崔玉涛引荐婴儿感冒药 微型化介质研磨法制备槲皮素纳米混悬剂
刘肖 刘娟 庞建云 申宝德 沈成英 连王权 李小芳 袁海龙
[摘要]选用BoxBehnken规划效应面法优化一种微型化介质研磨法制备槲皮素纳米混悬剂（QTNS）的工艺参数并評价所制得的QTNS的体外累积开释度。成果显现，以最优工艺参数：氧化锆珠子45 mL、研磨速度690 r·min-1、研磨时刻15 h，制得的QTNS的粒径为（169±5） nm，多涣散度指数为0204±0006，安稳系数为0827±0014，且理论猜测值与实测值误差较小，模型具有杰出的猜测性；在120 min体外累积开释度试验中，QTNS显着高于原料药和物理混合物。运用该种微型化介质研磨法能成功制备QTNS，且该办法中原料药耗费少，工艺简略、操作便利，可为纳米制剂的制备供给新的参阅。
[关键词]槲皮素； 纳米混悬剂； 微型化介质研磨法； 体外开释
Preparation of nanosuspension of quercetin with a miniaturized milling method
LIU Xiao1， 2， LIU Juan1， PANG Jianyun1， SHEN Baode2， SHEN Chengying2，
LIAN Wangquan2， LI Xiaofang1*， YUAN Hailong2*
（1 College of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， China；
2 Department of pharmacy， Air Force General Hospital， PLA， Beijing 100142， China）
[Abstract]The nanosuspension of quercetin （QTNS） was prepared by a miniaturized milling method， and the process was optimized by BoxBehnken response surface method Then the accumulative release rate of QTNS in vitro was determined The results showed that the optimal process parameters were as follows： ZrO2 45 mL， milling speed 690 r·min-1 and milling time 15 h； the particle size of QTNS was （169±5） nm， polydispersity index of 0204±0006 and stability index of 0827±0014， respectively There was a little deviation between the theoretically predicted value and the measured value， indicating that this model had a good prediction effect The accumulative release rate in vitro of QTNS in 120 min was significantly higher than that of the raw drug and physical mixture This simple lowcost miniaturization approach could prepare QTNS successfully， and could provide reference for the formulation of the nanosuspension.
[Key words]quercetin； nanosuspension； miniaturized milling method； in vitro release
槲皮素（quercetin，QT）为一种天然黄酮类化合物，具有抗氧化、抗癌、抗高血压、抗抑郁、冷静催眠等效果。但由于槲皮素亲水性差、吸收差、口服生物利费用低，约束了其临床使用[13]。
纳米混悬剂（nanosuspension，NS）是选用少数表面活性剂作为安稳剂的“纯药物”粒子所构成的一种亚微米胶体涣散系统[4]。NS中药物以纳米状况存在，高度涣散，利于药物的溶出和吸收，能显着进步药物的生物利费用。现在制备NS首要办法有“top down”和“bottom up”两类[5]，其间，介质研磨法作为常用“top down”技能现已完成了产品的上市。但是，现有的介质研磨法需求专门的研磨机，且一次制备所需原料药较多，处方及工艺挑选进程资源耗费较大，不适用于宝贵原料药及新别离的活性化合物（别离量一般较少）的制备。
本研讨参阅文献办法[6]，规划一种微型化介质研磨技能，以磁力拌和器为动力装置，西林瓶为研磨室，选用氧化锆珠子为研磨介质，制备QTNS，并对工艺进行优化。该办法一次制备只需求几十毫克的原料药，并且操作便利、不需专门的设备、本钱极低。
1资料
集热式恒温加热磁力拌和器（DF101S，北京恒丰长伟科技有限公司）；粒度/Zeta电位测定仪（Zetasizer Nano ZS，英国马尔文仪器有限公司）；智能溶出试验仪（ZRS8G，天津市天大天发科技有限公司）；紫外分光光度计（UV2401PC，日本岛津公司）。
槲皮素原料药（批号CY160517，陕西慈缘生物技能有限公司）；槲皮素对照品（批号100081201610，我国食品药品检定研讨院）；泊洛沙姆188（P188，批号WPCH530B，北京风礼精求商贸有限责任公司）；无水乙醇（批号20160820，北京化工厂）。endprint
2办法与成果
21QTNS的制备
选用微型化介质研磨法制备QTNS，称取80 mg P188于10 mL的西林瓶中，参加40 mL蒸餾水和磁力拌和子，恰当拌和，混匀，参加QT 400 mg和粒径为04～06 mm氧化锆珠子（35，40，45 mL），经过调理磁力拌和的转速（500，700，900 r·min-1），带动氧化锆珠子研磨不一起刻（05，10，15 h）来制备QTNS。
22QTNS的粒径和多涣散度指数的测定
取适量QTNS，加蒸馏水稀释，选用粒度/Zeta电位测定仪测定QTNS的粒径（PS）和多涣散度指数（PDI），重复3次。
23QTNS的安稳系数的测定
取适量QTNS于20 mL EP管中，转速1 500 r·min-1，离心30 min[7]，取上层混悬液适量，加蒸馏水稀释，选用粒度/Zeta电位测定仪丈量QTNS的粒径，重复3次。选用以下公式核算：安稳系数（SI）=离心后的PS/离心前的PS。
24QTNS工艺参数的优化
241BoxBehnken效应面法优化QTNS工艺本研讨挑选P188作为安稳剂，单要素试验（操控ZrO2的用量为35 mL，转速为700 r·min-1，研磨时刻为05 h）成果标明，其用量对QTNS的PS，SI，PDI影响均较小，且用量为80 mg时，制得的QTNS的PS最小。P188用量单要素试验成果见表1。在参阅文献和预试验基础上[89]，挑选对QTNS制备较显着的3个要素，即ZrO2的用量（X1）、研磨速度（X2）和研磨时刻（X3）进行优化研讨。以PS（Y1，最小值为优）、PDI（Y2，最小值为优）、SI（Y3，挨近1为优）为呼应值，选用3要素3水平的BoxBehnken规划优化QTNS工艺。要素水平见表2，试验规划及成果见表3。
242模型拟合试验成果用DesignExpert 806软件进行二项式方程拟合，并将各要素对Y1，Y2，Y3进行相关性剖析。回归系数的显着性查验见表4。删去对方针无显着性影响的项，得到的回归方程别离为Y1=422350-17350X1-217150X3+76200x32（R2=0983 8，校对R2=0962 9，P<0000 1）；Y2=0446-0038X1-0065X3（R2=0970 9，校对R2=0964 1，P<0000 1）；Y3=0798-7238×10-5X2+0552X3+2150×10-4X1X2-714×10-7X22-0123X32（R2=0989 0，校对R2=0974 9，P<0000 1）。
243工艺参数优化与猜测根据回归方程，制作以PS，PDI，SI对自变量的三维效应面图，成果见图1。由图1A可知，QTNS的PS受ZrO2的用量和研磨时刻影响显着，跟着ZrO2的用量增大和研磨时刻的添加，PS都减小，而研磨时刻对其影响较大；图1B标明，PDI跟着ZrO2的用量添加和研磨时刻的增大，都显着减小；图1C和图1D标明，所选的3个要素中研磨时刻对SI的影响最为显着，研磨时刻越长，ZrO2的用量越大，SI越大，而跟着转速的添加，SI呈现先增大后减小的趋势。
244工艺验证选用DesignExpert 806试验规划软件，按Y1，Y2最小，Y3挨近1设定方针，得到的最优工艺条件为X1=45 mL，X2=690 r·min-1，X3=15 h。模型对各方针的猜测值Y1，Y2，Y3别离为169 nm，0191，0828。根据该工艺制备了3批QTNS，测定各呼应方针。实践丈量值别离（169±5） nm，0204±0006和0827±0014。成果显现，实践丈量值与模型猜测值挨近，标明该模型的猜测性杰出。
25QTNS扫描电镜（SEM）调查
取最优的QTNS适量，蒸馏水稀释后，滴于锡箔纸上，常温条件下放置，挥干，制备QTNS的SEM样品，于SEM下调查其形状并拍照相片，成果见图2。由图2可知，QT原料药巨细不均匀，呈较大的棒
26Zeta电位测定
室温下，取QTNS适量，双蒸水稀释后，测定其Zeta电位，平行3次。测得Zeta电位为（-2390±939）mV，成果见图3。
27QT含量测定办法的树立
271对照品溶液及阴性溶液的制备精细称取QT对照品995 mg，22%乙醇制造成3980 mg·L-1的QT对照品储藏液，于4 ℃冰箱中保存，备用。再称取一定量的P188，同法制得阴性溶液。
272测定波长的挑选取适量QT对照品储藏液，稀释为398 mg·L-1的QT对照品溶液，紫外分光光度计进行全波长扫描，发现在375 nm波利益有最大吸收。再取适量阴性溶液，于375 nm波利益扫描，发现无吸收峰，标明阴性无搅扰。
273规范曲线的制备别离制造浓度为199，398，597，796，995 mg·L-1的QT对照品溶液，于375 nm处测定吸光度。以QT质量浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，制作规范曲线，得回归方程C=0067A-0002，R2=0998。成果标明，QT在199～995 mg·L-1呈杰出的线性关系。
28QTNS体外开释点评
参照《我国药典》2015年版第四部附录开释度测定办法：别离取QTNS、物理混合物混悬液、QT原料药混悬液各05 mL，以22%乙醇为开释介质，操控转速为50 r·min-1，温度为（37±05） ℃，别离于2，5，10，15，30，45，60，90，120 min取样50 mL，045 μm 微孔滤膜过滤并稀释，一起弥补等温、等体积的22%乙醇，测定样品溶液吸光度，核算药物的体外累积开释度，平行3次。成果见表5，图4。由图可知，QTNS在30 min内，药物的体外累积开释度到达了（6767±407）%，而原料药和物理混合物的混悬液在120 min内的体外累积开释度仅别离为（3213±212）%和（3752±237）%，标明将QT制成QTNS，能显着进步其体外开释度。endprint
3评论
文献报导[5，10]，研磨介质用量、研磨速度和研磨时刻是影响纳米混懸剂制备的首要要素。故本研讨挑选上述3个调查要素。NS具有热力学不安稳性，长时刻放置，会呈现粒子集合等现象。故优化试验中，除了将惯例的PS和PDI作为方针外，还引入了SI这一方针，调查其安稳性。
从体外累积开释度可知，QT原料药和物理混合物最大体外累积开释度只要35%左右，而制备成NS后，QT的体外累积开释度在30 min时就能到达65%以上，可见QTNS体外累积开释度显着优于QT原料药和物理混合物。剖析原因可能是：NS使药物的粒径减小，表面积增大，药物的渗透性增强，从而使药物的饱满溶解度和溶出率都得到了进步[11]。
本研讨中的试验器件简单取得，操作便利，并且节省原料药。总归，本研讨规划的微型化介质研磨技能，可为纳米混悬剂的制备供给新的办法。
[参阅文献]
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[责任编辑孔晶晶]endprint