阿尔茨海默病概述 抵当汤对阿尔茨海默病大鼠脑安排端粒酶活性的影响

王康锋　张立娟　孙西庆等

[摘要] 意图 调查抵当汤对阿尔茨海默病（AD）大鼠脑安排端粒酶活性及学习回忆才能的影响。 办法 40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组和抵当汤组。选用右侧海马打针Aβ25-35办法制备AD大鼠模型，医治组选用抵当汤医治，对照组给予多奈哌齐，均接连灌胃给药，阶段为8周，选用跳台试验调查各组大鼠学习回忆才能的改动。试验完毕后处死大鼠，选用ELISA检测脑安排端粒酶活性。 成果 试验完毕后各用药组躲避潜伏期较模型组显着延伸，过错次数显着削减（P<0.05，P<0.01），抵当汤组较多奈哌齐组过错次数削减更显着（P<0.05）；与模型组比较，抵当汤组和多奈哌齐组脑安排端粒酶活性显着进步（P<0.05，P<0.01），抵当汤组较多奈哌齐组进步更显着（P<0.05）。 定论 抵当汤可显着改进AD大鼠的学习回忆才能，其机制可能与该方进步大鼠脑安排端粒酶活性有关。

[关键词] 抵当汤；阿尔茨海默病；端粒酶；学习回忆

[中图分类号] R289.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）04（b）-0011-03

[Abstract] Objective To observe the influence of Didang Decoction on telomerase activity and the ability of learning and memory of brain tissue in rats with Alzheimer disease（AD）. Methods 40 male Wistar rats were randomly divided into the pseudo operation group，model group，donepezil group and Didang decoction group.AD rats model was made by the method of injecting A beta 25-35 in the right hippocampus.The Didang decoction group was treated by used Didang decoction， the donepezil group was treated by donepezil，the rats，all groups were given continuous intragastric administration for 8 weeks，after the medication step down test was performed to observe the changes of learning and memory ability in different groups of rats.After the experiment，the rats were sacrificed and ELISA was used to detect telomerase activity in brain tissue. Results Compared with the model group，the escape latent period of rats in each treatment group was prolonged significantly （P<0.05，P<0.01），error number was decreased obviously，it was more significantly decreased in the Didang decoction group compared with that in the donepezil group（P<0.05）；compared with the model group，the telomerase activity of the Didang decoction group and donepezil group increased significantly （P<0.05，P<0.01），and it was more significantly increased in Didang decoction group compared with that in the donepezil group （P<0.05）. Conclusion Didang decoction can significantly improve the learning and memory ability of rats with AD，and its mechanism may be related to this prescription increasing telomerase activity in brain tissue of rats.

[Key words] Didang decoction；Alzheimer disease；Telomerase；Learning and memory

抵当汤是张仲景创建的理血名方，至今仍在临床被广泛运用，本方由桃仁、大黄、水蛭、虻虫组成，原为下焦蓄血证所设。经过历代医家的不断发展，本方运用规模不断扩大，现在已被运用于泌尿系疾病、心脑血管疾病、妇科疾病等数十种疾病。咱们受本方主治“如狂”“喜忘”等症状的启示，选用抵当汤医治阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）取得了满足的效果，总有功率达80.0%，显着优于西药对照组[1]，但本方医治AD的根底研讨现在还非常单薄，本研讨经过Aβ25-35海马区打针树立AD动物模型并用抵当汤进行干涉，调查本方对AD大鼠脑安排端粒酶（telomerase）活性及学习回忆才能的影响，评论其效果机制。

1资料与办法

1.1 药物与试剂

抵当汤药物组成：桃仁12 g，水蛭6 g，虻虫6 g，大黄9 g。水煎后浓缩至每毫升含生药3 g备用。盐酸多奈哌齐片[安理申，卫材（我国）药业有限公司，批号130536A]。Aβ25-35购于Sigma公司。大鼠端粒酶（TE）酶联免疫剖析（ELISA）试剂盒购于美国R&D公司。

1.2 仪器

脑立体定向仪（江湾1号C型，上海川沙花木农机厂），酶标仪（352型，芬兰Labsystems Multiskan MS），洗板机（AC8型，芬兰Thermo Labsystems），微量高速离心机（TG16W，湖南长沙普通仪器仪表有限公司），隔水式恒温培养箱（GNP-9080型，青岛正恒试验设备有限公司），大鼠跳台仪（克己）。

1.3 动物

雄性Wistar大鼠40只，清洁级，体质量200～250 g，由山东中医药大学试验动物中心供给。

1.4 试验办法

1.4.1 动物分组及给药 将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组、抵当汤组，每组各10只。医治药物及对照药物参阅临床用药状况，按成人（60 kg）日用药量的10倍量折算成大鼠运用剂量。造模次日开端灌胃给药，1次/d。假手术组及模型组用等体积生理盐水灌胃，阶段均为8周。

1.4.2 动物模型的树立 参阅文献[2]办法大鼠用10%水合氯醛（3～3.5 ml/kg）腹腔打针麻醉后头部固定于立体定向仪，惯例消毒后露出颅骨，以右侧海马为打针区，定位坐标：前囟后3.0 mm，中线右侧2.0 mm，硬膜下2.6 mm。将1 μl集合态Aβ25-35（10 μg/μl）缓慢注入，打针时刻5 min，留针5 min，术后缝合切断。

1.4.3 跳台试验 跳台试验于造模后及用药后各进行1次。练习时将大鼠别离放入克己大鼠跳台仪内，先适应环境3 min，然后通以36 V交流电，大鼠受电击后，正常反响是跳上跳台以躲避电击。练习5 min，记载大鼠第一次跳下时触电潜伏期，并记载5 min内触电次数作为过错反响次数，以此作为学习成果。24 h后从头测验，记载第一次跳下渠道的触电潜伏期和5 min内触电次数，此即回忆坚持成果。

1.4.4 端粒酶活性检测 大鼠处身后快速取出大脑，以生理盐水制成10%安排匀浆用于检测端粒酶活性，选用ELISA，具体办法参阅试剂盒说明书进行。

1.5统计学处理

所得数据用SPSS 19.0统计学软件作统计剖析，样本均数间比较用方差剖析，以P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 4组跳台试验成果的比较

试验完毕后各用药组躲避潜伏期均较模型组显着延伸，一起5 min内过错次数显着削减（P<0.05，P<0.01），抵当汤组过错次数削减更显着，与多奈哌齐组比较，差异有统计学含义（P<0.05），躲避潜伏期虽较多奈哌齐组延伸，但无统计学含义（P>0.05）（表1）。

3 评论

AD是一种发生于中晚年的原发性脑退行性变性疾病。本病在晚年人群中发病率高，是现代社会最常见的晚年性中枢神经体系疾病之一，严重威胁了晚年人的生命和健康。现在我国60岁以上人群AD发病率已高达3%～5%[3]，全球每年新添加460万AD患者[4]。跟着国际人口老龄化程度的进步，AD患病率不断增高，本病引起的社会问题和经济问题必将日益严峻。

AD既往虽然有胆碱能危害[5]、自由基[6]、兴奋性氨基酸毒性[7]、炎症免疫[8]、细胞凋亡[9]等假说，但均未能彻底说明其发病机制，近年来端粒酶与AD的联系备受重视。端粒酶是由RNA和蛋白质组成的核糖核蛋白体，是一种依靠RNA的逆转录酶，在保持端粒的长度方面起重要效果。在AD发病与患者PBLs端粒长度的研讨中，Jenkins等[10]对比了18例Down综合征妇女的PBLs端粒长度，提示兼并有AD的患者端粒较短。Honig等[11]也调查到了AD组PBLs端粒较短，一起发现端粒长度越短，研讨目标死亡率越高。端粒与认知功用的联系亦有开始研讨，Valdes等[12]对382名双胞胎妇女的研讨发现具有较长端粒的学习回忆才能较强，端粒较短者易呈现认知功用的下降。Yaffe等[13]对2734个非AD白叟进行了7年的前瞻性研讨，发现端粒较长者认知功用鉴定得分下降最少，端粒较短者得分下降较多，以为PBLs端粒长度或许能够作为点评认知功用状况的目标之一。

抵当汤是张仲景医治下焦蓄血证的经典丹方，临床广为运用，如《伤寒论》第237条云“阳明证，其人喜忘者，必有蓄血，所以然者，本有久瘀血，故令喜忘，屎虽硬，大便反易，其色必黑者，宜抵当汤下之。”本方主治的“如狂”“喜忘”等症状与AD的临床表现极为类似，咱们以此为学习，临床上选用本方医治AD取得了满足的效果[1，14]。关于本方医治AD的效果机制也有部分学者进行了研讨，抵当汤能显着进步晚年大鼠的回忆保存率，具有显着的改进回忆效果[15]，现在以为其效果与改进血液循环、调理血脂、抗氧化及维护内皮功用等效果有关[16-17]。本研讨成果显现，抵当汤能够显着进步AD大鼠学习回忆才能，延伸大鼠跳台潜伏期，削减5 min内过错次数，与文献报导成果共同[15]。一起本方能够显着进步AD大鼠脑安排端粒酶活性，显着优于对照药物多奈哌齐，这可能是抵当汤医治AD的机制之一。

[参阅文献]

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（收稿日期：2014-03-14 本文修改：许俊琴）

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（收稿日期：2014-03-14 本文修改：许俊琴）

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（收稿日期：2014-03-14 本文修改：许俊琴）