小鼠急性毒性实验 六味葛蓝降脂片对小鼠急性经口毒性及遗传毒性的实验研讨

朱智德++蒋林++罗宇东++陈洪涛

[摘要] 意图 展开六味葛蓝降脂片的遗传毒性和急性毒性实验，以点评其作为保健食物的毒理学安全性。 办法 依据《保健食物查验与点评技术规范》（原卫生部2003年版）食物安全性毒理学点评程序和查验办法的要求，进行急性经口LD50测定，经过小鼠精子变形实验、小鼠骨髓微核实验及Ames实验点评其遗传毒性。 成果 六味葛蓝降脂片的急性经口LD50>30 g/kg；3项遗传毒性实验成果均为阴性。 定论 在本实验条件下，六味葛蓝降脂片急性经口毒性属无毒级，未见遗传毒性效果。

[关键词] 六味葛蓝降脂片；急性毒性；遗传毒性

[中图分类号] R965.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）04（c）-0004-04

Study on the acute and genetic toxicities of Liuwei Gelan lipid-lowering tablets in mice

ZHU Zhi-de1 JIANG Lin2 LUO Yu-dong1，3 CHEN Hong-tao1，3

1.Pharmaceutical Factory，Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530023，China；2.Adult Education College，Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001，China；3.Key Laboratory，Generic Technology Development of Chinese Medicine Preparation in Guangxi Universities，Nanning 530001，China

[Abstract] Objective To determine the acute oral toxicity and genetic toxicity of Liuwei Gelan lipid-lowering tablets. Methods The acute oral LD50 test was performed，and the genetic toxicity was evaluated by mouse sperm abnormality test，bone marrow micronucleus test and Ames test according to the requirements of the《health food inspection and evaluation of technical specifications》（formerly the Ministry of health in 2003 Edition） food safety toxicology evaluation procedures and test methods. Results The acute oral LD50 of Liuwei Gelan lipid-lowering tablets was greater than 30 g/kg.The genetic toxicity indicated by Ames test，micronucleus test of polychromatic erythrocytes in bone marrow and sperm shape abnormality test in mice was negative. Conclusion In our experimental condition，the acute toxicity of Liuwei Gelan lipid-lowering tablet is classified as non_toxic.Genetic toxicity is not found.

[Key words] Liuwei Gelan lipid-lowering tablets；Acute toxicity；Genetic toxicity

高脂血症为临床上的多发病及常见病，是引发脂肪肝、心脑血管疾病的重要病因之一。西药降脂效果切当，但对人体的肝、肾等器官损害较大，因而临床运用规模遭到必定约束。祖国传统中医药在防治高脂血症及心脑血管疾病等方面有着共同的优势[1-11]，中药医治高脂血症副效果小，复发率低，具有广谱且多层次、多靶点、多途径降脂的优势，研讨并开发降脂中药及保健食物具有宽广的商场空间。六味葛蓝降脂片为广西中医药大学制药厂拟开发的具有辅佐降血脂成效的保健食物。前期成效学实验研讨[12-13]标明，六味葛蓝降脂片具有调理血脂、防备动脉硬化、维护肝脏、缓解体重添加的成效。为点评产品的安全性，依据《保健食物查验与点评技术规范》（原卫生部2003年版）的要求，现进行六味葛蓝降脂片的急性经口毒性及遗传毒性效果实验。

1 资料与办法

1.1 样品和受试菌株

六味葛蓝降脂片由广西中医药大学制药厂出产，为棕褐色的片剂，产品批号：20130301，每片含生药量7 g，按成人口服引荐用量（2片/次，2次/d）核算，折合剂量为100.0 mg/kg体质量，实验前加无菌蒸馏水配制成相应的剂量；实验菌株和肝微粒体酶（S9）由广西壮族自治区中医药研讨院供给，实验前经判定合格后运用。

1.2 首要仪器

SW-CJ-2D超净工作台（上海新苗医疗器械制作有限公司）、RE501旋转蒸腾仪（巩义市予华仪器有限公司）、JY501电子天平（上海浦春计量仪器有限公司）、XFS-280压力蒸汽灭菌器（浙江新丰医疗器械有限公司）、HH-6数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）、LRH-250生化培育箱（上海一恒科学仪器有限公司）、101-1恒温电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.3 动物来历

昆明种小鼠，清洁级，由广西医科大学实验动物中心供给，合格证号：SCXK桂2014-0002。

1.4 实验办法

参照《保健食物查验与点评技术规范》（原卫生部2003年版）食物安全性毒理学点评程序和查验办法以及相关文献的办法进行实验[14-21]。

1.4.1 小鼠急性经口毒性实验 选用一次最大耐受量给予的办法，挑选昆明种清洁小鼠20只（体质量18～22 g），男女参半，取受试样品配制成500 mg/ml浓度溶液给小鼠灌胃（0.40 ml/20 g体质量），每距离4 h灌胃1次，灌胃3次，累积剂量达30 000 mg/kg体质量。实验前小鼠禁食（16 h）不由水，灌胃后每周称量小鼠体重1次，接连调查14 d，记载动物的中毒症状及逝世状况，实验完毕后处死动物并进行大体解剖调查，点评被检物的急性毒性强弱。

1.4.2 Ames实验 选用平板掺入法，分参加多氯联苯诱导的大鼠S9及不参加S9两种状况。受试品用蒸馏水配制成浓度为0.08、0.40、2.00、10.00、50.00 mg/ml的溶液，选用四株鼠伤寒沙门氏菌骤变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102进行实验。将0.10 ml受试物溶液、0.10 ml实验菌株和0.50 ml S9混合液（当需求代谢活化时）混合均匀后倒入培育皿中，37℃下培育48 h调查成果，一起设溶剂对照（用蒸馏水代替样品）、自发回变对照（不加样品，空白对照）和阳性骤变剂对照，以直接计数培育基上长出回变菌落数的多少而进行成果鉴定。实验设8、40、200、1000、5000 μg/皿5个实验剂量，每个剂量做3个平行皿。实验在相同条件下重复做2次。如在布景成长杰出条件下，受试回变菌落数添加1倍以上，即回变菌落数≥2×空白对照数，并有剂量反响联系即可以为该受试物为诱变阳性。

1.4.3 小鼠骨髓细胞微核实验 选用30 h给受试物法，即2次给受试物距离24 h，第2次给受试物后6 h，颈椎脱臼处死动物。取昆明种小鼠50只（体质量25～30 g），男女参半，将其随机分红阴性对照（蒸馏水）、阳性对照（40 mg/kg体质量）剂量的环磷酰胺]和3个受试物剂量组（2500、5000、10 000 mg/kg体质量），每组10只小鼠。各组小鼠按相应剂量（0.40 ml/20 g体质量）灌胃，两次给药距离24 h，第2次给药后6 h颈椎脱臼处死动物，取胸骨用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀，惯例涂片，放入甲醇中固定，Giemsa运用液中染色，用光学显微镜调查并对微核进行计数，每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞（PCE），并以含微核的PCE千分率核算微核率，一起核算PCE（每只小鼠计数200个）与老练红细胞的比值（PCE/NCE）。选用泊松散布进行数据处理，实验组与对照组比较，实验成果微核率有显着的剂量反响联系并有计算学含义时，即可确以为阳性成果。

1.4.4 小鼠精子变形实验 挑选50只6～8周龄的昆明种雄性小鼠（体质量25～35 g），将其随机分红阳性对照（40 mg/kg体质量）剂量的环磷酰胺]、阴性对照（蒸馏水）和3个受试物剂量组（2500、5000、10 000 mg/kg体质量），每组10只小鼠。各组小鼠按相应剂量（0.40 ml/20 g体质量）灌胃，每天灌胃1次，接连5 d，最终1次灌胃后第30天处死小鼠，取出两边附睾的精子，用甲醇固定5 min，1%伊红染色1 h，在光学显微镜下核算精子变形率（每只小鼠查看1000个完好的精子），用χ2查验对数据进行计算剖析，点评精子变形阳性的规范是变形率至少为阴性对照组的倍量或差异有计算学含义，并有剂量反响联系。

1.5 计算学办法

选用SPSS 18.0计算软件对数据进行剖析，小鼠骨髓微核实验数据选用泊松散布均数比较法，精子变形实验数据选用χ2查验，以P<0.05为差异有计算学含义。

2 成果

2.1 六味葛蓝降脂片对小鼠的急性毒性实验成果

以30 000 mg/kg体质量的样品剂量（最大给药量）灌胃小鼠后，小鼠成长状况杰出，未见有中毒症状，体重也未见反常，14 d调查期动物无逝世。实验完毕动物解剖的大体调查，首要脏器如心、肝、脾、胃、肾、肺、肠等未见显着反常（表1）。样品急性经口毒性依据我国《保健食物查验与点评技术规范》（2003年版）的点评规范，属无毒级。

2.2 六味葛蓝降脂片Ames实验成果

不管参加S9与不参加S9，关于四种实验菌株TA97、TA98、TA100、TA102，受试物的各剂量组回变菌落数与自发回变菌落数比较，均没有添加1倍以上，也无剂量反响联系（表2、表3），标明该受试物为诱变阴性。

阳性对照：TA97a+S9、TA98+S9、TA100+S9选用2-氨基芴（剂量为10 μg/皿）；TA97-S9、TA102-S9选用敌克松（剂量为50 μg/皿）；TA100-S9选用叠氮钠（剂量为1.5 μg/皿）；TA102+S9选用1，8-二羟基蒽醌（剂量为50 μg/皿）；TA98-S9选用柔毛霉素（剂量为6 μg/皿）。

2.3 小鼠骨髓细胞微核实验

受试物各剂量组骨髓细胞微核率与阴性对照组比较差异均无计算学含义（P>0.05），阴性对照组的骨髓细胞微核率明显低于环磷酰胺阳性对照组（P<0.01）。各组的PCE/NCE比值也处于正常的规模内，小鼠骨髓细胞微核实验成果为阴性（表4）。

2.4 小鼠精子变形实验

受试样品的阳性对照组与阴性对照组比较，小鼠的精子变形率明显升高，差异有计算学含义（P<0.01）；样品各剂量组精子变形率与阴性对照组比较，差异无计算学含义（P>0.05）（表5），标明该样品对小鼠精子变形实验的成果为阴性。

3 评论

六味葛蓝降脂片的首要成分为绞股蓝、火麻仁、决明子、葛根、沙棘等药食同源药材，依据中医药君、臣、佐、使理论，方中的绞股蓝、火麻仁为君药，绞股蓝益气养阴，益脾补虚，而火麻仁润肠通便，用于血虚津亏，肠燥便秘；决明子为臣药，能平肝、清热明目，润肠通便；佐以葛根解肌退热，升阳透疹，生津止渴，沙棘消食化滞，活血散瘀；荷叶升发清阳，化除湿浊；诸品合作，诸症统筹，相辅相成，共奏益气健脾，升发清阳，除湿化痰，降浊消脂之功。本品经过调理机体的代谢功用，然后到达多靶点、多环节全体和谐降血脂的功用。本实验调查了六味葛蓝降脂片对小鼠的急性毒性及遗传毒性效果，实验成果标明，该产品的三项遗传毒性实验（小鼠精子变形实验、小鼠骨髓细胞微核实验、Ames实验）均为阴性，急性经口毒性实验依据我国《保健食物查验与点评技术规范》（2003年版）的点评规范属无毒级，标明六味葛蓝降脂片是一种服用安全的保健食物。

[参考文献]

[1] 卢熠，杨悦.降血脂药物的临床运用与展望[J].我国当代医药，2014，21（5）：180-182.

[2] 郭东杰，袁肖寒，蔡曼，等.降血脂西药与中药研讨现状与展望[J].黑龙江医药，2014，27（1）：32-36.

[3] 杜志澎.高胆固醇与心血管风险要素相关性研讨[J].我国当代医药，2013，20（2）：7-8.

[4] 苏蓉，于德水.高脂血症的损害及防治[J].我国当代医药，2009，16（8）：128-129.

[5] 刘石.调血脂药物的研讨进展[J].北方药学，2013，10（10）：94.

[6] 刁玉林，刘祎，孟大利.降血脂天然产品研讨进展[J].沈阳药科大学学报，2009，26（12）：1008-1012.

[7] 辛丹丹，名贵荣，博·格日勒图，等.国内外降脂药物的研讨进展[J].内蒙古中医药，2013，32（21）：149-151.

[8] 吴栩，孙晓茂.中医药医治高脂血症研讨概述[J].中医研讨，2013，26（3）：73-75.

[9] 李文雄，孙赫，刘文婷.中医药医治高脂血症研讨进展[J].河南中医，2015，35（2）：439-441.

[10] 王丹丹，李难，张闻东.中医药医治高脂血症的研讨进展[J].黑龙江中医药，2014，43（3）：72-74.

[11] 周泽，陈晓虎.中医药医治高脂血症研讨进展述要[J].有用中医内科杂志，2011，25（3）：24-25.

[12] 罗宇东，蒋林，许梦寒，等.蓝参降脂方对高脂模型小鼠血脂水平的影响[J].我国当代医药，2013，20（18）：4-5.

[13] 罗宇东，蒋林，刘源焕，等.蓝参降脂片对高脂模型大鼠血脂水平的影响[J].广西中医药，2015，38（2）：72-74.

[14] 中华公民共和国卫生部.保健食物查验与点评技术规范[Z].北京：卫生部卫生法制与监督司，2003：829.

[15] 王心如.毒理学根底[M].4版.北京：公民卫生出版社，2003：136.

[16] 国家规范汇编.GB15193.7-2003小鼠精子变形实验[M].北京：我国规范出版社，2004.

[17] 林梁鹏，李大伟，张士康，等.酰化茶多酚的急性毒性与遗传毒性实验研讨[J].我国食物添加剂，2014，（9）：65-70.

[18] 刘秀英，胡怡秀，易传祝，等.苦瓜醇提取物对小鼠的急性经口毒性和遗传毒性实验研讨[J].癌变·畸变·骤变，2007，19（5）：381-383.

[19] 侯震，胡向科.白藜芦醇对小鼠的急性经口毒性和遗传毒性实验研讨[J].癌变·畸变·骤变，2011，23（3）：213-215.

[20] 胡怡秀，刘秀英，马征，等.月见草油急性毒性与遗传毒性实验调查[J].有用防备医学，2009，16（1）：61-63.

[21] 曹丽，刘岩，隗维，等.朴菇多糖的急性毒性及遗传毒性实验研讨[J].癌变·畸变·骤变，2008，20（5）：406-408.

（收稿日期：2015-12-15 本文修改：王红双）