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王振恒+晋玲+马毅+崔治家+李倩+黄得栋
[摘要] 搜集不同产地南五味子药材进行等级区分，选用药典办法进行水分、总灰分的测定，选用UPLC测定五味子酯甲含量进测定，确定南五味子产品等级区分和五味子酯甲之间的联系。成果标明不同产地的南五味子药材水分、总灰分及五味子酯甲含量均合格。不同等级间的南五味子药材五味子酯甲的含量无显着差异，可是二等品含量最高，三等品、一等品含量低，等级与五味子酯甲的含量不成正相关联系。该研讨成果关于南五味药材的生产经营和质量点评具有必定指导意义。
[关键词] 南五味子； 产品规范等级； 五味子酯甲； 超高效液相色谱法
[Abstract] Schisandrae Sphenantherae Fructus， from different producing areas， were collected and divided into three grades. The moisture content and total ash were determined on the basis of the pharmacopoeia method， and schisantherin was determined by UPLC. The study is aimed to find the commercial specifications and grades of Schisandrae Sphenantherae Fructus based on schisantherin content. The results showed that the content of water， total ash and schisantherin of Schisandrae Sphenantherae Fructus from different producing areas qualified. There was no significant difference between different grades of schisandrin content， but the second-class were the highest， first-class and third-class were lower. It means that schisandrin content is not positive correlation to commercial grade. The study will be helpful to the production， management and clinical practice of Schisandrae Sphenantherae Fructus.
[Key words] Schisandrae Sphenantherae Fructus； commercial grade； schisantherin； UPLC
南五味子來源于木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的枯燥老练果实[1]。始载于《神农本草经》，列为上品，具有收敛固涩、补肾宁心等成效[2]。南五味子广泛散布在我国陕西、河南、湖南、安徽等地[3]。研讨资料标明南五味子中含有许多的木脂素类[4-6]成分，其有用成分具保肝、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等效果[7-8]，临床使用非常广泛。
现在，南五味子的商场需求量较大，但在产地、采收时刻、贮藏运送等条件影响下，药材的巨细、形状、色泽均有显着差异，这些差异与药材质量的联系有待试验证明。现在沿袭的五味子产品规范五味子分了2个等级，南五味子并没有分级规范[9]。为了习惯商场经济的开展，本试验参照本课题组南五味子产品规范等级划规范，对搜集到的药材进行等级区分。并以五味子酯甲为重要衡量目标对其质量和等级之间的联系进行调查，为药材商场买卖和临床使用供给依据。本试验搜集了4个不同产地的南五味子药材，并区分红3个等级，对其进行质量点评，然后探究产地和等级与南五味子药材质量的联系。
1 资料
1.1 样品
从药材商场、药材产地共购买南五味子药材4份，经甘肃中医药大学晋玲教授判定，均为南五味子正品，见表1。南五味分级时，药材共同点为干货。呈不规则球形或扁球形颗粒。干瘦舒展，果肉常紧贴种子上。内含肾形种子12粒，外表棕黄色，有光泽，种皮薄而脆。果肉气微，味酸。无枝梗、杂质、虫蛀、霉变。一等品直径5.05 mm以上，外表棕赤色至暗棕色；二等品直径4.25～5.05 mm，外表棕赤色至暗棕色；三等品直径52～4.25 mm，外表暗棕色或棕褐色。
1.2 仪器
Thermo Fisher ultimate 3000 RSLC超高效液相色谱仪（包含XRS自动进样器、RS柱温箱、DAD二极阵列检测器、Chromeleon 7.2色谱工作站，XRS高压四元梯度泵）（美国赛默飞世尔科技公司），Al104 1/1万电子剖析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司），OHAUS corporation DV SERIES 1/10万电子剖析天平（奥豪斯仪器有限公司），DHG-9123A电热鼓风恒温枯燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司），KQ-250TDB型高频数控超声波清洗器（昆仑山超声仪器有限公司），800 型离心沉积机（上海手术器十厂），DGG-9620A 电热恒温鼓风枯燥箱（上海齐欣科普仪器有限公司），MYB型电子调温电热套（天津市中环试验电炉有限公司），FW200型高速全能破坏机（北京科伟永兴仪器有限公司），TM0612型马福炉（上海亚荣生化仪器厂）。endprint
1.3 试剂
甲苯（剖析纯，天津大茂化学试剂厂），甲醇（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司），超纯水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）；对照品五味子酯甲（批号 B21328，纯度≥98%，上海源叶生物科技有限公司）。
2 办法与成果
2.1 水分测定
取南五味子粉末15 g，精细称定，置500 mL短颈圆底烧瓶中；加甲苯约200 mL，再参加数片枯燥、洁净的无釉小瓷片；衔接仪器，自冷凝管顶端参加甲苯至充溢水分测定管的狭细部分。将500 mL短颈圆底烧瓶置电热套中慢慢加热，待甲苯欢腾时，调理温度，使每秒馏出2滴。待水分彻底馏出（即测定管刻度部分的水量不再添加时），先用甲苯冲刷冷凝管内部，再用纯洁的甲苯将管壁上附着的甲苯推下，持续蒸馏5 min，冷却至室温，静置使水与甲苯彻底别离。检读水量，核算供试品的含水量，见表2。
试验成果标明，4个产地（每个产地3个等级）的南五味子样品水分均契合2015年版《我国药典》规则（不得过12%）。4个产地药材水分差异较小，等级间水分差异也较小，其间除30号湖南省外（二等品含水量最高），均是一等品含水量最高。
2.2 總灰分测定
将南五味子供试品破坏，过2号筛，混合均匀后，取供试品2.5 g，精细称定。置炽灼至恒重的坩埚中，称定质量（准确至0.01 g）。慢慢火热，避免焚烧，至彻底炭化时，逐步升高温度至500～600 ℃，使彻底灰化并至恒重。依据残渣质量，核算供试品中总灰分的含量，见表3。
试验成果标明，4个产地（各3个等级）的南五味子药材总灰分均契合2015年版《我国药典》规则（不得过6%）。产地和等级间药材总灰分差异较小，其间等级间以三等品总灰分较高。
2.3 目标性成分测定
2.3.1 色谱条件 ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；以甲醇（B）-水（A）为活动相梯度洗脱；流速0.3 mL·min-1 ；检测波长254 nm；柱温 35 ℃；进样量3.0 μL；梯度份额见表4。样品及对照品色谱图见图1，2。
2.3.2 对照品溶液的制备 精细称取五味子酯甲对照品，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，配成145.6，87.36，58.24，29.12，14.56，2.912 mg·L-1的规范溶液。于4 ℃下保存，备用。
2.3.3 供试品溶液的制备 取南五味子药材粉末（过60目筛）0.5 g，精细称定，别离置于50 mL 具塞三角锥形瓶中，精细参加50 mL甲醇，称重，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，至室温，再称重，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 办法学调查
2.4.1 线性联系调查 精细汲取质量浓度为2.912，14.56，29.12，58.24，87.36，145.6 mg·L-1的五味子酯甲对照品溶液各3 μL，注入超高效液相色谱仪（UPLC），以对照品质量浓度X为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，得线性方程，成果为Y=9.456 1X-0.176 43（R2=0.999 18）。成果标明，五味子酯甲的质量浓度在0.42～0.84 g·L-1，具有杰出的线性联系。
2.4.2 精细度试验 将质量浓度为87.36 mg·L-1 的五味子酯甲对照品溶液接连进样6 次，进样量为3 μL，测定峰面积，核算RSD，成果显现五味子酯甲峰面积的RSD 0.42%，保存时刻的RSD 0.17%。标明仪器精细度杰出。
2.4.3 稳定性试验 将湖南产南五味子一等品样品溶液，在同一洗脱梯度的条件下，并按2.3.1项下色谱条件测定，别离在制备后0，2，4，6，8 h 进样，记载色谱图、保存时刻和峰面积。核算RSD，成果显现，峰面积的RSD 1.8%，保存时刻的RSD为0.9%。标明样品溶液在8 h内稳性定杰出。
2.4.4 重复性试验 精细称取湖南产南五味子一等品5 份，依照2.3.3项下办法制备供试品溶液，并依照2.3.1项下色谱条件进行测定，记载峰面积和保存时刻，核算RSD。成果显现五味子酯甲峰面积的RSD 1.8%，保存时刻的RSD为0.33%。标明此试验办法重复性杰出。
2.5 五味子酯甲含量测定
依照2.3.2项下对4个产地（各3个等级）南五味子药材产品制备供试品，依照2.3.1项下色谱条件进行含量测定，见表5。
4个产地的南五味子药材五味子酯甲的含量均契合2015年版《我国药典》规则（不得少于0.20%）。产地对南五味子药材中五味子酯甲含量影响较大，等级对五味子酯甲含量的影响较小，其间二等品含量较高，一等品含量较低，等级跟五味子酯甲的含量不成正相关联系。以产地调查，湖南南五味子质量显着优于山西、陕西、河南产药材。因为样本量有限，有待进一步调查，见表6，7。
3 评论
本试验成果标明，4个省的南五味子样品中的水分、总灰分以及五味子酯甲含量均契合药典规则，药材全体质量杰出。其间一等品的南五味子含水量较高。不论是五味子，仍是南五味子均以肉厚、油润质量为好，从大的方面讲，五味子质量好于南五味子，从南五味子自身来讲，一等品含水量较高或许与其果肉相对厚度有关；三等品总灰分含量较高或许是因为其自身有许多破损的果实存在，导致泥土沙粒嵌在其间。南五味子药材中五味子酯甲和等级的相关性较小，等级间含量没有显着性差异。植物基原单一，而且南五味子作为果实类药材因为没有次生成长，果实中种子1～2枚较少，在较短成长时节中，终究果实中五味子酯甲含量没有发作显着差异。
从2010年版药典开端，南五味子和五味子分隔作为两种药材，有利于处理商场的紊乱，使其来历单一化。南五味子和五味子药材药用成效相同，可是商场价格五味子价格显着高于南五味子[10]，与传统质量点评有关，在产品外形也有表现。南五味子等级区分之后，依据商场规律，价格和等级一般是共同的。可是从内部质量操控的视点来看，色泽最好个头最大者五味子酯甲含量并不必定最高，二等品的质量最好，其原因或许与五味子酯甲存在于药材不同部位的多少有关。崔九成等[11-13]的研讨定论也支撑了本揣度：南五味子药材中，种子和果肉中化学成分存在必定差异，且种子特别是种仁中木脂素含量较高。一等品中果肉占比较大，五味子酯甲含量全体上低于二等品。endprint
南五味子和五味子产品购买时可依据药材木脂素成分的含量凹凸挑选种类。南五味子和五味子在药店都有出售，而制药厂多用的是五味子，监督管理部门和购买者应避免零售店以南五味子充五味子的行为发作。购买许多南五味子产品以二等品最为经济实惠。
依照药典办法点评药材质量能够快速、便利、有用的确保药材质量。但仅仅用单一成分来点评药材质量仍显得不太合理，要以多种有用成分为目标，而且结合外观性状和生物效价检测来归纳点评药材质量的好坏才会显得愈加科学合理。
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[责任编辑 吕冬梅]endprint