石斛有几种种类 不同真菌对2种药用石斛种子共生萌生的效应

字肖萌+高江云

[摘要]兰科石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum和齿瓣石斛D. devonianum均为传统中药材，有着极高的药用价值。研讨使用3种从不同兰科植物中别离得到的内生真菌在不同光照条件下与这2种石斛植物种子在树叶、松树皮和椰糠混合基质上进行共生萌生试验。研讨成果表明，胶膜菌属Tulasnella FDaI7菌株及瘤菌根菌属Epulorhiza FDd1菌株别离能有用地促进兜唇石斛和齿瓣石斛种子的萌生及麦苗建成，石斛与真菌存在共生专一性。共生培育60 d，接菌FDaI7的兜唇石斛种子，原球茎或麦苗构成率别离为14.46%，12.07%；接菌FDd1的齿瓣石斛种子，二者构成率别离为44.36%，42.91%。在2种光照条件下，已构成的原球茎均能够进一步发育为麦苗，而继续漆黑条件会导致麦苗白化或变形。研讨成果为2种石斛的户外回归奠定了理论基础，也为这2种药用石斛人工仿生态培养的种苗扩繁供给了新的办法。

[要害词]兜唇石斛；齿瓣石斛；种子共生萌生；人工混合基质；共生专一性

兰科植物的种子十分细微，老练的种子没有胚乳或子叶，仅有未分解的胚，在天然条件下需求依托特定共生真菌供给养分来促进其萌生和发育 [1-3]。现在，使用兰科植物种子在人工无菌培育基上进行非共生萌生的技能现已十分老练，使得经过种子大规划繁衍麦苗得以完成，这在一些药用和欣赏兰科植物的商业化出产中已得以广泛使用。非共生萌生技能的长处是种子萌生率较高，一般在95%以上^[4]，但麦苗移植到天然环境傍边存活率较低，很难与真菌从头树立共生联系而导致后续的成长发育遭到严峻的按捺^[5-6]。兰科植物种子的共生萌生，是在人工基质中耕种种子并接种共生真菌，使用真菌共生来促进种子萌生和取得麦苗。从理论上说，共生萌生不仅能简化麦苗出产过程，大大下降出产本钱，更重要的是能明显进步麦苗回归到天然环境中后的存活率和麦苗成长速度^[7]。兰科植物种子共生萌生技能的使用，在珍稀濒危兰科植物的回归、药用兰科植物的仿生态培养等方面都具有巨大的潜在使用价值。

兰科石斛属Dendrobium的许多品种作为传统的药材和保健品在我国使用历史悠久，素有“中华仙草”之美称。西双版纳是我国石斛的主产区之一，有野生石斛43种、1变种^[8]，其中有22种被加工成石斛产品^[9]。齿瓣石斛D. devonianum在业界被叫做“紫草”，制成的制品称作“紫皮枫斗”，商场价值很高。齿瓣石斛是现在人工集约化培养规划仅次于铁皮石斛的品种，其在西双版纳区域花期为4—5月，附生于林中树干上，其主要海拔散布规模为1 100～1 600 m，和茶叶的最佳培养海拔堆叠，在许多茶园茶树上都有天然成长的齿瓣石斛。兜唇石斛D. aphyllum为西双版纳区域一种常见的石斛，花期3—4月，常附生于海拔600～1 000 m的林中树干或岩石上。其茎杆是加工各类药用石斛产品，如石斛粉、石斛酒、石斛饮料等最主要的质料之一。

在人工天然或半天然条件下，展开石斛的仿生态培养，相对于现在展开的人工集约化培养，省去了贵重的棚架、苗床、喷灌体系等基础设施的投入和贵重的日常办理本钱，然后能够满意贫困区域当地居民因为经济条件的约束无法接受的高本钱和投入。挑选药用价值较高的原生石斛品种，使用西双版纳得天独厚的气候优势，展开古茶园、果园等的石斛仿生态培养，进行粗豪办理，下降培养办理难度和投入，在添加居民收入、减贫致富的一起，削减对野生资源的收集强度，以到达维护的意图，这也是石斛工业长时间可继续发展的新途径。经过作者的实践查询发现，种苗来历是决议石斛仿生态培养胜败的要害因素之一，经过取得特定对石斛种子萌生有用的真菌，展开种子的共生萌生出产种苗，是处理现在石斛仿生态培养瓶颈问题的要害。

现在，作者经过原地共生萌生技能（in situ seed baiting technique）从齿瓣石斛和兜唇石斛原生萌生的原球茎中成功别离得到了2种内生真菌，经过前期试验室中在燕麦琼脂培育基（OMA）上的共生萌生试验，证明所取得的2种内生真菌别离是兜唇石斛和齿瓣石斛种子共生萌生的有用真菌^[10]。本研讨在此基础上，在人工混合培育基上展开这2种药用石斛种子和不同真菌的共生萌生研讨，为实践使用这2种真菌展开齿瓣石斛和兜唇石斛的共生种苗出产供给依据。

1 资料

本研讨于2013年1—3月在我国科学院西双版纳热带植物园进行。兜唇石斛D. aphyllum和齿瓣石斛D.devonianum的种子为2011年4—5月花期人工异交授粉，果实天然老练后于2012年3月采收，按Seaton和Pritchard的办法经过种子活力检测和枯燥后，于-20 ℃保存^[11]。

供试的3种真菌菌株别离编号为FDaI7，FCb4，FDd1。FDaI7为经过原地共生萌生技能从兜唇石斛原球茎中别离取得的菌株，分子判定为胶膜菌属Tulasnella真菌^[10]；FCb4为经过迁地共生萌生技能从硬叶兰Cymbidium mannii原球茎中别离取得的菌株，分子判定为瘤菌根菌属Epulorhiza菌属^[12]。以上2种真菌的样本保藏于我国微生物菌种保藏办理委员会一般微生物中心（CGMCC， http：//www.cgmcc.net/），编号别离为7552，7553。FDd1菌株则是从齿瓣石斛种子原生地萌生构成的原球茎中别离得到的真菌，经过分子测序，其ITS片段序列在美国国立生物技能信息中心（National Center of Biotechnology Information， NCBI， http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）进行BLAST比对剖析（http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi），与登录号为AJ313443.1的瘤菌根菌属Epulorhiza真菌最为类似，最大类似程度为95%，E值为0。依据菌株形状及分子判定成果判定为瘤菌根菌属真菌。3种菌株都选用PDA试管斜面法保存于4 ℃冰箱中待用^[13]。endprint