同产品规范的色谱柱，对同一批样品按供试品溶液制备办法制备而且依给定测定条件测定含量。见表4。

3 评论

3.1 提取条件的挑选

本试验别离对提取条件进行了下述研讨：选用加热回流、超声波提取等办法对提取功率进行调查，试验成果发现超声提取法功率较高；提取溶剂调查了甲醇、稀乙醇溶液，成果发现，提取作用无显着差异；考虑到试剂毒性问题，故选用稀乙醇作为提取溶剂；一起又对稀乙醇用量25 mL、50 mL、100 mL以及提取时刻15 min、30 min、60 min进行了调查，终究选用稀乙醇溶液50 mL，超声提取30 min作为提取条件。

3.2活动相的挑选

活动相调查了乙腈-水，乙腈-磷酸溶液两种体系，成果发现乙腈-磷酸溶液体系别离较好，一起调查了磷酸的浓度0.05%、0.1%、0.2%对芍药苷别离作用的影响，归纳考虑别离度及对液相色谱仪的维护，断定了正文中活动相条件。

综上，选用HPLC法测定接连接骨丸中芍药苷的含量办法操作简洁，成果牢靠，重现性好，为医院制剂接连接骨丸中赤芍质量的调查供给了参阅办法，可作为该制剂的质量操控办法[12-17]。

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（收稿日期：2016-06-28）