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刘圆月 侯菊花 李灿

[摘要]意图评论KLF6在口腔癌细胞恶性成长中的效果机制。办法使用免疫组化法检测95例口腔鳞癌安排和95例正常口腔黏膜安排中KLF6、p21和cyclinD1的表达。成果KLF6、p21，和cyclinD1在口腔鳞癌与正常口腔黏膜安排之间的差异均有计算学含义（P<0.05）；KLF6与p21的表达存在正相关，与cyclinD1表达存在负相关（P<0.05）。定论KLF6基因在口腔鳞癌的发作起着效果，KLF6与安排分解的联系提示浆表达的KLF6可用于断定肿瘤患者预后，而p21和cyclinD1或许是效果的两个靶点。

[要害词]KLF6；口腔癌细胞；效果机制；试验研讨

[中图分类号]R78 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721（2012）12（a）-0092-02

在世界规模，口腔鳞状细胞癌（OSCC）为一种常见的口腔癌[1]，虽然医疗技能取得了巨大进步，但口腔癌的预后依然不行抱负。最近研讨标明，癌发病的进程包含细胞增殖加快，细胞凋亡削弱，凋亡失利等。KLF6是遍及表达的锌指转录因子，它与成长发育、细胞分解及成长相关的细胞信号转导，细胞增殖、凋亡、血管生成等都有关。本文旨在研讨KLF6是否与口腔癌的发作相关，并探究其与p21和cyclinD1蛋白的联系。

1材料与办法

1.1一般材料

从本院2009年12月～2012年4月口腔鳞状细胞癌患者中，随机选95例作研讨组，男65例，女30例，年纪37～75岁，均匀52.8岁；术前均未经任何放、化疗等医治；其间，舌39例，口底27例，牙龈9例，颊13例，硬腭7例；临床分期：Ⅰ期39例，Ⅱ期27例，Ⅲ期15例，Ⅳ期14例；颈淋巴结搬运者32例，无颈淋巴结搬运者63例。取每例标本肿瘤边际5mm外的癌旁正常口腔黏膜95例（均未见肿瘤安排）为对照，其间，舌39例，口底27例，牙龈9例，颊13例，硬腭7例。

1.2试验办法

1.2.1首要试剂与染色办法 兔抗人cyclinD1单克隆抗体购于福州迈新生物技能有限公司，鼠抗人p21蛋白单克隆抗体，多克隆兔抗KLF6均购自SantaCruz公司。以上病理安排标本均经甲醛溶液固定、白腊包埋，制成4μm厚切片。进行免疫安排染色，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2成果判别 在高倍镜下对上色反应作如下评分：无上色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；阳性规模：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～100%为3分；两项成果相加，0～1分为阴性（-）、2～7分为阳性（+）。

1.3计算学办法

使用SPSS17.0计算软件，计量材料选用t查验，计数材料选用卡方查验，以P＜0.05为差异有计算学含义。

2成果

2.1KLF6、p21、cyclinD1在口腔癌组与对照组的表达

KLF6蛋白在细胞核和细胞浆均有呈黄色或棕色表达；p21及cyclinD1蛋白首要在细胞核出现黄色或棕色表达，cyclinD1在口腔癌组的阳性表达明显高于对照组（P<0.05），而KLF6、p21在对照组的阳性表达高于口腔癌组（P<0.05），见表1。

2.2KLF6，p21，cyclinD1与口腔鳞癌临床病理学联系

KLF6在不同安排分解组差异有计算学含义（P<0.05）；但KLF6在不同年纪、淋巴结搬运及临床分期组的差异无计算学含义（P>0.05）；p21在不同安排分解组表达差异有计算学含义（P<0.05）；但p21在不同年纪、临床分期及淋巴结搬运组的差异无计算学含义（P>0.05）。cyclinD1在不同淋巴结搬运组，临床分期组的差异有计算学含义（P<0.05），而在不同年纪、安排分解组的表达差异无计算学含义（P>0.05），见表2。

2.3KLF6、p21、cyclinD1三者表达的相关性

KLF6与p21的表达存在正相关，与cyclinD1表达存在负相关（P<0.05），见表3。

3评论

研讨发现大多数肿瘤细胞都存在一些细胞周期调控因子的表达反常，哺乳动物细胞分裂及分解的首要调理事情发作在G1期，G1期周期蛋白反常表达或许导致细胞周期失调，导致肿瘤的发作[2]。

p21归于细胞周期依靠激酶按捺物，首要经过阻挠视网膜母细胞瘤（Rb）基因的磷酸化来调理转录因子E2F的活性。当Rb基因处于磷酸化状况时，调理细胞周期开展的一些要害基因的转录不可以被E2F激活。以此，p21阻挠了G1期向S期的过渡，将细胞周期阻滞在G1～S期，然后按捺细胞的成长。蔡杨等[3]估测p21基因失活是口腔癌发作进程中的前期分子事情。cyclinD1也被认为是在细胞周期蛋白宗族中约束G1期向S期转化中重要的调控因子之一。该基因的扩增、染色体重排或转录后调理都可导致其蛋白的过表达而发作癌变，cyclinD1的N端的序列可与Rb结合，在CDK4的帮忙下，使Rb蛋白被磷酸化，总归，cyclinD1的基因扩增和过表达可导致高磷酸化的Rb，然后促进G1/S期转化，加快细胞周期，使细胞继续增殖导致恶性转化[4]，因而，p21与cyclinD1均是口腔癌发作的要害蛋白。

有研讨[5-6]报导KLF6与前列腺癌、肝癌的发作有密切联系。KLF6首要经过按捺肿瘤细胞的增殖以及促凋亡发作效果，除此外它的表达还与体内一氧化氮的组成相关，可使细胞内源性一氧化氮合酶的mRNA的表达添加3～4倍，TGF-β1和TGF-βⅠ、Ⅱ型受体以及HSP47、诱生型一氧化氮合酶等也是KLF6的靶基因。这些靶点都可以参加机体的细胞周期调控、细胞凋亡等多种生物学行为[7-8]，以上均阐明KLF6对肿瘤的按捺功用。本试验成果显现，KLF6与口腔癌相关。口腔癌KLF6的表达高于对照组，且跟着细胞分解程度下降，细胞增殖才能增强以及细胞恶性程度添加，反常的KLF6很多添加出现在细胞浆中，提示浆表达的KLF6可作为断定肿瘤恶性程度的目标。有研讨发现单核苷酸多态性可添加KLF6基因选择性剪切的发作，发作的变异体如KLF6-SV1及KLF6-SV2等可影响p21的表达，因而在胞质中竞赛转录辅助因子或阻隔野生型KLF6，以此对立野生型KLF6对成长的按捺，SirachE等[9]研讨发现在肝癌细胞株中，KLF6经过p21阻挠Rb基因磷酸化，下调细胞周期蛋白cyclinD1，然后搅扰细胞从G1期向S期转化，使肿瘤细胞的成长按捺，本次研讨发现的恶性肿瘤中KLF6基因核表达缺失或削弱与p21表达下调呈明显正相关，正常安排KLF6表达cyclinD1表达明显负相关也支撑以上定论。因而，笔者估测KLF6的功用是经过上调p21蛋白的表达及对cyclinD1的按捺而发挥效果。总归，KLF6与口腔鳞状细胞癌的发作开展密切相关，p21及cyclinD1或许是KLF6效果的其间两个靶点，详细机制值得进一步深入研讨。

[参考文献]

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[2] 邹向阳，李连宏.细胞周期调控与肿瘤[J].世界遗传学杂志，2006，29（1）：70-73.

[3] 蔡扬，何园，卢虹，等.口腔鳞状细胞癌cyclinE及p21waf1蛋白定量检测及含义[J].我国肿瘤临床，2008，35（3）：142-144.

[4] 张迎春，周士东，孔庆兖，等.p21和CyclinD1在肺癌安排中的表达及相互联系[J].徐州医学院学报，2003，23（5）：395-398.

[5] 王凤玮，朱思伟，姚嫱，等.KLF6基因在前列腺癌中骤变的研讨[J].中华肿瘤防治杂志，2007，14（20）：1559-1562.

[6] 李霞，周宇.核转录因子KLF6在肝纤维化和肝癌发病中的效果研讨开展[J].有用肝脏病杂志，2009，12（5）：396-399.

[7] GehranRC，DAstolfoDS，PrietoC，etal.GenomicorganizationandfunctionalanalysisoftheGeneencodingtheKruppel-liketranscriptionfactorKLF6[J].BiochimBiophysActa，2005，1730（2）：137-146.

[8] TarabishR，ZahediK，MishraJ，etal.InductionofZf9inthekidneyfollowingearlyischemia／reperfusion[J].KidneyInt，2005，68（4）：1511-1519.

[9] SirachE，BureauC，PeronJM，etal.KLF6transcriptionfactorprotectshepatocellularcarcinoma-derivedcellsfromapoptosis[J].CellDeathDiffer，2007，14（6）：1202-1210.

（收稿日期：2012-07-13 本文修改：林利利）