t细胞首要坐落外周淋巴安排中的 宫颈癌患者外周血及安排中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg失衡的研讨
何芳 杨慧娟
[摘要] 意图 评论宫颈癌患者外周血及安排中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg失衡的含义。 办法 别离选取同期53例宫颈癌、25例CIN和25例子宫全切患者作为研讨目标，选用流式细胞仪检测外周血和宫颈安排中Th17细胞、Treg细胞表达。 成果 宫颈癌组、CIN组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg均显着高于对照组（P < 0.05）。外周血Th17细胞表达与FIGO分期呈正相关（P < 0.05），Treg细胞表达与分解程度呈负相关（P < 0.05）。安排中Th17/Treg与FIGO分期呈负相关（P < 0.05）。 定论 宫颈癌患者外周血和安排中Th17细胞和Treg细胞表达均显着升高，Th17/Treg失衡在宫颈癌发作开展过程中起重要促进效果。
[关键词] 宫颈癌；Th17细胞；Treg细胞；Th17/Treg平衡
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）10-0015-03
宫颈癌是导致女人逝世最首要的恶性肿瘤之一，免疫系统功用反常在肿瘤发作、开展过程中起重要的效果。Th17细胞、Treg细胞均属CD4+ T细胞亚群，介导细胞因子发挥不同的免疫效应，两者存在动态平衡联系，Th17/Treg失衡参加多种炎症、本身免疫性疾病及肿瘤的发作开展过程，均与肿瘤的免疫逃逸亲近相关[1，2]。本研讨旨在评论Th17细胞、Treg细胞在宫颈癌开展中的效果，及Th17/Treg失衡对宫颈癌发作开展的影响。
1 材料与办法
1.1 临床材料
选取2012年2月～2013年4月我院收治的53例宫颈癌患者作为宫颈癌组研讨目标，均经病理学查看证明为宫颈癌并结合印象学查看清晰分期，其间鳞癌35例，腺癌18例，年纪39～69岁，均匀（53.23±6.99）岁，FIGO临床分期Ⅰ期10例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例，Ⅳ期11例；另选取同期与宫颈癌组年纪匹配的CIN患者25例为CIN组研讨目标，标本来历于宫颈锥切手术标本、病理活检安排及外周血，均经病理学查看证明，CIN1级7例，CIN2级10例，CIN3级8例；再选取同期与宫颈癌组年纪匹配行子宫全切并排除恶性病变及癌前病变患者25例为对照组研讨目标，标本来历于子宫全切手术标本及外周血。
1.2 首要试剂及仪器
荧光抗人CD4-FITC、抗人CD25-APC、抗人Foxp3-PE、抗人IL-17-PE、抗人ROR-γt-PE单克隆抗体及相应同型对照抗体，固定及破膜试剂盒、人Foxp3试剂盒、人IL-17试剂盒、人ROR-γt试剂盒、人T细胞检测试剂盒（美国eBiosciences公司）。美国BD公司FACS Caliber流式细胞检测仪。
1.3 试验办法及调查目标
外周血标本于术前或病理活检前搜集空腹外周静脉血5 mL，惯例别离外周血单个核细胞，选用流式细胞技能定量检测抗人CD4-FITC、抗人CD25-APC、抗人Foxp3-PE、抗人IL-17-PE、抗人ROR-γt-PE单克隆抗体别离符号的Th17细胞和Treg细胞。宫颈安排标本冲刷后取新鲜安排剪碎，经安排消化液消化构成安排细胞悬液，别离单个核细胞，选用流式细胞仪技能定量检测Th17细胞和Treg细胞。每份样本至少搜集10 000个单个核细胞。
1.4 统计学处理
使用SPSS 18.0进行统计学处理，计量材料用均数±标准差（x±s）表明，组间比较选用方差剖析，两两比较选用q查验及t查验，相关性选用Pearson或Spearman秩相关剖析，P < 0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 宫颈癌组、CIN组和对照组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg比较
宫颈癌组、CIN组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg均显着高于对照组（P < 0.05），宫颈癌组又显着高于CIN组（P < 0.05）。见表1。
表1 宫颈癌组、CIN组和对照组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg比较（x±s，%）
注：qa为宫颈癌组与CIN组比较，*P < 0.05
2.2 宫颈癌组、CIN组和对照组安排中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg比较
宫颈癌组、CIN组安排中Th17细胞、Treg细胞表达均显着高于对照组，Th17/Treg均显着低于对照组（P < 0.05），宫颈癌组Th17细胞、Treg细胞高于CIN组（P < 0.05），Th17/Treg低于CIN组。见表2。
表2 宫颈癌组、CIN组和对照组安排中Th17细胞、Treg细胞表达
及Th17/Treg比较（x±s，%）
注：qa为宫颈癌组与CIN组比较，*P < 0.05
2.3 宫颈癌病理学特征与外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg的联系
外周血Th17细胞表达与FIGO分期、淋巴结搬运、脉管滋润有关（P < 0.05）。外周血Th17细胞表达与FIGO分期呈正相关（r=0.54，P < 0.05）。外周血Treg细胞表达与分解程度有关（P < 0.05），并呈负相关（r=-0.49，P < 0.05）。外周血Th17/Treg与淋巴结搬运、脉管滋润有关（P < 0.05）。见表3。
表3 宫颈癌病理学特征与外周血Th17细胞、Treg细胞表达
及Th17/Treg的联系（x±s，%）
注：*P < 0.05
2.4 宫颈癌病理学特征与安排中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg的联系
安排中Th17细胞表达与FIGO分期、分解程度、淋巴结搬运、脉管滋润有关（P<0.05）。安排中Th17细胞表达与FIGO分期呈正相关（r=0.50，P < 0.05），与分解程度呈负相关（r=-0.48，P < 0.05）。安排中细胞表达与FIGO分期、分解程度、淋巴结搬运、脉管滋润有关（P < 0.05）。安排中Treg细胞表达与FIGO分期呈正相关（r=0.57，P < 0.05），与分解程度呈负相关（r=-0.55，P < 0.05）。安排中Th17/Treg与FIGO分期、淋巴结搬运、脉管滋润有关（P < 0.05）。安排中Th17/Treg与FIGO分期呈负相关（r=-0.54，P < 0.05）。见表4。
表4 宫颈癌病理学特征与安排中Th17细胞、Treg细胞表达
及Th17/Treg的联系（x±s，%）
注：*P < 0.05
2.5 三组患者外周血及安排中Th17细胞、Treg细胞表达的相关性
外周血与安排中Th17细胞表达呈正相关（r=0.61，P < 0.05），外周血与安排中Treg细胞表达呈正相关（r=0.53，P < 0.05），安排中Th17细胞与Treg细胞表达呈负相关（r=-0.39，P < 0.05）。
3 评论
初始CD4+ T细胞经由不同细胞因子诱导别离构成以细胞免疫为主的Th1细胞，以体液免疫为主的Th2细胞，体现为免疫按捺效果的Treg细胞及在不同免疫环境中经过促炎、抗肿瘤细胞因子呈现不同免疫功用的Th17细胞[1，2]。Th1/Th2平衡是免疫系统功用调控中首要的相关机制，可反映机体内免疫应对方法的特征，肿瘤安排中平衡向Th2呈渐进式漂移，而Th17的分解和功用遭到前两者调控[5，6]。Treg分解首要受TGF-β诱导，而在TGF-β和IL-6一起效果下CD4+ T细胞则分解为Th17细胞，两者之间也存在竞赛相关平衡联系，在Th17和Treg细胞间存在彼此调控影响的奇妙联系[7-9]。
在肿瘤开展过程中Th17则参加其间，而且IL-17具有促血管生成效果，有利于肿瘤成长、滋润、搬运的发作[5-8]。还有动物研讨发现，Th17注入黑色素瘤模型小鼠体内则发挥了铲除肿瘤细胞、按捺黑色素瘤成长的效果，敲除IL-17基因后肿瘤成长、搬运活性更旺盛[10，11]。本研讨中CIN组和宫颈癌组的外周血和安排中Th17表达均显着高于对照组。外周血Th17细胞表达与宫颈癌FIGO分期、分解程度、淋巴结搬运、脉管滋润有关，随临床分期加剧、分解程度下降而表达升高，侵袭性和搬运活性更强患者的外周血中表达更强。而且外周血中表达与肿瘤安排中表达呈正相关，在两种标本中两者均呈表达升高趋势，与临床病理学特征的相关性也类似。肿瘤安排中Th17细胞表达相同与宫颈癌FIGO分期、分解程度、淋巴结搬运、脉管滋润有关。提示Th17细胞在宫颈癌发作初期即CIN期已呈现显着添加，表达跟着肿瘤恶性化添加而升高，在宫颈癌发作开展过程中体现为促进肿瘤成长、侵袭、搬运的效果；外周血和安排中的体现类似性较高，能够反映肿瘤安排中的Th17细胞分解、增殖特征。
Treg细胞对T细胞主导的肿瘤细胞杀伤效果具有激烈的按捺效果，削减对肿瘤细胞的进犯，诱导肿瘤细胞呈现免疫耐受而逃脱免疫系统杀伤，其免疫按捺效果相同体现在HIV、HPV感染的患者中，CIN、宫颈癌与高危型HPV感染具有亲近联系[12]。本研讨成果显现，CIN组和宫颈癌组外周血和安排中相同呈现Treg细胞表达显着升高并显着高于对照组的状况，宫颈癌组表达较CIN组高。但外周血和安排中的表达却呈现显着的不同，外周血中Treg细胞表达尽管呈现显着的升高但与FIGO分期、肿瘤巨细、淋巴结搬运、脉管滋润等肿瘤成长开展相关的病理学特征无显着相关性，仅与分解程度呈显着的负相关。而在安排中与其相关的病理学特征包含FIGO分期、分解程度、淋巴结搬运、脉管滋润。提示Treg细胞与肿瘤恶性程度联系更为亲近，其与肿瘤的成长、侵袭、搬运也存在相关性，但外周血并未体现出这一特征。有研讨以为Treg细胞或许为肿瘤细胞由外周血招募而来，外周血中Treg细胞表达与临床分期有关，与本研讨成果不同。揣度Treg的来历或许不止于外周血，跟着安排周围CD4+ T细胞滋润，被肿瘤细胞诱导分解而来的Treg细胞也许是首要的Treg来历，而外周血招募或许作为一种全体的调理补给。
Th17/Treg反映的Th17细胞和Treg细胞的联系，对判别肿瘤患者免疫系统功用紊乱程度有指导效果。安排中Th17/Treg与FIGO分期、淋巴结搬运、脉管滋润均有关。体现跟着肿瘤开展、侵袭、搬运活性增强，免疫逃逸现象越显着，此刻Th17细胞则增加已远不及Treg细胞，两者平衡呈现显着漂移，Treg细胞的效果或许对Th17细胞的抗肿瘤效果构成按捺，两者联系与Th1/Th2漂移促进Th17细胞分解的效果结合而构成Th17细胞高表达促进肿瘤重生血管生成，而肿瘤杀伤效果受按捺的有利于肿瘤开展的免疫环境。
总述所述，宫颈癌患者外周血和安排中Th17细胞和Treg细胞表达均显着升高，在宫颈癌发作开展过程中起重要促进效果。安排中Th17/Treg失衡反响肿瘤细胞促进构成有利于本身增殖、成长环境的免疫调理效果增强，Treg细胞的分解和功用在宫颈癌安排中体现更为强势。
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（收稿日期：2013-09-25）