大鼠脊髓选材 艾灸对脊髓横断术后大鼠胃黏膜安排相关因子及热休克蛋白70表达的影响
陈英 于隽 杨舟 李飞 陈果 向丽婷 向娟 彭亮
摘要：意图 调查艾灸对大鼠胃黏膜安排白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、表皮生长因子（EGF）及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响，评论艾灸对胃黏膜的维护效应与脊髓的联系。办法 试验大鼠选用无水乙醇+阿司匹林灌胃制造胃黏膜损害模型。将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组，每组12只。艾灸+脊髓横断组大鼠行脊髓横断手术，并予以艾灸干涉。GUTH法核算胃黏膜安排损害指数（UI），ELISA检测血清IL-1β、TNF-α和EGF含量；Western blot检测胃黏膜安排HSP70蛋白表达。成果 与模型组比较，艾灸模型组大鼠胃黏膜安排UI下降、EGF含量升高，血清IL-1β、TNF-α含量下降（P<0.05，P<0.01）；与艾灸模型组比较，艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜安排UI升高、EGF含量下降，血清IL-1β、TNF-α含量升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜安排HSP70蛋白表达均显着增加（P<0.01）。定论 脊髓是艾灸对胃黏膜损害修正与维护因子表达的重要调理途径。
关键词：脊髓横断术；艾灸；胃黏膜损害；维护因子；热休克蛋白70；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.08.021
中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）08-0080-03
艾灸是一种温热影响原，具有维护机体胃黏膜的成效。前期研讨标明，艾灸关于引起胃黏膜损害的多种杂乱要素有调理性[1-2]。本研讨在脊髓横断的条件条件下，调查艾灸对大鼠胃黏膜安排白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、表皮生长因子（EGF）及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响，评论艾灸对胃黏膜的维护效应与脊髓的联系。
1 试验资料
1.1 动物
48只健康成年SD大鼠，鼠龄3～4月，体质量180～200 g，男女参半，许可证号SYXK（湘）2013-0005。养殖于湖南中医药大学动物中心试验室，温度23～26 ℃，湿度40%～60%，自在饮食饮水。
1.2 艾条和药物
温灸纯艾条，蕲春时珍本草科技有限公司，标准φ4 mm×100 mm。青霉素，华北制药股份有限公司，批号20141001；阿司匹林泡腾片，阿斯利康制药有限公司，批号20141202。
1.3 首要试剂与仪器
10%甲醛（国药集团化学试剂有限公司），ELISA检测试剂盒、HSP70免疫组化检测试剂盒（长沙维尔公司）。克己艾灸支架，隔热薄膜。
2 试验办法
2.1 分组、造模及干涉
试验大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组，每组12只，男女分笼养殖7 d。选用无水乙醇和阿司匹林灌胃制造胃黏膜损害模型，艾灸+脊髓横断组大鼠予以脊髓横断手术，其他组正常养殖。术后大鼠用绳子俯卧位绑缚在鼠板上，参照文献[3]腧穴定位“足三里”，剪毛，后贴上有孔隔热贴，再把艾条固定在专门制造的艾灸支架上，将点着的艾条施灸大鼠双侧“足三里”，间隔穴道约0.5 cm。每日2次（8：00，14：00），接连8 d。正常组和模型组大鼠予8 d假艾灸绑缚操作。
2.2 胃黏膜安排损害指数测定
大鼠腹腔打针20%乌拉坦（0.6 mL/100 g）麻醉，将幽门及贲门部结扎处理，摘取全胃，冰0.9%氯化钠溶液冲刷，GUTH法核算大鼠胃黏膜损害指数（UI）。损害≤1 mm（包含斑驳溃烂）计1分；1 mm<损害≤2 mm计2分；2 mm<损害≤3 mm计3分；3 mm<损害≤4 mm计4分；损害≥4 mm计5分；损害宽度>2 mm者计分加倍。
2.3 胃黏膜安排相关因子测定
ELISA检测大鼠血清IL-1β、TNF-α和胃黏膜安排EGF含量，严厉依照试剂盒阐明进行操作；Western blot检测大鼠胃黏膜安排HSP70蛋白表达，使用Imag J对WB条带进行灰度剖析，以β-actin作为内参对照，将意图蛋白灰度值除以β-actin灰度值校对差错，以相对灰度值标明。
3 计算学办法
选用SPSS23.0计算软件进行剖析。试验数据以—x±s标明。契合正态分布选用方差剖析，方差齐用SNK法或LSD法，方差不齐用Dunnett's T3法或Tamhan's T2法；不契合正态分布的用K Independent Samples法比较多个独立样本。P<0.05标明差异有计算学含义。
4 成果
4.1 艾灸对模型大鼠胃黏膜安排损害指数的影响
与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜安排UI显着升高（P<0.01）；与模型组比较，艾灸模型组大鼠胃黏膜安排UI显着下降（P<0.01）；与艾灸模型组比较，艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜安排UI显着升高（P<0.01）。成果见表1。
4.2 艾灸对模型大鼠胃黏膜安排表皮生长因子和血清白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α含量的影响
与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜安排EGF和血清IL-1β、TNF-α含量显着升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，艾灸模型组大鼠胃黏膜安排EGF含量显着升高（P<0.01），大鼠血清IL-1β、TNF-α含量显着下降（P<0.05，P<0.01）；与艾灸模型组比较，艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜安排EGF含量显着下降（P<0.01），大鼠血清IL-1β、TNF-α水平显着升高（P<0.05，P<0.01）。成果见表2。
4.3 艾灸对模型大鼠胃黏膜安排热休克蛋白70蛋白表达的影响
与模型组比较，艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜安排HSP70蛋白表达显着增加（P<0.01），艾灸+脊髓横断组HSP70蛋白表达较艾灸模型组下降（P<0.05）。成果见表3、图1。
5 评论
艾灸具有行气止痛、通经活络、温经散寒等成效。足三里是脏腑中胃的下合穴，又是经络中足阳明胃经的合穴，故在针灸医治胃肠道疾病方面，足三里常常被用作首要穴道。有研讨显现，电针家兔足阳明胃经上的穴道进行医治发现，该经脉上的穴道均会对家兔胃黏膜发生不同的维护效应，而在这些穴道中，“足三里”对胃黏膜的维护效应最佳[4]。在机体胃黏膜遭到损害及修正进程中，机体进行自我维护机制最重要的是内源性维护机制，该机制的实质是机体习惯性反响引发机体内源性维护物质的呈现，多种生长因子和细胞因子参加了胃黏膜上皮损害修正的调理。
EGF是一种内源性因子，能按捺胃酸、胃蛋白酶排泄，避免溃疡的构成，具有促胃黏膜上皮细胞搬迁和增殖的效果[5-6]，故EGF在修正机体受损害的胃黏膜方面发挥着至关重要的效果。在本试验中，艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜安排EGF含量较模型组均有不同程度的上升，而艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜安排EGF含量较艾灸模型组下降，标明艾灸上调胃黏膜安排EGF含量的效果遭到脊髓横断术的影响。
IL-1β具有促进机体的炎性细胞因子表达，并能促进机体中性粒细胞滋润的效果。TNF-α也是一种炎性介质，可引起机体发生炎症反响。本试验成果标明，艾灸效果于胃黏膜遭到损害的大鼠能下降大鼠血清炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的含量，经过减轻炎症反响到达维护大鼠胃黏膜的效果。而大鼠脊髓遭到横断后，艾灸效果于大鼠反而会上升大鼠血清IL-1β和TNF-α的含量。标明艾灸大鼠“足三里”经过细胞因子来维护胃黏膜的这一效果有脊髓的参加。
HSP70是胃黏膜维护中一类重要蛋白，具有细胞蛋白自稳、协同免疫、抗细胞凋亡、抗氧化等效果。研讨发现，艾灸可以维护应激性胃黏膜受损害大鼠的胃黏膜，这一维护进程可能与艾灸诱导大鼠胃黏膜安排HSP70表达有关[7]。HSP70在长期乙醇和阿司匹林影响胃黏膜后以及高热后的表达显着增加，可以发生机体习惯性的细胞维护效果[8-9]。
本试验将大鼠脊髓横断调查艾灸大鼠“足三里”对胃黏膜受损大鼠的按捺造用及对大鼠胃黏膜修正的维护效果。成果标明，艾灸大鼠“足三里”对大鼠胃黏膜损害具有显着的维护效果，而脊髓横断术对其维护效果发生搅扰。标明脊髓是艾灸对大鼠胃黏膜相关因子及HSP70表达进行调理的重要途径，脊髓是艾灸“足三里”对胃黏膜维护效应信号通路的一部分，起到重要的信号会聚与整合的效果。
参考文献：
[1] 杜燕，易受乡，林亚平，等.艾灸对急性胃黏膜损害大鼠热休克蛋白与相关炎性细胞因子的影响[J].上海针灸杂志，2010，29（5）：269-272.
[2] 易受乡，彭艳，常小荣，等.艾灸对应激性胃黏膜损害大鼠胃黏膜细胞增殖和凋亡的影响及其与热休克蛋白表达联系的研讨[J].针刺研讨， 2006，31（5）：259-271.
[3] 李忠仁.试验针灸学[M].北京：我国中医药出版社，2007：255-257.
[4] 严洁，常小荣，邓元江，等.电针足阳明经穴对家兔胃黏膜损害细胞维护效果的研讨[J].针刺研讨，2001，26（4）：264-269.
[5] 姒健敏.重视生长因子对胃黏膜的维护效果[J].中华医学杂志，2005， 85（39）：2744-2745.
[6] 贾赤宇，陈壁.EGF，TGF-β1，抗TGF-β1中和抗体对大鼠深Ⅱ°烫坏创面的影响[J].1999，20（5）：427-430.
[7] 李江山，严洁，何军锋，等.电针对心肌缺血模型大鼠孤束核c-fos表达及心电图STⅡ的影响[J].针刺研讨，2009，34（3）：171-173.
[8] ITOH Y H， ISHIGUCHI T， AYAKAWA Y. Expression of stress protein （HSP70） in adrenalectomized mice[J]. Nippon Igaku Hoshasen Gakkai Zasshi，2002，62：161-167.
[9] ITOH Y H， NOGUCHI R. Pre-treatment with mild whole-body heating prevents gastric ulcer induced by restraint and water-immersion stress in rats[J]. Int J Hyperthermia，2000，16：183-191.