缺血缺氧性脑病预后：缺血前预处理改进脑缺血后再灌注损害预后的作用研讨
谢凯胜 盘庆飞 黄贤 李圣海 何秀美
[摘要]意图 探討缺血前预处理改进脑缺血后再灌注危害预后的效果。办法 随机选取75只健康雄性小鼠分为3组，包含假手术组（15只）、对照组（28只）、调查组（32只），其间假手术组小鼠仅结扎右侧颈总动脉，对照组、调查组小鼠均以线栓法树立小鼠脑缺血模型，并在小鼠缺血2 h后进行再灌注24 h，对照组灌注前给予生理盐水处理，调查组运用头孢曲松处理，调查三组小鼠脑安排梗死的容积、神经功用缺点评分以及安排内白介素1β（IL-1β）炎性因子的水平状况。成果 调查组小鼠神经功用评分高于对照组，皮层脑内IL-1β水平低于对照组，脑梗死容积小于对照组，差异有统计学含义（P<0.05）；两组纹状体炎性因子水平及梗死容积比较，差异无统计学含义（P>0.05）；假手术组神经功用评分高于对照组与调查组，IL-1β水平低于对照组与调查组，梗死容积小于对照组与调查组，差异有统计学含义（P<0.05）。定论 临床在脑缺血再灌注前运用头孢曲松进行预处理，能够下降脑内IL-1β炎性因子的表达、排泄，有用削减脑梗死容积，减轻脑神经功用丢失。
[要害词]预处理；危害；缺血再灌注；脑安排
[中图分类号] R743 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）4（c）-0116-03
Effect study of ischemic pretreatment on improving the prognosis of reperfusion injury after cerebral ischemia
XIE Kai-sheng1 PAN Qing-fei1 HUANG Xian1 LI Sheng-hai1 HE Xiu-li2
1.Department of Emergency，Shiyan People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province，Shenzhen 518100，China；2.Department of Emergency，Luohu People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province，Shenzhen 518100，China
[Abstract]Objective To investigate the effect of ischemic pretreatment on improving the prognosis of cerebral ischemia-reperfusion injury.Methods A total of 75 healthy male mice were randomly divided into 3 groups：sham operation group （n=15），control group （n=28） and observation group （n=32）.In the sham operation group，only right common carotid artery was ligated.In the observation and control groups，the cerebral ischemic model in mice was established by suture method.The mice were reperfused 24 hours after ischemia for 2 hours.In the control group，saline was used before perfusion，while in the observation group，ceftriaxone was applied.The infarct volume，neurological deficit scores and interleukin-1β （IL-1β） inflammatory cytokines levels in the three groups of mice were observed.Results The score of neurological function in the observation group was higher than that in the control group.The level of IL-1β in the cortex was lower than that in the control group.The volume of cerebral infarction was smaller than that in the control group，the difference was statistically significant （P<0.05）.The levels of inflammatory cytokines and infarcted volume of corpus striatum were not displayed statistical differences （P>0.05）.The scores of neurological function in the sham operation group were higher than those in control group and observation group.The IL-1β level and infarct volume in the sham operation group were also lower than those in the other two groups，，the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion Application of ceftriaxone for pretreatment before cerebral ischemia-reperfusion can decrease the expression and secretion of IL-1β inflammatory factor，effectively reduce the volume of cerebral infarction，and alleviate neurological deficit.
[Key words]Pretreatment；Injury；Ischemia-reperfusion；Cerebral tissue
脑是人体中重要的功用性器官之一，也是最为耗氧的器官，但近几年脑卒中、脑梗死等疾病发病率显着上升，患者发病时脑部均会有不同程度的缺血，研讨提示脑缺血是构成患者神经功用障碍、逝世的首要原因[1]。为有用减轻脑疾病患者的脑缺血，临床需及时康复缺血区域的血液灌注，但很多研讨提示缺血再灌注会对患者脑安排构成二次危害，不只无法起到杰出的医治效果，一起还会导致脑细胞逝世，危及患者的生命安全[2]。有学者提出对脑缺血患者再灌注前可行预处理，以减轻脑安排丢失，防止脑梗死的面积扩展[3]。本研讨调查头孢曲松预处理小鼠的神经危害状况，旨在为后期临床脑缺血再灌注的医治供给根据，现报导如下。
1材料与办法
1.1试验动物
本研讨所选取的动物均购于军事医学科学院试验动物中心，体重（192.25±19.12）g，合格证号：SCXK（军）2016-0001。
1.2首要仪器与试剂
兔抗大鼠 OX-42（北京泰泽瑞达科技有限公司）、兔抗大鼠 IL-1β[派普泰克生物科技（姑苏）有限公司]、兔抗大鼠 GFAP（上海谷研科技有限公司）、头孢曲松（南昌立健药业有限公司，国药准字H20023084）、小鼠抗大鼠 NeuN（Chemicon）、IL-1βELISA 试剂盒（上海吉泰依科赛生物科技有限公司）。
1.3试验分组及处理
合格健康试验小鼠30只，体重221～254 g，术前一切小鼠禁食12 h。一切小鼠称重后，以10%水合醛3.5 ml/kg于小鼠腹腔打针，麻醉后在小鼠頸正中处做切断，游离颈表里动脉及右侧颈总动脉，在充沛露出血管后将颈总动脉、外动脉近心端结扎，于总动脉分叉下方做小切断，将尼龙栓线蘸取适量肝素钠后置入，并缓慢推动，深度在19～20 mm时中止（假手术组推动深度为9 mm），将颈总动脉远心端扎紧，树立脑缺血模型。后在对照组及调查组小鼠右侧股静脉做切断置管，衔接微量打针泵，在栓塞2 h后拔出尼龙栓线康复再灌注24 h，此刻对照组泵入生理盐水，调查组泵入头孢曲松，一切小鼠术顶用保温毯保持体温在38℃左右。
1.4 调查目标及检测办法
1.4.1调查目标 调查三组小鼠脑安排梗死容积、神经功用缺点评分以及脑内IL-1β炎性因子的水平状况。梗死容积=（对侧脑安排-患侧正常脑安排）/对侧脑安排×100%；神经功用缺点评分：小鼠再灌注24 h后，将其提起调查小鼠动作，小鼠四爪屈伸无变化计0分，对侧前爪扩展不完全计1分，小鼠向对侧转圈计2分，小鼠向对侧倾倒计3分，小鼠无法行走、认识丧失计4分，小鼠逝世计5分。
1.4.2检测办法 脑梗死容积测定：再灌注24 h后，先对小鼠动作进行调查，后麻醉小鼠断头处死，翻开其颅骨盖，剥去脑膜，取出整个大脑，以PBS溶液清洗后当即置于-20℃冷冻10 min。将冷冻后的脑组沿冠状面切成厚度2.0 mm 左右的薄片6张，将切片置于2% TTC 溶液中，并在37℃水浴下避光孵育 10～20 min，最终以4%多聚甲醛固定脑切片，时刻1～3 d，将切片用数码相机拍下脑梗死图片后，以图画剖析软件核算小鼠的梗死容积。
小鼠IL-1β检测：本次检测选用双抗体夹心ELISA 法，于酶标板上参加抗小鼠 IL-1β单抗，将规范品、样品中IL-1β与单抗结合，并参加生物素化抗大鼠 IL-1β，以于酶标板上构成免疫复合物，将Streptavidin（辣根过氧化物酶符号）与生物素结合，最终参加底物液，在显蓝色后加停止液硫酸，调查酶标仪450 nm 处测吸光值，经过制作规范曲线求出标本中IL-1β浓度，取平均值。
1.5统计学办法
选用SPSS 18.0统计学软件对数据进行剖析，计量材料以均数±规范差（x±s）标明，选用t查验，三组比较选用F查验，计数材料选用χ2查验，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1三组小鼠脑梗死容积的比较
假手术组小鼠未呈现脑梗死状况，调查组皮层梗死容积小于对照组，差异有统计学含义（P<0.05）；两组纹状体梗死容积比较，差异无统计学含义（P>0.05），调查组梗死总面积显着小于对照组，差异有统计学含义（P<0.05）（表1、图1）。
表1 三组小鼠脑梗死容积的比较（%，x±s）
A：假手术组，脑梗死总容积为0.00%；B：对照组，脑梗死总容积（38.15±1.60）%；C：调查组，脑梗死总容积（22.40±1.75）%
图1 小鼠脑梗死状况
2.2三组小鼠神经功用缺点评分的比较
对照组神经功用缺点评分为（8.31±0.26）分，调查组为（12.54±0.32）分，假手术组为（17.63±1.20）分，假手术组小鼠的神经功用残缺评分高于其他两组，一起调查组小鼠的评分高于对照组（F=1239.13，P<0.05）。
2.3三组小鼠脑内IL-1β炎性因子水平的比较
假手术组小鼠脑内IL-1β水平低于其他两组，差异有统计学含义（P<0.05）；调查组皮层IL-1β水平低于对照组，差异有统计学含义（P<0.05）（表2）。
表2 三组小鼠脑内IL-1β炎性因子水平的比较（pg/ml，x±s）
与假手术组比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05
3评论
临床关于脑缺血患者医治要点在于及时有用康复缺血区域的血液灌注，但近几年跟着临床深入研讨，发现缺血再灌注时会对患者的脑安排构成二次危害，导致脑细胞逝世，原因为再灌注时脑细胞肿胀、决裂、坏死，而坏死脑细胞会影响脑安排，构成很多炎性分子排泄，跟着炎性因子滋润安排，引发炎症反响，诱发脑梗死、构成神经元危害，进而危及患者的生命安全[4-6]。
缺血再灌注危害炎症反响是引发危害的首要原因之一，因而怎么有用防止再灌注时脑部炎性细胞激活、按捺炎性因子开释，是减轻缺血再灌注危害的要害，有学者提出在再灌注前运用药物进行预处理，能够按捺灌注时炎性因子水平上升，减轻脑危害[7]。头孢曲松是临床常用的抗菌药物，但研讨标明此药不只有灭菌、消炎效果，还能发挥必定的神经维护效果，故有学者提出将其用于预处理，以减轻脑危害[8-9]。本研讨成果显现调查组小鼠的神经功用缺点评分高于对照组，差异有统计学含义（P<0.05），提示头孢曲松能起到必定的神经维护效果。这可能是因为此药能促进细胞内谷氨酸转运体RNA（信使mRNA）表达，添加转运体含量，下降脑内谷氨酸水平，然后削减神经毒性，到达减轻脑安排危害的意图[10-11]。研讨提示谷氨酸是人体内神经兴奋性递质，很多谷氨酸开释集合，可导致神经兴奋性毒性，构成细胞肿胀诱发脑部病变，而头孢曲松能在危害前期铲除兴奋性谷氨酸，故能减轻神经危害[12]。一起本研讨显现调查组小鼠皮层较对照组脑梗死容积小、脑内IL-1β水平低，差异有统计学含义（P<0.05），而在纹状体两组炎性因子水平及梗死容积无显着差异（P>0.05），成果提示头孢曲松可维护缺血半暗带皮层，反转部分梗死容积、IL-1β表达。研讨提示再灌注危害前期炎性细胞激活开释IL-1β，且跟着再灌注时刻延伸炎性细胞开端逐步开释一系列如肿瘤坏死因子α（TNF-α）等炎性介质[13-14]。因为IL-1β为缺血危害前期发生因子，可扩大炎症级联效应，导致炎症因子集合在危害脑安排血管周围，一起IL-1β可促进机体谷氨酸开释，加剧脑安排缺血、危害，而头孢曲松可按捺炎性细胞活化，阻止IL-1β开释，然后到达维护脑安排的意图[15]。
综上所述，临床在脑缺血再灌注前运用头孢曲松进行预处理，能下降脑内IL-1β炎性因子表达、排泄，有用削减脑梗死容积、减轻脑神经功用丢失，对脑安排起维护效果。
[参考文献]
[1]戚翔，贾建丽，蔡劲松，等.不同剂量右美托咪定预处理对大鼠全脑缺血再灌注危害炎性反响的影响[J].临床外科杂志，2015，23（11）：852-854.
[2]秦浩，顾丽泽，高丽，等.硫化氢预处理对大鼠全脑缺血/再灌注危害的维护效果及机制[J].我国医学科学院学报，2013， 35（3）：249-253.
[3]杨克红，刘浩，吴华璞，等.姜黄素预处理对大鼠脑缺血/再灌注危害的维护效果[J].我国药理学通报，2013，29（10）：1432-1436.
[4]邢东，吴志新，董辉，等.电针预处理对大鼠脑缺血危害后脑内炎症反响及NF-κB的影响[J].陕西医学杂志，2017， 46（9）：1155-1158，1195.
[5]肖爱娇，康明非，张毫，等.艾灸预处理对脑缺血再灌注危害模型大鼠大脑皮质caspase-3蛋白表达的影响[J].天津医药，2014，42（6）：544-546.
[6]石瑶，郭倩，周也涵，等.白藜芦醇经过Sirtuins 1通路促进自噬减轻大鼠脑缺血/再灌注危害[J].基础医学与临床，2015，35（4）：496-501.
[7]徐正虎，王君.阿托伐他汀预处理和缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注危害的维护效果[J].中华晚年心脑血管病雜志，2015，17（3）：310-312.
[8]朱芳芸，张霞婧，朱萧玲，等.谷氨酸转运体2在电针预处理减轻小鼠全脑缺血再灌注危害中的效果[J].中华麻醉学杂志，2013，33（2）：223-227.
[9]李国福，贾佳，符加红，等.异氟烷预处理或后处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注危害的影响[J].中华危重病急救医学，2014，26（6）：431-435.
[10]王焰斌，杨建安，陈伟新，等.乌司他丁预处理对深低温停循环主动脉手术患者脑缺血再灌注危害的影响[J].中华胸心血管外科杂志，2013，29（10）：614-616，626.
[11]方芳，李珍，王烈成，等.白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的维护效果和机制[J].我国药理学通报，2012，28（11）：1544-1548.
[12]徐德友，印卫士，沈华超，等.脉血康联合阿司匹林预处理对大鼠脑缺血-再灌注危害的影响[J].江苏医药，2013， 39（19）：2244-2246.
[13]何丹，杨势赫，金志成，等.碱性成纤维细胞生长因子预处理对大鼠脑缺血/再灌注危害的神经维护效果[J].东南大学学报（医学版），2015，34（5）：714-720.
[14]陈立英，王会军，陶小雪，等.不同预处理方法对大鼠局灶性脑缺血再灌注危害的神经维护效果[J].中西医结合心脑血管病杂志，2015，13（3）：312-314.
[15]任悦义，董河，王世端，等.吗啡对大鼠脑缺血再灌注后脑含水量及S100 β的影响[J].我国当代医药，2010，17（6）：5-7.
（收稿日期：2017-11-22 本文修改：闫 佩）