肝细胞癌 肝细胞癌Adv—p53、AAV—HGFK1联合转基因医治的临床效果和预后剖析

张法标+方哲平

[摘要] 意图 剖析肝细胞癌Adv-p53、AAV-HGFK1联合转基因医治的临床作用和预后。 办法 选取我科2009年1月～2012年1月发展期肝癌患者共50例，随机分为重组腺相关病毒-肝细胞成长因子第l螺旋区（recombinant adeno-associated virus-kringle 1 domain of hepatocyte growth factor）AAV-HGFK1+Adv-p53组和AAV-HGFKI组。比较两组患者医治后肝穿刺活检标本重生微血管和凋亡细胞率、临床作用、复发率、生计率。 成果 AAV-HGFK1+Adv-p53组医治后第14天、第21天的重生微血管数量显着低于AAV-HGFK1组，凋亡细胞率显着高于AAV-HGFK1组（P<0.01）。AAV-HGFK1+Adv-p53组的疾病操控率为84.00%，显着高于AAV-HGFK1组48.00%（P<0.05）；两组患者的疾病缓解率差异无统计学含义（P>0.05）。AAV-HGFK1+Adv-p53组1年、3年复发率显着低于AAV-HGFK1组，1年、3年生计率显着高于AAV-HGFK1组（P<0.05）。 定论 Adv-p53、AAV-HGFK1联合医治发展期肝细胞癌作用优于AAV-HGFK1独自医治，预后更佳。

[关键词] Adv-p53；AAV-HGFK1；转基因医治；肝细胞癌；预后

[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）26-0008-04

Clinical efficacy and prognosis of Adv-p53， AAV-HGFK1 combined gene therapy for HCC

ZHANG Fabiao FANG Zheping

Department of Hepatobiliary Surgery， Taizhou Hospital in Zhejiang Province， Linhai 317000， China

[Abstract] Objective To analyze the clinical efficacy and prognosis of Adv-p53， AAV-HGFK1 combined gene therapy for HCC. Methods Fifty patients with advanced liver cancer in our department from January 2009 to January 2012 were randomly divided into AAV-HGFK1+Adv-p53 group and AAV-HGFK1 group. The liver biopsy specimens microvessel and apoptosis rate， clinical efficacy and relapse rate were compared in two groups of patients. Results The number of microvessels in AAV-HGFK1+Adv-p53 group 14 days and 21 days was significantly lower than AAV-HGFKI group. The apoptosis rate was significantly higher than that of AAV-HGFK1 group（P<0.01）. The disease control rate in AAV-HGFK1+Adv-p53 group was 84.00%， which was significantly higher than 48.00% in the AAV-HGFK1 group（P<0.05）. The remission of the disease in patients had no significant difference between the two groups（P>0.05）. The 1，3-year recurrence rate in the AAV-HGFK1+Adv-p53 group was significantly lower than AAV-HGFK1 group， the 1，3-year survival rate was significantly higher than that of AAV-HGFK1 group（P<0.05）. Conclusion Adv-p53， AAV-HGFK1 combination therapy for advanced hepatocellular carcinoma is more effective than AAV-HGFK1 alone treatment， while the prognosis is better.

[Key words] Adv-p53； AAV-HGFK1； Gene therapy； Hepatocellular carcinoma； Prognosis

原发性肝癌为我国特别是农村地区高发恶性消化道肿瘤之一，因为其前期临床首要体现为右下腹隐痛、呕心吐逆以及消化不良等胃肠道非特异性体现，故前期阳性确诊水平较低[1]，而以手术为主联合术后放化疗等医治办法并未获得满足作用，其术后五年生计率约30%～45%。近年降临床上关于原发性肝癌的基因水平的医治获得了必定成效，经过转染抑癌基因等基因片段进入癌细胞安排中，经过按捺相关信号通路的激活等办法来按捺肿瘤细胞增值、搬运[2，3]。本研讨经过对原发性肝癌患者进行AAV-HGFK1+Adv-p53和AAV-HGFK1基因医治，提醒腺病毒-P53关于医治肝癌医治的潜在价值，现报导如下。

1 材料与办法

1.1 一般材料

选取我科2009年1月～2012年1月发展期肝癌患者共50例，均契合第四届全国肝癌会议修订规范（1999年）[1]。归入规范：①具有完好的肝功能、AFP、CT或MRI查看材料；②估计寿数逾越12周，体能状况评分（ECOG）0～2分；③之前未经过手术、放疗、射频融化、栓塞化疗、肝动脉灌注、冷冻融化、经皮乙醇打针等医治；④无严峻的心、肺、肾或造血系统疾病。扫除规范：①入组前接受过针对肝癌任何办法的医治；②估计寿数<12周或ECOG>2分；③兼并严峻的心、肺、肾或造血系统疾病；④妊娠或哺乳期女人。随机分为AAV-HGFK1+Adv-p53组和AAV-HGFK1组，其间AAV-HGFK1+Adv-p53组25例，男17例，女8例；年纪37～64岁，均匀（51.9±3.3）岁；肿瘤直径3.1～10.8 cm，均匀（5.4±0.8）cm；肿瘤数目1个7例，2个4例，≥3个14例；伴有肺搬运9例，骨搬运1例；侵略门脉骨干5例。AAV-HGFK1组25例，男18例，女7例；年纪39～66岁，均匀（52.4±3.5）岁；肿瘤直径3.6～10.2 cm，均匀（5.7±0.2）cm；肿瘤数目1个8例，2个5例，≥3个12例；伴有肺搬运10例，骨搬运2例；侵略门脉骨干6例。两组患者性别构成、年纪、肿瘤直径和数目、搬运及侵略血管状况差异无统计学含义（P>0.05），具有可比性。

1.2 医治办法

选用OlympusXQ260电子显微镜，在五颜六色电子显微镜屏幕指示下，经过逆行胆管造影办法，在肝脏原发性肝癌安排进行多点打针，AAV-HGFK1打针剂量为1×1012 VP，Adv-p53打针剂量为2×1012 VP（Adv-p53和AAV-HGFK1打针液均购自南京凯基生物科技有限公司，规范：1×1024 VP/支）。每周1次，每5次为一个阶段，针刺深度应适合，一般达正常安排交界处即可，不用逾越肿瘤安排而进入正常肝细胞安排内。

1.3 点评目标

1.3.1 重生微血管和凋亡细胞率 对两组患者医治后肝穿刺活检标本进行安排白腊切片，免疫组化染色。其间兔抗小鼠vWF多克隆抗体和羊抗人HGFK1多克隆抗体购自上海研晶实业科技有限公司。UFX-DX倒置显微镜和荧光显微镜购自日本Olympus公司。阳性细胞为棕色，重生微血管计数首先在低倍镜视界下断定肿瘤内重生微血管最密布区域，之后在高倍镜视界内计数5个视界，取5个视界中的重生微血管均匀数。凋亡细胞率检测选用原位细胞凋亡检测试剂盒（购自深圳纽邦生物科技有限公司），检测办法依照试剂盒说明书进行。在高倍镜视界内选取5个区域进行凋亡细胞和总细胞计数，凋亡细胞率为二者比值。

1.3.2 临床作用 选用mRECIST点评规范，点评两组患者医治作用。分为完全缓解（CR）：至少保持4周无新病灶呈现，一起已知病灶消失；部分缓解（PR）：至少保持4周无新病灶呈现，一起已知病灶最大直径总和缩小>30%；疾病安稳（SD）：至少保持4周无新病灶呈现，但未达CR、PR或PD规范；疾病发展（PD）：呈现新病灶或已知病灶最大直径总和增大>20%[2]。其间疾病操控率为CR、PR和SD患者占一切患者的比率，疾病缓解率为CR、PR患者占一切患者的比率。

1.3.3 随访 关于两组患者进行随访，随访内容为：医治后1年内每3个月检测一次血清甲胎蛋白（AFP）和腹部CT、胸部CT和骨扫描。1年后每半年复查一次。比照两组患者1年、3年的复发率和生计率。

1.4 统计学办法

选用SPSS16.0统计学软件进行剖析，计数材料以%表明，选用χ2查验，计量材料以（x±s）表明，选用t查验。P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 两组患者医治后重生微血管和凋亡细胞率比较

AAV-HGFK1+Adv-p53组医治后第14天、第21天的重生微血管数量显着低于AAV-HGFK1组，凋亡细胞率显着高于AAV-HGFK1组（P<0.01）。两组患者医治后第21天的重生微血管数量和凋亡细胞率均显着高于医治后第14天（P<0.01）。见表1、封三图5、图6。

2.2 两组患者临床作用比较

AAV-HGFK1+Adv-p53组的疾病操控率为76.00%，显着高于AAV-HGFK1组的48.00%（χ2=4.1596，P=0.041<0.05）；两组患者的疾病缓解率差异无统计学含义（χ2=2.9138，P>0.05）。见表2。

2.3 两组患者复发率和生计率比较

AAV-HGFK1+Adv-p53组的均匀随访时刻为（37.1±4.4）个月（4～51个月），AAV-HGFK1组的均匀随访时刻为（18.4±2.7）个月（3～39个月）。AAV-HGFK1+Adv-p53组1年、3年复发率分别为20.00%和44.00%，1年、3年生计率分别为92.00%和80.00%；AAV-HGFK1组1年、3年复发率分别为68.00%和72.00%，1年、3年生计率分别为52.00%和40.00%。AAV-HGFK1+Adv-p53组1年、3年复发率显着低于AAV-HGFK1组，1年、3年生计率显着高于AAV-HGFK1组（P<0.05）。见表3。

表3 两组患者复发率和生计率比较[n（%）]

3 评论

现阶段关于原发性肝癌的医治越来越倾向于基因水平的干涉医治，鉴于传统手术切除原发肝癌安排并适度联合术后放疗或许化疗的办法，并未显着改进患者术后5年生计率或许中位生计时刻，科研工作者以及一线临床医师越来越倾向于经过转染抑癌基因来搅扰肿瘤细胞增殖以及搬运[4]。HGFK1为79个氨基酸组成的环形结构，最早被发现可以经过按捺成纤维细胞成长因子而促进牛血管内皮细胞增殖，Jin B等[5]研讨发现HGFK1拮抗肝原发性癌细胞增殖以及抗部分微血管构成作用首要经过EGF/EGFR或许VEGF/VEGFR信号通路激活来完成，一起 Jin B等在大鼠肝癌模型中发现，HGFK1能显着下降肝细胞癌部分微血管密度，阻断相应的肺部肿瘤搬运的发作；而P53基因首要经过促进受损DNA细胞凋亡、调控细胞周期、修正DNA反常甲基化或许磷酸化等损害，完成其抗肿瘤效应，而骤变型P53不只难以保持正常细胞周期，还或许加重相关肿瘤信号通路激活促进肿瘤细胞增殖，而 Cheung PF等[6]学者发现，原发性肝癌患者体内P53基因骤变型约占78%～85%，提示肝癌患者体内P53难以发挥其抗肿瘤效应。本研讨重在讨论AAV-HGFK1联合Adv-p53医治原发性肝癌的作用，以提醒相应的基因医治关于肝癌医治的潜在价值。

本研讨在剖析发展期肝癌患者共50例（包含对照组25例和调查组25例）相应的基因医治的作用后发现，AAV-HGFK1+Adv-p53组医治后第14天、第21天的重生微血管数量显着低于AAV-HGFK1组，凋亡细胞率显着高于AAV-HGFK1组，与Wei JC等[7]学者的定论类似。Wei JC等[7]发现P53经过腺病毒成功转染入原发性肝癌细胞内后，经过按捺G0期细胞快速进入G1期并显着下降G2/S期细胞份额按捺肿瘤细胞增殖，一起经过激活CMAP/pka/cmyc信号通路促进肝癌细胞凋亡，一起Wei JC等学者发现，P53成功转染后，肝癌细胞部分微环境显着发作改动，部分血管密度显着下降，肿瘤微环境中肝癌肿瘤干细胞份额以及活性显着下降，并以为P53或许经过fasl/caspase8/BAX来按捺部分微血管增生；关于两组患者临床作用的比照，本研讨发现AAV-HGFK1+Adv-p53组的疾病操控率为76.00%，显着高于AAV-HGFK1组48.00%，但两组患者的疾病缓解率尚无统计学差异，考虑AAV-HGFK1+Adv-p53医治后，或许经过按捺肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、下降部分微血管密度改进患者预后[8-14]，与Hu S[15]、陆玉敏等[16]学者的研讨成果共同，Hu S等[15]学者发现，P53或许独自AAV-HGFK1转染机体肿瘤细胞后，其临床转归显着优于对照组，一起远处搬运的发作率由37%显着下降至15%，Hu S等[15]学者经过腺病毒转染P53入145例亚洲原发性晚期肝癌患者部分肿瘤安排细胞内后发现，患者术后中位生计由（78.5±11.3）个月显着上升至（89.5±14.8）个月，但本研讨并未发现两组患者疾病缓解率的差异，考虑或许与本研讨样本量缺乏有关，一起调查时刻或许缺乏导致统计学差异无法体现。最终本研讨关于两组患者出院后相关临床预后进行剖析后发现，AAV-HGFK1+Adv-p53组1年复发率显着低于AAV-HGFK1组，1年生计率显着高于AAV-HGFK1组，进一步确认了AAV-HGFK1联合Adv-p53进行基因医治的重要临床价值。

在注意到AAV-HGFK1联合Adv-p53进行基因医治的临床作用的一起，部分学者以为，AAV-HGFK1联合Adv-p53进行基因医治的临床有用状况以及相关预后状况的改进首要取决于原发性肝癌患者体内P53或许HGF的骤变型份额[17，18]，如 Giovannini C等[19]学者注意到，一旦P53或许HGF的骤变型份额低于40%，相关的基因医治关于原发性肝癌特别是晚期患者根本未见有显着差异的作用，一起相关术后中位生计时刻并无改进。史守良[20]、王苗等[21]学者也发现，P53或许HGF的骤变型/野生型份额高于2.5时，相关肝癌患者术后五年生计率仅由45%升高至49%，且未见统计学差异，这都提示临床医师在不该盲目选用基因医治，应在归纳衡量后选用适宜的医治计划。

综上所述，Adv-p53、AAV-HGFK1联合医治发展期肝细胞癌作用优于AAV-HGFK1，并经过按捺肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、下降部分微血管密度等途径，提高患者的临床操控率，并有利于改进患者出院后一年内肝癌的复发率以及生计率，但关于相关基因骤变导致的临床有用率的问题需进一步大样本研讨。

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（收稿日期：2015-05-06）