脑血疏口服液 HPLC法测定脑血疏口服液中黄芪甲苷的含量
王庆学+韩琳
[摘要]意图 树立脑血疏口服液中黄芪甲苷的含量测定办法。办法 选用高效液相色谱法（HPLC）定量剖析脑血疏口服液中黄芪甲苷的含量。色谱柱：Shimadzu UVP-ODS（5 μm，250 mm×4.6 mm）；十八烷基键合硅胶为填充剂；活动相：乙腈-水（17：33）。理论板数按黄芪甲苷峰计应≤4000。成果 黄芪甲苷的进样量在1.78～24.92 μg呈杰出的线性关系，r=0.9998；均匀收回率为101.02%，相对规范偏差（RSD）=4.03%，在常温下8 h内安稳性较好。定论 HPLC法简洁快速、精确、重现性好、成果牢靠，该黄芪甲苷含量测定法可作为操控脑血疏口服液质量的办法。
[关键词]脑血疏口服液；黄芪甲苷；高效液相色谱法；含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）11（c）-0137-03
[Abatract]Objective To establish an assay method of astragaloside in Naoxueshu Oral Liquid by HPLC.Methods The content of astragaloside in Naoxueshu Oral Liauid was detected by HPLC，and Shimadz UVP-ODS（5 μm，250 mm×4.6 mm）Column was used.18 alkyl bonding silica gel as the filling agent.The mobile phase was a mixture of acetonitrile-water （17∶33）.According to the theory of number of astragalus armor plate tower peak computation should not below 4000.Results A good linear relationship of Astragaloside was in the range of injection volume was from 1.78 to 24.92 μg （r=0.9998），the average recovery rate was 101.02%，RSD=4.03%.The constancy was good within 8 hours under common temperature.Conclusion The HPLC method is convenient，sensitive and accurate.It can be a method for quality control of Naoxueshu Oral Liquid in production.
[Key words]Naoxueshu Oral Liquid；Astragaloside；HPLC method；Content determination
脑血疏口服液首要含有黄芪、水蛭、大黄、牡丹皮等，可益气活血，在临床上运用多年，作用杰出。首要能够添加脑血流量，改进微循环，促进吞噬细胞的吞噬功用，加快脑血肿的吸收[1-3]，因而，该药是医治出血性中风的首选药物之一。方中君药黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿托毒等成效，还具有维护缺血性心肌、调理血压、扩张血管、增强免疫力、抗病毒、抗变老等作用，还具有必定的抗癌作用[4-6]。黄芪的药用价值很高，临床上常被用来医治非特异性免疫功用低下，乙肝和心血管系统等疾病；黄芪中含有多种化学成分，如多糖类成分、黄芪皂苷Ⅰ～Ⅷ、异黄酮、钙、钾等，其间黄芪甲苷具有强心作用、心肌缺血作用及按捺血小板凝聚和抗氧化、变老等作用[7-8]，因而对方中君药黄芪的质量规范研讨对脑血疏口服液的质量规范特别重要。本研讨调查多种测定条件，高效液相色谱法（HPLC）具有别离效能高、剖析速度快、检测灵敏度高、自动化操作、剖析精确度高级长处，故选用HPLC法测定脑血疏中黄芪甲苷的含量，以进步该药品的质量规范。
1仪器与试药
日本岛津1260型高效液相色谱仪，SPD-20A（V）紫外检测器；脑血疏口服液（山东沃华医药科技股份有限公司，批准文号：国药准字Z20070059）；黄芪甲苷规范品（批号110781～201402，我国食物药品检定研讨院）；乙腈为色谱纯（Fisher Scientific）；水为纯化水；其他试剂均为剖析纯。
2办法与成果
2.1色谱条件
色谱柱：岛津Shimadzu UVP-ODS（5μm，250 mm×4.6 mm）；十八烷基键合硅胶为填充剂；活动相：乙腈-水（17∶33）；检测波长：200 nm；流速：1.0 ml/min；样品进样量为10 μl。理论板数契合《我国药典》2015年版要求。
2.2溶液制造
精细称取黄芪甲苷规范品9.315 mg，置于10 ml量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，得规范品溶液。
取脑血疏口服液（150101、1501021、150103、150401、150402、150403、150701、151002、151201、151202）样品，精细量取10 ml，置分液漏斗中，别离加20 ml水饱满的正丁醇溶液提取4次，兼并正丁醇液；别离取100 ml氨试液洗刷3次，取正丁醇液蒸干。残渣用甲醇溶解并移入5 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，薄膜过滤，得供试品溶液。
依照药品的制备办法制备缺黄芪的制剂作为空白溶液。
2.3线性试验
制造规范品溶液，浓度别离为0.356 mg/ml、0.712 mg/ml、1.068 mg/ml、1.424 mg/ml、1.780 mg/ml、2.136 mg/ml、2.492 mg/ml，取10 μl分別进样，测定其峰面积别离为110 209、709 820、1 263 252、1 910 580、2 492 408、3 178 988、3 746 508，制作规范曲线，回归方程y=171312x-523518，r=0.9995，成果显现进样量为3.56～24.92 μg范围内线性关系杰出。
2.4精细度试验
精细汲取“2.2”项下规范品溶液，在相同色谱条件下重复进样5次，记载其峰面积别离为1 313 181、1 368 894、1 358 224、1 311 770、1 303 445，RSD为2.26%。
2.5重复性试验
精细量取样品（150402）5 ml共5份，照“2.2”项下供试品溶液制备办法进行处理并测定，成果显现重复性杰出（表1）。
2.6安稳性试验
按样品溶液制备办法制得供试品溶液（批号：150402），精细汲取供试品溶液10 μl注入液相色谱仪测定。别离于0、2、4、6、10、16、20、24 h测定1次。峰面积依次为236 851、240 501、239 980、242 697、239 803、 236 654、231 569、235 980，RSD为1.46%，提示供试品溶液在24 h内安稳。
2.7收回率试验
精细量取已知含量的脑血疏口服液（批号：150402）5 ml置分液漏斗中，别离精细量取规范品溶液（0.9 315 mg/ml）各2 ml参加，按2.2项下办法制备供试品溶液并测定，核算其收回率：收回率（%）=（测得量-供试品所含被测成重量）/参加对照品的量×100%。得均匀收回率为101.02%，RSD为4.03%，加样收回杰出（表2）。
2.8空白试验
取“2.2”项下的空白溶液，按相同色谱条件进样，在与对照品相同时刻处无色谱峰呈现，标明其他成分对黄芪甲苷的测定无搅扰。
2.9样品测定
各样品进样10 μl，按“2.1”项下色谱条件测定，成果见表3。
3评论
测定黄芪甲苷含量的办法有许多，如比色法[9]、分光光度法[10]及薄层扫描法[11]等，近年来，黄芪甲苷的剖析手法有了进一步的进步，有高效液相色谱-蒸发光散射检测器法及在线固相萃取高效液相色谱法等[12-14]，可是该办法添加了查验本钱，相对进步了药品的本钱，HPLC的分辨率较高，重复性好，色谱柱还能够重复运用，节约本钱，并能较好的检测黄芪甲苷的含量[15]，故本研讨仅对该办法进行研讨。
因为黄芪甲苷归于四环三萜类皂苷，紫外结尾吸收（λmax=200.8 nm），归纳考虑多种要素，挑选200 nm为本试验的测定波长。别的本研讨还调查了甲醇-水及乙腈-水的活动相系统，成果发现，因为黄芪甲苷的最大吸收波长较低，用甲醇-水作为活动相时，黄芪甲苷与其他峰之间的别离作用欠好，而乙腈-水（17∶33）作为活动相时，别离度契合药典要求，且剖析时刻较短，节约本钱。
因为黄芪含有多种成分，一般的处理办法无法将剩余成分除掉，影响别离作用。本试验依照“2.2”项下办法处理样品，能将大部分杂质成分除掉，色谱峰中的杂质峰较少，黄芪甲苷与其他非方针峰之间的别离度契合药典要求。
本研讨以Shimadz UVP-ODS为色谱柱，乙腈-水（17∶33）为活动相，选用HPLC紫外检测法测定脑血疏口服液中黄芪甲苷的含量，办法简洁、成果精确、重现性好，主张用于脑血疏口服液的质量规范操控。
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（收稿日期：2016-08-05 本文修改：顾雪菲）