高危型HPVE6E7 高危型HPV E6/E7 mRNA检测对ASC—US患者的分流价值
郑智 曹晓恩 陈海迎 张红萍
[摘要] 意图 剖析高危型人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）E6/E7 mRNA检测对宫颈细胞学成果为未清晰含义的非典型鳞状上皮细胞（atypical squamous cells of undertermined significance，ASC-US）的患者的分流价值。办法 选取311例疑似宫颈病变患者一起行高危型HPV E6/E7 mRNA检测、HPV-DNA分型检测和宫颈掉落细胞的薄层液基细胞学查看（thinprep cytologic test，TCT）和细胞学成果为ASC-US患者均行阴道镜查看和宫颈活检。以病理陈述为金规范，比较两种检测办法对细胞学查看成果为ASC-US的患者的检测功率。 成果 共85例ASC-US患者，其间缓慢宫颈炎患者42例，宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ级患者23例，CIN Ⅱ级患者7例，CIN Ⅲ 级患者13例。确诊TCT成果为ASC-US患者高等级宫颈病变的特异度比较，高危型HPV E6/E7 mRNA检测（80.0%）显着高于HPV-DNA分型检测（58.2%），差异有统计学含义（χ2=13.458，P<0.001）；两组敏感度、阳性猜测值、阴性猜测值比较，均无统计学差异（P>0.05）。 定论 与HPV-DNA分型检测比较，高危HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈细胞学检测成果为ASC-US患者具有更清晰的分流含义，在TCT成果为ASC-US患者的分流办理等方面均有重要的临床使用价值。
[关键词] 人乳头瘤病毒；E6/E7 mRNA；未清晰含义的非典型鳞状上皮细胞；宫颈上皮内瘤样病变
[中图分类号] R711 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）26-0027-04
The bypass value of high-risk HPV E6/E7 mRNA detection in the patients with ASC-US
ZHENG Zhi1 CAO Xiao'en2 CHEN Haiying1 ZHANG Hongping1
1.Department of Gynecology and Obstetrics，Wenzhou People's Hospital of Zhejiang Province，Wenzhou 325000，China；2.Department of General Surgery，Ouhai District Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine of Zhejiang Province，Wenzhou 325000，China
[Abstract] Objective To investigate the bypass value of high-risk human papillomavirus（HPV） E6/E7 mRNA detection in the patients whose cervical cytology results are atypical squamous cells of undertermined significance（ASC-US）. Methods A total of 311 patients with suspected cervical lesions were given high-risk HPV E6/E7 mRNA detection， HPV-DNA typing and thinprep cytologic test（TCT） of cervical exfoliative cells. The patients with cytology results of ASC-US were all given colposcopy and cervical biopsy. The pathological report was taken as the gold standard. The efficacy of the two detection methods for the patients with cytology results of ASC-US was compared. Results There were a total of 85 ASC-US patients. There were 42 patients with chronic cervicitis， 23 patients with cervical intraepithelial neoplasia（CIN） grade Ⅰ， 7 patients with CIN grade Ⅱ and 13 patients with CIN grade Ⅲ. Diagnostic TCT results were the comparison of specificity of ASC-US patients with high-grade cervical lesions. The high-risk HPV E6/E7 mRNA detection（80.0%）was significantly higher than the typing test of HPV-DNA（58.2%）， and the difference was statistically significant（χ2=13.458， P<0.001）； there was no statistically significant difference between the two groups in sensitivity， positive predictive value and negative predictive value（P>0.05）. Conclusion Compared with HPV-DNA typing test， the result of high-risk HPV E6/E7 mRNA detection for cervical cytology is a clearer bypass significance for ASC-US patients. In the bypass management for the patients with the TCT results of ASC-US， there is an important clinical application value.endprint
[Key words] Human papillomavirus（HPV）；E6/E7 mRNA；Atypical squamous cells of undertermined significance（ASC-US）；Cervical intraepithelial neoplasia
宮颈癌是困扰全国际女人的第二大恶性肿瘤，我国是宫颈癌的高发国家，患病率和死亡率均居国际首位，大约占全国际的1/3[1]。高危型人乳头瘤病毒（HPV）的继续感染已被认定是导致宫颈癌的必要要素[2]。宫颈液基细胞学陈述中，ASC-US为含义不清晰的非典型鳞状上皮细胞，其细胞反常程度较反响性改动细胞显着，但在数量和质量上尚不能确诊为鳞状上皮内病变，是最为常见的细胞学反常，一起存在宫颈癌前病变，乃至宫颈癌的或许[3]。怎么对ASC-US进行分流一向存在争议。近年来，临床常用HPV-DNA检测成果做为是否需求阴道镜查看的重要分流依据。可是有研讨显现HPV-DNA检测尽管具有较高的敏感性，但其特异性并不抱负[4]。为评论高危型HPV E6/E7 mRNA检测对细胞学检测成果为ASC-US患者分流的确诊价值，本研讨挑选85例TCT为ASC-US患者行阴道镜宫颈活检病理查看成果为金规范进行剖析比较，现报导如下。
1 目标与办法
1.1 研讨目标
选取2014年8月～2015年3月在我院妇科门诊及住院的可疑宫颈病变患者共311例做为研讨目标，患者年纪19～77岁，中位年纪39.6岁。归入规范：临床表现为白带增多，性生活后出血，白带搀杂血丝，体检发现宫颈肥壮、宫颈溃烂、宫颈赘生物等。311例患者均知情并自愿行高危型HPV E6/E7 mRNA检测、HPV-DNA分型检测和宫颈掉落细胞的薄层液基细胞学查看（TCT）。其间依据宫颈细胞学Bethesda分类体系（the Behtesda system）确诊为ASC-US患者共85例，均行阴道镜查看及宫颈活安排查看，并获得安排病理学查看成果。扫除规范：宫颈癌史、宫颈上皮内瘤变（CIN）史、宫颈锥切术史及盆腔放射医治史、急性生殖道炎症者、妊娠者，选材 3 d 内有阴道冲刷及用药史及查看前 24 h 内有性生活史。本研讨经过本院道德委员会审阅经过。
1.2 办法
1.2.1 TCT检测 由专业妇科医生选材。患者取膀胱截石位，选用专业取样刷刺进宫颈口，沿着颈管朝同一时钟方向旋转3～5周搜集宫颈口及宫颈管细胞，并将细胞涮洗入盛有PreservCyt保存液的小瓶内。标本用Thinprep 2000体系程序化处理并主动制成薄层涂片，经巴氏染色后由固定病理科医生阅片。细胞学检测成果依照2001年TBS分类体系进行分级，≥ASC-US为阳性。
1.2.2 HPV-DNA分型检测 试剂盒购自潮州凯普生物化学有限公司，选用DNA导流杂交基因芯片技能一次性检测21种HPV亚型，13种高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型）检测出一种或多种为阳性成果。
1.2.3 高危型HPV E6/E7 mRNA检测 试剂盒购自河南中美合资科蒂亚生物技能有限公司。选用TCT检测的剩下标本，选用bDNA检测技能，扩大、杂交捕获mRNA，一起对14种高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68型）E6/E7 mRNA水平进行定量检测。拷贝数>0 copy/mL为成果阳性。
1.2.4 阴道镜查看及宫颈安排病理学查看 选用德国莱卡公司出产的阴道镜，由宫颈疾病医治中心的专业妇科医生进行操作和查看。患者于月经洁净3～7 d 进行阴道镜查看。标本用10%甲醛固定，制片后由专业病理科医生阅片。病理确诊分为正常/炎症、CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级或宫颈原位癌、宫颈滋润癌。
1.3 统计学办法
选用SPSS 17.0软件进行统计剖析。两者计数材料比较选用χ2查验，两种检测办法确诊ASC-US患者高档宫颈病变的敏感度、特异度、阳性猜测值、阴性猜测值选用传统列联表核算。P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 病理查看成果
本研讨成果中细胞学查看成果为ASC-US的患者合计85例，包含缓慢宫颈炎患者42例（49.4%），CIN Ⅰ级患者23例（27.1%），CIN Ⅱ级患者7例（8.2%），CIN Ⅲ级患者13例（15.3%）。依据安排病理学成果不同分为两组：缓慢宫颈炎、CIN I组65例，高等级宫颈病变组20例。见表1。
2.2 高危型HPV E6/E7 mRNA检测与HPV-DNA分型检测对ASC-US患者的分流比较
高危型HPV E6/E7 mRNA检测确诊ASC-US患者高等级宫颈病变的特异度显着高于HPV-DNA分型检测，差异有统计学含义（χ2=13.458，P<0.001）；两者敏感度、阳性猜测值、阴性猜测值比较，均无统计学差异（P>0.05）。见表2。
3 评论
液基细胞学中，ASC-US是一个不定等级，其确诊的灵活性大，确诊规范不确定，部分炎症、老年性退行性变、CIN及宫颈滋润癌等宫颈细胞学查看成果均可呈ASC-US，因而常被作为细胞学确诊的“垃圾桶”[5]。在临床工作中，TCT成果为ASC-US的患者很常见，比较正常细胞的妇女，这些患者向高等级宫颈病变开展的几率更大。现在怎么分流ASC-US患者，国际上定见仍不一致，能够重复细胞学查看、HPV检测或直接进行阴道镜查看[6-7]，合理有用地别离对待TCT成果为ASC-US的患者是一个十分扎手的问题。
在临床工作中，HPV-DNA检测成果常做为宫颈细胞学为ASC-US的患者是否需求进一步阴道镜查看的重要分流目标。HPV-DNA检测已在全国际临床上广泛使用，现在检测技能已较为老练，具有灵敏度高、检测便利、费用较低一级优势。可是HPV感染比较遍及且大都患者能自行衰退，一切的HPV-DNA检测均是病因学检测，只能提示有无感染HPV，却无法区别是时间短的无含义感染仍是继续感染，也无法证明病毒有无整合到宿主细胞中，更无法判读出病毒癌基因是否有活性的表达及表达量多少。美国国立肿瘤研讨院进行多中心研讨发现，在细胞学为ASC-US的患者中，HPV-DNA检测CIN及以上的敏感度为96.3%，其间真实需求阴道镜查看和宫颈活检的患者仅有56.1%[8]。因而，使用特异度不高HPV-DNA分型检测对细胞学成果为ASC-US的患者进行分流或许导致一部分患者进行不必要的阴道镜查看及宫颈活安排查看，不只构成过度确诊、过度医治，并且导致医疗本钱过高并添加了这部分人群的心理压力。近年来，国内有多项研讨标明与HPV-DNA检测比较，高危型HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查、反常细胞学标本中的特异度较高，而灵敏度类似[9-11]。endprint
HPV感染宫颈细胞后病毒DNA有两种存在状况：整合状况及游离状况。宫颈病变的程度取决于病毒存在的状况，在宫颈良性病变中HPV DNA一般多以游离状况存在于细胞染色体外；在恶性肿瘤中，高危型HPV-DNA多与宿主细胞内的染色体整合[12]。HPV感染的宫颈癌发展与病毒的整合严密相关，有研讨报导100%的HPV 18阳性、80%的HPV 16阳性和81%的HPV 31阳性的宫颈癌中显现有病毒DNA整合[13]。高危型HPV病毒感染宿主细胞后，病毒核酸游离到细胞核内并整合到宿主细胞的基因组中[14]，HPV E6、E7癌基因转录构成E6/E7 mRNA，进一步翻译构成E6、E7蛋白可别离结合宫颈上皮细胞内的抑癌蛋白p53和pRb并使之失活，导致细胞恶性轉化[15]。因而经过检测高危型HPV E6/E7 mRNA水平能够推断出高危型HPV对宿主细胞的感染水平以及致癌才能[16-17]。Molden T等[18]经过对细胞学成果为ASC-US及LSIL的宫颈病变患者进行2年的随访研讨，发现与HPV-DNA检测比较，高危型HPV E6/E7 mRNA检测猜测高等级宫颈病变的敏感性适当，但其特异性更高，能对该部分患者进行更好的分流[18]。本研讨对85例宫颈液基细胞学为AS-CUS患者进行统计剖析，成果标明检测ASC-US患者高等级宫颈病变效能比较，高危型HPV E6/E7 mRNA的特异度为80.0%，显着高于HPV-DNA分型检测的58.2%，差异有统计学含义（χ2=13.458，P<0.001）。高危型HPV E6/E7 mRNA检测具有更高的特异度，阐明其能够更好地辨认并除掉正常或低度病变人群，能够削减过度确诊和阴道镜转诊率，防止不必要的有创查看，削减患者经济担负，更重要的是能够减缓患者身心担负。另一方面，本研讨成果显现高危型HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏度与HPV-DNA分型检测比较无差异，也使其漏诊的危险并不比HPV-DNA分型检测添加，对ASC-US患者的高等级病变相同具有较高的区分才能。一起，与HPV-DNA检测类似的阳性猜测值和阴性猜测值也确保高危型HPV mRNA检测相同具有精确断定ASC-US患者有无病变发展高危危险的才能，其确诊可信度较高。
尽管高危型HPV E6/E7 mRNA检测具有与HPV-DNA检测适当的灵敏度，该检测在临床实践工作中尚存在必定的漏诊率，导致部分患者不能如实地被确诊，然后延误病况，所以为了削减患者的漏诊率，在实践工作中能够考虑选用联合的检测的办法进行筛查，如能够用高危型HPV E6/E7 mRNA检测联合细胞学检测来确诊疾病，不只提高了宫颈疾病的确诊水平，并且还能够下降漏诊率[19-20]。
本研讨成果标明，与HPV-DNA分型检测比较，高危型HPV E6/E7 mRNA检测ASC-US患者高等级宫颈病变更具特异性，能够防止过多的阴道镜查看，有望成为ASC-US患者是否需求阴道镜查看的一个有用分流目标。
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（收稿日期：2017-07-01）endprint