乙状结肠癌前期症状 Livin基因在结肠癌安排芯片中的表达及其与Bcl—2相关性研讨

点击：0时间：2023-07-18 03:23:04

李海波+池圣亮

[摘要] 意图评论Livin基因在结肠癌安排芯片中的表达及其与Bcl-2相关性。办法选取结肠癌外科手术患者60例，选用免疫组化MaxVisionTM二步法检测结肠癌安排芯片中Livin、Bcl-2基因的表达。另取切缘正常结肠安排芯片25例作对照。成果结肠癌安排芯片中Livin基因阳性表达率（63.33%）显着高于切缘正常的结肠安排芯片（24.00%）（χ2=10.93，P<0.01）。结肠癌安排芯片中Livin基因表达与性别、年纪、肿瘤巨细、安排分解程度和淋巴结搬运等病理特征无相关性（P>0.05），与滋润深度、Dukes分期和远处搬运等亲近相关（P<0.05或P<0.01）。结肠癌安排芯片中Bcl-2基因阳性表达率（68.33%）显着高于切缘正常结肠安排（4.00%）（χ2=29.22，P<0.01）。结肠癌安排芯片中Livin基因表达与Bcl-2基因存在显着的正相关（P<0.01）。多要素Logistic回归剖析提示，滋润深度、Dukes分期和远处搬运进入模型（P<0.05）。定论 Livin基因在结肠癌安排芯片的发病中扮演重要人物，与其恶性侵袭、搬运病理进程亲近相关。Livin基因与Bcl-2基因的反常表达可能在结肠癌癌变中起和谐效果。

[关键词] 结肠癌；免疫组化；Livin基因；病理特征

[中图分类号] R735.3+5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）35-0021-04

结肠癌是临床较常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来其发病率有逐年上升的趋势。肿瘤的发作与肿瘤细胞的增生及凋亡受按捺亲近相关，尤其是细胞凋亡的调理妨碍或表达反常在肿瘤的发作和开展起及其重要的效果。Livin基因是凋亡按捺蛋白（IAPs）宗族的新成员，在正常成人安排中无显着的表达或表达较低，近年来研讨发现其在大部分肿瘤安排中表达反常[1，2]。Bcl-2是临床较常用的一种凋亡相关基因，与肿瘤的发作和开展联系亲近[3]。Livin基因在结肠癌安排中的表达及其与Bcl-2的相关性研讨现在国内外报导较少[3，4]。本研讨旨在调查Livin基因在结肠癌安排芯片中的表达及其与Bcl-2的相关性，现报导如下。

1 材料与办法

1.1 一般材料

选取2010年1月～2014年7月我院普外科就诊结肠癌外科手术患者60例。归入患者：术前具有完好临床材料，且均未进行任何辅佐化放疗和免疫医治。患者中男39例，女21例；年纪38 ～89岁，均匀（63.1±7.1）岁。另取切缘正常结肠安排25例作对照研讨，其间男16例，女9例；年纪39～86岁，均匀（62.9±6.4）岁。结肠癌组与正常结肠安排在性别构成和年纪散布方面比较差异无统计学含义（P>0.05），具有可比性。

1.2 安排芯片的制备

用安排陈设仪在模板蜡块上打出直径为2 mm的小孔，选取HE染色下所见典型癌安排区域2 mm柱状安排，按次序填在模板蜡块中，将蜡块外表压平坦，二次包埋后制成安排芯片，4～6 μm接连切片，进行免疫组化染色。

1.3 免疫组化染色

选用免疫组化MaxVisionTM二步法进行检测，具体进程参照文献[5]。选用已知阳性片和磷酸盐缓冲液（PBS）别离行阳性对照或阴性对照，其间鼠抗人Livin单克隆抗体及免疫组化MaxVisionTM二步法试剂盒均购买自北京中杉金桥公司，鼠抗人Bcl-2单克隆抗体购自福州迈新生物有限公司。

1.4 免疫组化成果断定[6]

Livin阳性细胞定坐落胞浆，Bcl-2阳性细胞定坐落胞膜或细胞浆，以呈现棕黄色颗粒为阳性。依照染色百分比和强度判别其成果。其间染色百分比<5%为0分、6%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～75%为3分；76%～100%为4分；染色强度得分无上色为0分；浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。如染色细胞百分比和染色强度得分乘积>1判别为阳性（+），≤1判别为阴性（-）。

1.5 统计学处理

使用SPSS16.0软件，计数材料选用χ2查验，相关性剖析选用Speaman剖析，Livin基因与各要素间的联系选用多要素Logistic回归剖析。P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 安排芯片免疫组化染色

制造安排芯片各位点摆放规整，厚薄一起，位点结构坚持杰出，无位点掉落。Livin免疫组化阳性产品呈胞浆棕黄色细颗粒状，Bcl-2免疫组化阳性产品呈胞浆或胞膜棕黄色细颗粒状。

2.2 结肠癌及切缘正常结肠安排芯片中Livin基因表达

60例结肠癌安排芯片中Livin基因阳性表达38例（63.33%）；而25例切缘癌旁正常结肠中Livin基因阳性表达仅6例（24.00%）。结肠癌安排中Livin基因阳性表达率显着高于切缘正常结肠安排（χ2=10.93，P<0.01）。

2.3 结肠癌安排芯片中Livin基因表达与病理特征的相关性

结肠癌安排芯片中Livin基因表达与性别、年纪、肿瘤巨细、安排分解程度和淋巴结搬运等无显着相关性（P>0.05），与滋润深度、Dukes分期和远处搬运等亲近相关（P<0.05或P<0.01）。见表1。

2.4 结肠癌及切缘正常结肠安排芯片中的Bcl-2基因表达

60例结肠癌安排芯片中Bcl-2基因阳性表达41例（68.33%）；而25例切缘癌旁正常结肠安排芯片中Bcl-2基因阳性表达仅1例（4.00%）。结肠癌安排芯片中Bcl-2基因阳性表达率显着高于切缘正常结肠安排（χ2=29.22，P<0.01）。

2.5 结肠癌安排芯片中Livin基因表达与Bcl-2基因的相关性剖析endprint

38例结肠癌安排芯片中Livin基因阳性表达有 37例Bcl-2基因阳性表达；22例结肠癌安排芯片中Livin基因阴性表达有4例Bcl-2基因阳性表达，统计学剖析示结肠癌安排芯片中Livin基因表达与Bcl-2基因存在显着正相关（r=0.74，P<0.01）。

2.6 Logistic回归剖析Livin基因与各要素间的联系

以Livin基因免疫组化成果为应变量，以患者的性别、年纪、肿瘤巨细、安排分解程度、滋润深度、Dukes分期、淋巴结搬运和远处搬运规范为自变量进行Logistic回归剖析。成果发现滋润深度、Dukes分期和远处搬运进入模型（P<0.05）。见表2、3。

3 评论

Livin基因是IAPs宗族中新的凋亡按捺基因，定坐落20号染色体q13.3，别离编码298个和280个氨基酸的Livin-α及Livin-β[7，8]。Livin基因的抗细胞凋亡机制首要经过按捺Caspase-3、7和9途径和阻断以线粒体为根底的外源性及内源性凋亡途径来起到抗细胞凋亡的效应，与肿瘤的发作、开展、搬运及预后的联系较亲近[2，9]。近年来Livin基因在胃肠道肿瘤中的表达，尤其是结肠癌安排中的表达已逐步遭到临床的注重[10，11]。郑国文[12]研讨发现凋亡按捺因子Livin基因在大肠癌中起极其重要的效果，参加大肠癌的发作、开展及搬运进程。东星等[13]研讨也发现Livin基因在大肠癌的发作、开展中起重要效果，可望成为大肠癌生物及免疫干涉的标志。本研讨成果发现，结肠癌安排芯片中Livin基因阳性表达率显着高于切缘正常的结肠安排，可见Livin基因在结肠癌安排芯片中反常高表达，在结肠癌的发病进程中扮演重要人物。

但有关结肠癌安排Livin基因的表达与肿瘤直径、安排分解程度、滋润深度、Dukes分期、淋巴结搬运和远处搬运等病理特征的联系国内外报导不一起，没有构成一致的定论[14，15]。何剪太等[16]研讨发现，大肠癌安排中Livin基因的表达与患者的年纪、性别、肿瘤直径、肿瘤部位、安排学类型、淋巴搬运和Dukes等生物学行为均无显着联系，而与患者远处搬运及放化疗存在显着相关性，提示Livin基因可影响大肠癌的生物行为，使其更易发作远处搬运。菅金波等[5]研讨发现，凋亡按捺因子Livin与结肠癌患者的肿瘤滋润深度、Dukes分期、临床分期以及远处搬运存在显着相关性，提示其与肿瘤的恶性侵袭、搬运和预后进程显着相关。本研讨成果发现，结肠癌安排芯片中Livin基因表达与性别、年纪、肿瘤巨细、安排分解程度和淋巴结搬运等病理特征无显着相关性，与肿瘤的滋润深度、Dukes分期和远处搬运等病理特征亲近相关，一起Logistic回归剖析发现，滋润深度、Dukes分期和远处搬运进入模型。提示Livin基因在结肠癌安排中的表达与其病况的发展联系亲近，是Livin基因表达的风险要素，尤其是与肿瘤的恶性侵袭、搬运的病理进程亲近相关。可见Livin基因在结肠癌的发病进程中扮演重要人物，参加病况的发作、开展进程。

肿瘤的发作是一个多要素、多进程、多基因一起效果的成果。Bcl-2是一个原癌基因，其功用是阻挡细胞凋亡，其过度表达已被证明存在于多种肿瘤安排中[4]。本研讨成果发现，结肠癌安排芯片中Bcl-2基因阳性表达率显着高于切缘正常结肠安排，可见Bcl-2基因在结肠癌安排中反常高表达，在结肠癌的发病进程中扮演重要人物；一起研讨还发现结肠癌中Livin基因表达与Bcl-2的表达呈正相关，Livin基因与Bcl-2基因经过效果于细胞凋亡的不同阶段而协同发挥抗凋亡效应，然后在促进结肠癌发作、开展中起协同效果[17，18]。Livin基因有望作为大肠癌的基因确诊及医治的新效果靶点，然后拓荒生物医治结肠癌的新途径。但Livin基因能否作为结肠癌新的肿瘤标志物并使用于临床、Livin与放化疗耐药性的联系有待进一步的深入研讨。

总归，Livin基因在结肠癌安排芯片中反常高表达，并与肿瘤的滋润深度、Dukes分期和远处搬运等亲近相关，阐明Livin基因在结肠癌的发病进程中扮演重要人物，与肿瘤的恶性侵袭、搬运的病理进程亲近相关。Livin基因与Bcl-2基因的反常表达可能在结肠癌癌变中起和谐效果。

[参考文献]

[1] 黄方名，王文忠. 新凋亡按捺因子 Livin 与肿瘤的研讨发展[J]. 中华全科医学，2011，9（12）：1934-1936.

[2] Maas C，Verbrugge I，de Vries E，et al. Smac/DIABLO release from mitochondria and XIAP inhibition are essential to limit clonogenicity of type I tumor cells after TRAIL receptor stimulation[J]. Cell Death Differ，2010，17（10）：1613-1623.

[3] Nedelcu T，Kubista B，Koller A，et al. Livin and Bcl-2 expression in high-grade osteosarcoma[J]. Cancer Res Clin Oncol，2008，134（2）： 237-244.

[4] Wang X，Xu J，Ju S，et al. Livin gene plays a role in drug resistance of colon cancer cells[J]. Clin Biochem，2010，43（7-8）：655-666.

[5] 菅金波，葛莲英，罗小玲，等. Livin蛋白在人大肠癌安排中的表达及临床含义[J]. 我国癌症防治杂志，2011，3（1）：43-46.endprint

[6] 熊雅波，韩子华. 结肠癌安排中Livin的表达及其与患者生物学行为与预后的联系[J]. 我国药物与临床，2012， 12（8）：1017-1018.

[7] Wang TS，Ding QQ，Guo RH，et al. Expression of livin in gastric cancer and induction of apoptosis in SGC-7901 cells by shRNA-mediated silencing of livin gene[J]. Biomed Pharmacother，2010，64（5）：333-338.

[8] 陆娜娜，尹玉，曹立宇，等. 大肠癌中Livin和Survivin的表达及相关性研讨[J]. 我国安排化学与细胞化学杂志，2012，21（3）：250-251.

[9] 姚文娟，陈素萍，宋会双，等. Livin基因在结直肠癌中的表达及其与 PTEN 和Caspase-3的相关性研讨[J]. 大连医科大学学报，2014，36（3）：221-224.

[10] Xi RC，Biao WS，Gang ZZ. Significant elevation of survivin and livin expression in human colorectal cancer： inverse correlation between expression and overall survival[J]. Onkologie，2011，34（5）：428-432.

[11] Yang D，Song X，Zhang J，et al. Suppression of livin gene expression by siRNA leads to growth inhibition and apoptosis induction in human bladder cancer T24 cells[J].Biosci Biotechnol Biochem，2010，74（5）：1039-1044.

[12] 郑国文. 大肠癌中 Livin 和 Survivin 的表达及相关性研讨[J]. 有用医院临床杂志，2014，11（2）：86-87.

[13] 东星，于波，周卫东. Livin与Caspase-9在大肠癌安排中的表达及临床含义[J]. 我国现代普通外科发展，2010， 13（12）： 933-936.

[14] 严红，彭淑梅，邱春雷. 大肠癌安排中Livin表达的临床含义[J]. 江西医药，2010，46（2）： 109-111.

[15] 陈鹏，王春松，孔令斌. 凋亡按捺蛋白Livin 与胃癌的研讨发展[J]. 有用医学杂志，2008，24（23）：3991-3992.

[16] 何剪太，李珍发，张阳德，等. 凋亡按捺因子Livin在大肠癌中的表达含义[J]. 我国现代医学杂志，2007，17（6）：654-657.

[17] 黄青远，赵志龙，崔肃，等. Livin在食管癌中的表达及与Bcl-2相关性研讨[J]. 现代肿瘤医学，2007，15（3）：326-328.

[18] 洪思蔚，赵亚刚. 凋亡按捺蛋白Livin与消化系统肿瘤的相关研讨发展[J]. 医学总述，2013，19（4）：59-61.

（收稿日期：2014-09-11）endprint