macd目标运用技巧口诀 多目标归纳评分法优选三拗汤提取工艺研讨

张金花 刘陶世 程建明 毕肖林 钱海峰 陈冬冬

摘要：意图 选用高效液相色谱法一起测定三拗汤提取液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸4种有效成分的含量，优选三拗汤最佳提取工艺条件。办法 选用正交实验，以加水量、煎煮时刻和煎煮次数为调查要素，以盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸搬运率以及出膏率为调查目标，进行多目标归纳评分。成果 三拗汤提取影响要素依次为煎煮次数>煎煮时刻>加水量。最佳提取工艺条件为加10倍量水，煎煮3次，每次1 h。定论 本研讨优选得到的提取工艺安稳可行。

关键词：三拗汤；正交实验；提取工艺

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.04.024

中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）04-0091-04

Study on Extracting Process of San Ao Decoction by Multi-indexes Grading Method ZHANG Jin-hua， LIU Tao-shi， CHENG Jian-ming， BI Xiao-lin， QIAN Hai-feng， CHEN Dong-dong （College of Pharmacy， Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210046， China）

Abstract： Objective To simultaneously determinate the contents of four active ingredients （Ephedrine Hydrochloride， Pseudoephedrine Hydrochloride， Amygdalin and Glycyrrhizinate） of San Ao Decoction by HPLC； To optimize the extracting process of San Ao Decoction. Methods The orthogonal test was employed. Volume of water， time of extraction and times of extraction were set as investigation factors； the transport rates of Ephedrine Hydrochloride， Pseudoephedrine Hydrochloride， Amygdalin and Glycyrrhizinate and the extraction rates were set as investigation indexes to conduct multi-indexes grading. Results The influence factors of the extraction of Sao Ao Decoction were the times of extraction > decoction time > the volume of water. The best extraction condition was： ten fold water； extract for three times； 1 h for each time. Conclusion The optimized extraction process is stable and feasible.

Key words： San Ao Decoction； orthogonal test； extracting process

三拗汤源于张仲景还魂汤，后被《和平惠民和剂局方》录入，成效宣肺解表、止咳平喘[1]。为最大化提取方药有效成分加以运用[2]，本研讨树立高效液相色谱法（HPLC）一起测定三拗汤提取液中4种有效成分办法，并结合正交实验挑选最佳提取工艺条件，为三拗汤新剂型研讨奠定根底。

1 仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱仪（包含在线脱气机、自动进样器、柱温箱、2998紫外检测器），十万分之一电子剖析天平（METTLER TOLEDO），Anke TGL-16G型离心机（上海安亭科学仪器厂）。

麻黄、苦杏仁、甘草购自亳州市京皖中药饮片厂，

基金项目：国家自然科学基金（81403114）；江苏高校优势学科建设工程赞助项目（2014年）

通讯作者：刘陶世，E-mail：tsliur4111@sina.com

经南京中医药大学刘圣金教授检测均契合2010年版《中华公民共和国药典》（一部）规则。对照品盐酸麻黄碱（批号171241-201007）、盐酸伪麻黄碱（批号171238-201207）、苦杏仁苷（批号820-200002）、甘草酸铵（批号110731-200511），我国食品药品检定研讨院；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸为剖析纯。

2 办法与成果

2.1 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸含量测定

2.1.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为活动相A，0.1%磷酸溶液为活动相B，按表1进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温30 ℃，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷在208 nm波长下检测，甘草酸铵在250 nm波长下检测，柱温30 ℃，色谱图见图1。

2.1.2 对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵对照品适量，精细称定，加甲醇制成每1 mL含43.7 μg盐酸麻黄碱、42.9 μg盐酸伪麻黄碱、202.1 μg苦杏仁苷和203 μg甘草酸铵的混合溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 精细量取提取液1 mL，加甲醇3 mL混匀，15 000 r/min离心10 min，上清液过0.45 μm滤膜，取续滤液，即得。

2.1.4 线性关系调查 取上述混合对照品溶液，精细取混合照品溶液2、4、8、10、20 μL，注入液相色谱仪，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：盐酸麻黄碱Y=2.4×106X-9575，r=0.999 5；盐酸伪麻黄碱Y=2.5×106X-21 735，r=0.999 5；苦杏仁苷Y=4.7×106X+45 295，r=0.999 6；甘草酸铵Y=7.6×105X+10 028，r=0.999 8。成果标明，盐酸麻黄碱在0.087 4～0.874 μg呈杰出线性关系，盐酸伪麻黄碱在0.085 8～0.858 μg呈杰出线性关系，苦杏仁苷在0.404 2～4.042 μg呈杰出线性关系，甘草酸铵在0.406～4.06 μg呈杰出线性关系。

2.1.5 精细度实验 取混合对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定，接连进样6次，记载盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵峰面积，核算得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵的RSD分别为1.13%、1.81%、1.73%、1.13 %，标明精细度杰出。

2.1.6 安稳性实验 取同一供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定，在0、2、4、6、8、10、12 h进样，记载峰面积，核算得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵的RSD分别为1.49%、1.58%、1.06%、1.35%，标明供试品溶液在12 h内安稳，可供检测。

2.1.7 重复性实验 平行制备5份三拗汤提取液，按“2.1.3”项下办法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定，记载峰面积，核算得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵的RSD分别为0.92%、0.68%、0.60%、1.11%，标明本办法重复性杰出。

2.1.8 加样回收率实验 精细移取已知含量的三拗汤提取液0.5 mL，平行9份，各精细参加样品含量80%、100%、120%的盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵对照品适量，按“2.1.3”项下办法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定，核算得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵的均匀加样回收率分别为101.15%、100.13%、99.98%、98.81%，RSD分别为1.12%、1.23%、1.56%、1.32%。

2.2 提取工艺调查

2.2.1 提取溶剂的调查 三拗汤中的有效成分主要为苷类和生物碱等，均易溶于有机溶剂，故选用水及95%、70%、50%、30%乙醇溶液作为提取溶剂进行调查，挑选出最合适的提取溶剂。采纳加热回流提取办法，以盐酸麻黄碱、盐伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸搬运率以及出膏率（精细移取滤液50 mL，放入枯燥至恒重的蒸发皿中，在水浴锅上蒸干，再移至105 ℃烘箱中枯燥3 h，取出，放置枯燥器中冷却，敏捷精细称定质量，核算，即得）为目标进行调查[3-4]。

称取5倍处方量饮片（麻黄9 g，苦杏仁9 g，甘草9 g），平行5份，第1次分别加10倍量水及95%、70%、50%、30%乙醇270 mL，回流提取1 h，过滤；第2次分别加8倍量水及95%、70%、50%、30%乙醇216 mL，回流提取1 h，过滤，兼并2次滤液，测定4种有效成分含量及出膏率，成果见表2。

从表2能够得出，95%乙醇提取后，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草酸搬运率均低于其他溶剂，尤其是甘草酸的搬运率只要7.15%；可是30%乙醇和50%乙醇提取后，苦杏仁苷的搬运率超越了100%，或许是因为在含有乙醇的溶剂中L-苦杏仁苷转化成D-苦杏仁苷，而一般苦杏仁苷指D-苦杏仁苷，因而搬运率超越100%；70%乙醇提取后，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草酸搬运率比较高；水提取的搬运率比70%乙醇提取的搬运率稍低，无明显差异，考虑到工业生产成本以及操作中安全问题，本实验挑选水为最佳提取溶剂。

2.2.2 正交实验规划与成果剖析 对三拗汤的水提取工艺进行调查，选用L9（34）正交实验规划，对加水量、煎煮时刻、煎煮次数3个要素进行调查。称取5倍处方量饮片（麻黄9 g，苦杏仁9 g，甘草9 g），按表4实验组织，以盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸搬运率以及出膏率为调查目标，按下式核算归纳评分（式中I为实验号），挑选最佳水提取工艺[5-6]。成果见表3～表5。

归纳点评I=0.3×（盐酸麻黄碱I÷盐酸麻黄碱最大值）+0.2×（盐酸

伪麻黄碱I÷盐酸伪麻黄碱最大值）+0.2×（苦杏仁苷I÷苦杏仁苷最大

值）+0.2×（甘草酸I÷甘草酸最大值）+0.1×（出膏率I÷出膏率最大值）

依据归纳方差剖析得出，煎煮次数对盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸搬运率以及出膏率有明显影响，加水量与煎煮时刻对盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸搬运率以及出膏率影响不明显，或许是因为这4种有效成分均为易溶解成分，很简单从水中提取出来；各要素对盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸搬运率以及出膏率影响要素巨细为C>B>A，C有明显影响，A和B无明显影响。依据直观剖析能够得出最佳工艺条件为A3B3C3，因为煎煮时刻和加水量对搬运率的影响不明显，为了缩短时刻及进步功率，挑选煎煮时刻为1 h，加水量为10倍量，故最佳提取工艺条件为A2B1C3，即加水量为10倍量，煎煮时刻为1 h，煎煮3次。

2.2.3 优选提取工艺的验证 为进一步调查上述优选提取工艺的安稳性，称取5倍处方量饮片（麻黄9 g，苦杏仁9 g，甘草9 g），按最佳条件重复提取3次，按上述制备办法和检测办法剖析优选工艺的安稳性，成果见表6。依照最佳工艺条件对三拗汤进行提取后，有效成分的搬运率均较高，且安稳性好，阐明该工艺条件合理可行。

3 评论

本研讨选用HPLC一起测定三拗汤中4种有效成分盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷和甘草酸铵，方便快捷。实验曾调查乙腈-磷酸缓冲盐溶液、乙腈-磷酸二氢钾溶液、甲醇-磷酸二氢钾溶液、甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水等系统，均不能使4种有效成分得到较好别离；而运用乙腈-0.1%磷酸系统进行梯度洗脱时，4种有效成分得到杰出别离，且别离度>1.5，契合要求。在调查乙腈-0.1%磷酸系统时发现，两者份额微调对有效成分别离作用有明显影响；在190～400 nm波长下进行全波长扫描，发现盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱与苦杏仁苷在208 nm波利益有最大吸收，甘草酸铵在250 nm波利益有最大吸收。

本研讨对三拗汤提取溶剂进行了调查，发现水提时有效成分的搬运率比较高，可作为最佳提取溶剂。用正交实验规划挑选出的最佳提取工艺条件为：加水量为10倍，煎煮时刻为1 h，煎煮3次。验证实验成果标明，该工艺安稳可行。

参考文献：

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（收稿日期：2015-06-17）

（修回日期：2015-12-03；修改：陈静）