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钟伟+区少兰+韩蕊+刘裔军

【摘要】 意图 评论缓慢心力衰竭（CHF）患者血清致伤血管内皮细胞（VEC）危害的病理状况及黄芪注射液的维护干涉机制。办法 32例CHF患者作为CHF组， 同期在本院体检健康者40例作为正常对照组， 取对数生长期人脐静脉内皮细胞， 培育接种后分为A、B、C、D、E组五组， 持续培育24 h

后A～D组参加含15%CHF患者血清的培育基进行危害造模， E组参加含15%健康人血清的培育基培育， 别离检测各细胞、因子水平。成果 A～D组经凝胶电泳处理后可得到典型头尾散布彗星图画， 尾长、彗星长、尾距与E组比较， 差异均具有统计学含义 （t=6.650、8.332、15.765， P<0.05） ， 标明DNA有危害。E组处理后所得到的彗星图画无典型头尾散布特色， 标明DNA无危害。A～D组光密度（OD）值低于E组， 循环内皮细胞（CEC）、血管内假血友病因子（vWF）及可溶性血栓调理蛋白（sTM）值均高于E组， 差异均具有统计学含义 （t=33.828、8.040、8.978、6.640， P<0.05）。B、C组OD值高于A组， CEC、vWF及sTM值均低于A组， 差异均具有统计学含义 （P<0.05）。定论 CHF患者血清可致伤血管内皮细胞， 形成DNA危害， 黄芪注射液对致伤血管内皮细胞有维护和改进效果。

【关键词】 缓慢心力衰竭；血管内皮细胞；黄芪注射液；DNA危害

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.24.117

本次研讨选取2013年12月～2016年12月在黄埔中医院心血管内科病房住院的32例CHF患者， 使用其血清及血管内皮细胞株树立血管内皮细胞危害的体外模型， 现将成果陈述如下。

1 材料与办法

1. 1 一般材料 选取2013年12月～2016年12月在黄埔中医院心血管内科病房住院的32例CHF患者， 将其归为CHF组， 其中男18例， 女14例， 均匀年龄（69.08±3.22）岁， 均匀病程（6.23±2.10）个月。选取同期在本院体检健康者40例作为正常对照组。

1. 2 办法

1. 2. 1 试验预备 ①搜集两组血清。②制造条件培育基。③制备黄芪注射液。④内皮细胞传代培育。

1. 2. 2 试验操作 取对数生长期人脐静脉内皮细胞， 培育接种后分为A、B、C、D、E组五组， 持续培育24 h后A～D组参加含15%CHF患者血清的培育基进行危害造模， E组参加含15%健康人血清的培育基培育。以上条件培育基效果24 h后， A～C组别离参加10、20、40 ?g/ml的黄芪注射液， D、E组各自参加等量的DMEM培育基， 培育24 h后进行目标的检测。将条件培育基干涉后的A～E组细胞用PBS液洗刷3次， 用培育基制成细胞悬液进行离心处理5 min， 取上清液， 以琼脂糖PBS凝胶固化处理后浸入细胞裂解液， 高pH电泳缓冲液浸泡30 min， <15℃下电泳30 min， 荧光显微镜下调查DNA危害状况。以上进程需注意动作轻、细防止形成人为细胞DNA危害， 此外细胞处理及电泳进程需在暗室内进行防止形成试验以外危害。

1. 3 调查目标 调查各组血管内皮细胞DNA危害状况（尾长、彗星长、尾距）， 并在黄芪注射液干涉前后别离进行以下检测：①MTT法检测细胞活性， 检测成果用OD值标明；②等密度梯度离心法检测CEC数；③lurell火箭电泳法测定血管内vWF浓度；④酶联免疫吸附试验（ELISA） 法测定sTM浓度。

1. 4 统计学办法 选用SPSS19.0统计学软件进行统计分析。计量材料以均数±标准差（ x-±s）标明， 选用t查验。P<0.05标明差异具有统计学含义。

2 成果

2. 1 A～D组和E组血管内皮细胞DNA危害状况 A～D组经凝胶电泳处理后可得到典型头尾散布彗星图画， 尾长、彗星长、尾距与E组比较， 差异均具有统计学含义 （t=6.650、8.332、15.765， P<0.05） ， 标明DNA有危害。E组处理后所得到的彗星图画无典型头尾散布特色， 标明DNA无危害。见表1。

2. 2 A～D组和E组在黄芪注射液干涉前相关目标检测成果比较 A～D组 OD值低于E組， CEC、vWF及sTM值均高于E组， 差异均具有统计学含义 （t=33.828、8.040、8.978、6.640， P<0.05）。见表2。

2. 3 A～C组在黄芪注射液干涉后相关目标检测成果比较 B、C组OD值高于A组， CEC、vWF及sTM值均低于A组， 差异均具有统计学含义 （P<0.05）。见表3。

3 评论

血管内皮细胞危害以内皮依赖性舒缩反响平衡损坏为主要特征， 机体血流动力学受此影响逐步恶化[1， 2]， 最近研讨公认， 点评血管内皮细胞危害程度的代表性目标有CEC、vWF和sTM。现有药物在医治CHF方面均存在较大的局限性， 寻觅新的高效药物势在必行， 西药研发周期长毒副效果大， 因而研讨者将目光转向中药， 尽管人们现已意识到黄芪的惊人效果， 可是现有研讨多会集在黄芪注射液对排泄功用的影响方面， 有关细胞内部结构改变研讨相对较少[3-7]， 因而本次研讨经过制造体外血管内皮细胞危害模型来深入研讨黄芪注射液的干涉效果。标明CHF患者血清可致伤血管内皮细胞， 形成DNA危害， 并且黄芪注射液对致伤血管内皮细胞有维护和改进效果， 该项研讨必将带来血管内皮细胞药物研发的打破和立异开展。

参考文献

[1] 曹雪梅， 付晓荣， 陈俊芬， 等. 黄芪甲苷对自发性高血压大鼠血管内皮功用的维护效果. 医学临床研讨， 2016， 33（6）：1075-1077.

[2] 周春刚， 陆曙， 王书乐， 等. 黄芪与当归不同配比水提液对ANGⅡ诱导大鼠动脉内皮细胞凋亡的试验调查. 中成药， 2013， 35（10）：2253-2256.

[3] 罗映松， 罗庆昌. 缓慢心力衰竭患者兼并睡觉呼吸紊乱的发作状况及胰岛素、内皮素水平改变. 心血管病防治常识（下半月）， 2013， 5（11）：75-77.

[4] 钟伟， 韩蕊， 区少兰， 等. 缓慢心衰患者血管内皮细胞体外危害模型的研讨. 中西医结合心血管病电子杂志， 2014， 2（8）：11.

[5] 彭环庆， 彭志允， 谢维宁， 等. 根据血管内皮细胞危害模型的丹参酮ⅡA医治缓慢心力衰竭的机制研讨. 浙江临床医学， 2015（3）：349-351.

[6] 于亮， 段绍斌， 居来提， 等. 黄芪注射液对两次冲击大鼠致多器官功用障碍综合征中心肌和血管内皮细胞危害的影响. 我国全科医学， 2010， 13（9）：967-970.

[7] 段绍斌， 于亮， 刘郁， 等. 黄芪注射液对多脏器功用障碍综合征模型大鼠血管内皮细胞危害的影响. 我国现代医学杂志， 2012， 22（1）：5-8.

[收稿日期：2017-04-18]endprint