铁皮石斛的栽种 恒温条件下采收机遇对铁皮石斛多糖的影响
王琦+刘京晶+斯金平+朱玉球+秦朗+张菊玲
[摘要]为提醒铁皮石斛多糖堆集的规则，清晰采收机遇对铁皮石斛多糖的影响，该研讨在组培室恒温条件下，于2015年12月至2016年11月预培育铁皮石斛D21无性系小苗至1 cm左右，然后转接培育2～5个月后采收，用苯酚硫酸法测定多糖含量、柱前衍生UPLC剖析单糖组分的差异，成果显现多糖及其要害组分甘露糖的含量与培育月龄呈正相关，但各种培育月龄多糖含量均在5—6月份具有峰值，并与大田培育条件下的趋势符合，标明即便在组培室安稳条件下，采收时节依然显着影响多糖及其组分的含量，这培育物内涵调控的多糖堆集动态改变趋势或许与铁皮石斛固有的感知四季改变的生命节律有关。
[要害词]铁皮石斛； 采收时节； 培育月龄； 多糖； 单糖
[Abstract]In order to reveal the accumulation trend of polysaccharides in Dendrobium catenatum and determine the effect of sampling time on polysaccharides， D Catenatum D21 clone was harvested from January to December after culturing for 2 to 5 months in the growth chamber with constant temperature Polysaccharides were determined by phenolsulfuric acid method and the monosaccharide compositions were analyzed by precolumn derivativeUPLC The results showed that the content of polysaccharide and its key component mannose was positively correlated with the culture time， but the contents of polysaccharides in all kinds of culture peaked from 5 to 6 months， which were consistent with the trend of field planting The results suggested that the trend of polysaccharide accumulation in the plant could be related to the life rhythm of the sensory seasons of D catenatum， which was significantly affected by the harvesting season， even under the constant condition of the culture chamber.
[Key words]Dendrobium catenatum； sampling time； culture time； polysaccharides； monosaccharide composition
鐵皮石斛Dendrobium catenatum （D officinale）[1]是我国传统贵重中药材，具有增强免疫力、抗肿瘤、滋阴清热、益胃生津等成效[2]。20世纪90年代以来，跟着铁皮石斛工业化要害技能的打破，工业得到迅速发展[37]，但现在依然存在出产周期长、本钱高，产品质量易受环境影响等问题，因而有学者提出组培、发酵工厂化出产的主张。为此，本文以无菌、恒温培育的铁皮石斛无性系为研讨目标，以其首要的成效成分多糖为点评目标，研讨恒温条件下采收时节与培育月龄对铁皮石斛多糖及其组分的影响，探究铁皮石斛多糖堆集机制与工厂化出产的可行性。
1资料与办法
11样品供试资料为铁皮石斛D21无性系，由浙江农林大学国家林业局铁皮石斛工程技能研讨中心自主选育。供试麦苗在接种后在（24±1） ℃，16 h·d-1光照条件下无菌培育。
2015年12月至2016年11月预培育铁皮石斛D21无性系小苗至1 cm左右，然后选择成长状况类似，高度约为1 cm的铁皮石斛组培苗转接于玻璃瓶（直径55 cm，高105 cm）内，每瓶10株。并按此办法处理：每月25日别离对供试组培苗进行转接，共12批次，每一批次包含4个处理，别离培育2，3，4，5个月的供试组培苗，每个处理为30瓶。
12仪器与试剂AB104N电子剖析天平（梅特勒托利多仪器上海有限公司）；DKS24型电热恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司）；DHG9070型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；紫外可见分光光度计（Thermo Scientific GENESYS 10s UVVIS）；D37520型高速离心机（德国Heraeus公司）；Acquity超高效液相色谱仪（PDA检测器，美国Waters公司）。
重蒸酚（国药集团化学试剂有限公司）；1苯基3甲基5吡唑啉酮（PMP）为化学纯；甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖对照品悉数购于我国食品药品检定研讨
院（批号别离为140651200602，111683200401，111646200301，110833200503，02269602，1508200001，1506200203）；其他所用试剂均为剖析纯；水为蒸馏水。
13多糖含量和单糖组分剖析将培育特定时刻后的组培苗取出，洗净培育基后去除根部和叶片，将茎置于60 ℃烘干至恒重，破坏，过60目筛，干燥器贮存待用。茎多糖量测定选用苯酚硫酸法，单糖选用柱前衍生办法[5]。色谱条件为：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（21 nm×150 nm，17 μm）；柱温30 ℃；活动相 002 mmol·L-1乙酸铵乙腈，梯度洗脱；流速 02 mL·min-1；进样量5 μL；检测波长254 nm。endprint
2成果与剖析
21采收机遇对茎多糖量的影响采收时节和培育月龄对铁皮石斛D21茎多糖量存在显着影响（表1）。不同采收时节的样品从全体上看多糖量跟着培育月龄添加而添加。培育月龄相同的D21无性系采收时节不同其多糖量存在显着差异，其间5—6月采收多糖量最高，培育月龄3个月，5月份采收多糖量为943%，超越全年均值5778%；培育月龄4个月，5月份采收多糖量到达1183%，超越全年均值5744%；培育月龄5个月，6月份采收多糖量到达1327%，超越全年均值5962%。该变异规则与大田培育DD21（曾用名6A2B）[7]存在显着的相关性（图1）。这标明在安稳培育条件下，铁皮石斛多糖含量依然存在动态改变，且与大田培育的趋势共同。
为了切当地反映培育月龄、采收时节及交互作用对铁皮石斛D21多糖量的影响，选用双要素方差剖析，成果显现培育月龄、采收时节及培育月龄×采收时节交互均对多糖量存在极显着影响（表2），其影响巨细为培育月龄>采收时节>培育月龄×采收时节。
22采收机遇对单糖组成的影响供试铁皮石斛D21单糖衍生后检测出5种单糖成分，别离为甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖（图2）。铁皮石斛D21多糖中各单糖量在不同采收时节和培育月龄下均存在显着差异，其首要组分甘露糖，从全体上看随培育月龄增加的改变趋势与多糖量改变共同，培育月龄相同的甘露糖堆集较显着的时节为5—6月；不同采收时节单糖含量及其份额存在显着差异，阐明不同采收时节多糖的组分也存在显着差异（表3）。
1甘露糖；2鼠李糖；3葡萄糖醛酸；4半乳糖醛酸；5葡萄糖；6半乳糖；7阿拉伯糖。
3定论与评论
铁皮石斛D21无性系在组培室恒温环境条件下培育，培育月龄、采收时节（对应天然时节）均显着影响多糖量及其组分。培育月龄（苗龄）与多糖及其要害组分甘露糖的含量存在显着的正相关，但培育月龄相同、采收时节不同的铁皮石斛D21多糖量改变规则与大田培育根本共同，在5—6月份多糖含量最高。研讨成果标明在外界条件安稳的情况下，铁皮石斛多糖含量及其组分依然具有时节性的动态改变，这或许由植物内涵感知时节规则的生物钟调控有关。这种多糖堆集动态改变，使铁皮石斛在无菌、恒温培育条件下周年循环出产中无法取得安稳多糖产值与组分，然后需求进一步探究铁皮石斛工厂化出产的工艺。
[参考文献]
[1]斯金平，张媛，罗毅波，等.石斛与铁皮石斛联系的本草考证[J]. 我国中药杂志，2017，42（10）：2001.
[2]我国药典一部[S].2015：282.
[3]斯金平，王琦，劉仲健，等.铁皮石斛工业化要害科学与技能的打破[J]. 我国中药杂志，2017，42（12）：2223.
[4]诸燕，斯金平，郭宝林，等.人工培育铁皮石斛多糖含量变异规则[J]. 我国中药杂志，2010，35（4）：427.
[5]苑鹤，白燕冰，斯金平，等.柱前衍生HPLC剖析铁皮石斛多糖中单糖组成的变异规则[J]. 我国中药杂志，2011，36（18）：2465.
[6]章晓玲，刘京晶，吴令上，等.铁皮石斛F1代多糖和醇溶性浸出物变异规则研讨[J]. 我国中药杂志，2013，38（21）：3687.
[7]俞巧仙，郭英英，斯金平，等.铁皮石斛多糖和醇溶性浸出物动态累积规则研讨[J]. 我国中药杂志，2014，39（24）：4769
[责任编辑吕冬梅]endprint