女膀胱癌的前期症状 KLF4及MMP2在膀胱癌安排中的表达及相互关系
卢湧湧 陶利萍 叶挺宇
[摘要] 意图 研讨Krüppel样因子4（Krüppel-like factor 4，KLF4）及基质金属蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2，MMP2）在膀胱癌安排内的表达，剖析两者间的相互联系，并评论其或许机制及临床含义。 办法 搜集2012年1月～2014年12月间115例膀胱癌患者的临床材料及肿瘤特征，选用免疫组化法检测膀胱癌安排内KLF4及MMP2的表达，剖析两者之间的联系。 成果 KLF4在膀胱癌安排中表达明显下降，与患者年纪、肿瘤滋润深度、安排学类型、淋巴结搬运明显相关，与性别、肿瘤巨细、数目无关。进一步剖析发现KLF4及MMP2在癌安排中的表达存在明显负相关。 定论 KLF4的低表达与膀胱癌的侵袭性增强密切相关，KLF4或许经过MMP2通路按捺了膀胱癌的侵袭性。
[要害词] 膀胱癌；侵袭性；KLF4；MMP2
[中图分类号] R737.14 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）07-0001-04
[Abstract] Objective To investigate the expression of Krüppel-like factor 4（KLF4） and matrix metalloproteinase 2 （MMP2） in bladder cancer tissues， to analyze the correlations between the two， and to explore its possible mechanism and clinical significance. Methods The clinical data and tumor characteristics of 115 bladder cancer patients from January 2012 to December 2014 were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of KLF4 and MMP2 in bladder cancer tissues. The correlations between the two were analyzed. Results The expression of KLF4 was significantly lower in bladder cancer tissues， significantly correlated with patient's age， tumor invasion depth， histological type， and lymph node metastasis， but not correlated with gender， tumor size and number. Further analysis found that there was significant negative correlation between the expression of KLF4 and MMP2 in cancer tissues. Conclusion The low expression of KLF4 is closely correlated to the enhanced invasiveness of bladder cancer. KLF4 may inhibit the invasiveness of bladder cancer through the MMP2 pathway.
[Key words] Bladder cancer； Invasiveness； KLF4； MMP2
膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，术后复发率高，其间肌滋润性膀胱癌在接受了手术、放疗、化疗等归纳医治后，大都患者终究仍死于膀胱癌搬运，因而研讨膀胱癌的侵袭性是改进膀胱癌预后的要害[1，2]。Krüppel样因子4（Krüppel-like factor 4，KLF4）是一种进化保存的核转录因子，在细胞的成长、增殖、分解等过程中起重要效果，KLF4与多种肿瘤相关[3]。因而咱们研讨KLF4及基质金属蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2，MMP2）在膀胱癌安排内的表达，剖析两者间的相互联系，并评论其或许机制及临床含义。
1 材料与办法
1.1 一般材料
搜集我院2012年1月～2014年12月间确诊的膀胱癌患者115例，年纪39～81岁，均匀63.4岁，男85例，女30例。归入规范：术后病理确诊为膀胱移行上皮癌。扫除规范：①兼并其他膀胱疾病史；②兼并其他肿瘤病史；③兼并其他或许影响研讨成果的疾病。一起搜集膀胱良性病变患者34例，年纪44～75岁，均匀61.3岁，男32例，女12例，以膀胱远离病灶3 cm以上膀胱黏膜安排为正常膀胱黏膜对照组。两组间年纪、性别差异无计算学含义（P>0.05），具有可比性。
1.2 办法
將膀胱癌患者癌安排蜡块或正常膀胱黏膜安排蜡块打孔取样树立安排芯片，SP法免疫组化染色，IHS法半定量测定KLF4 及MMP2的表达状况。依据患者临床材料，断定肿瘤巨细、数目、是否淋巴结搬运，并依照世界抗癌联盟第7版TNM分期法进行分期，按WHO世界肿瘤安排学分类（2004）进行安排学分级。
SP法免疫组化染色详细流程：安排芯片蜡块进行切片（4 μm/片），惯例脱蜡水化，胃蛋白酶溶液消化，EDTA抗原液修正，一抗孵育过夜（4℃），二抗（50 μL，带生物素符号）孵育20～30 min，参加卵白素后室温下孵育，断定显色当令停止。IHS法半定量剖析：①染色强度，以大都细胞出现的染色强弱计分（计为a）：无明显上色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；②阳性细胞率，即5个视界（每400×高倍视界计数100个此类细胞）的阳性细胞的均匀数（计为b）：1%～10%计1分，11%～50%计2分，51%～75%计3分，>75%计4分；③a×b乘积为IHS评分，IHS评分≤3分为阴性，>3为阳性，其间≤6分为低表达，>6分为高表达。
1.3 计算学办法
选用SPSS 22.0计算学软件，两组間比较选用χ2查验，相关性检测选用Spearman相关性剖析，P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 膀胱癌安排和正常膀胱黏膜安排中KLF4与MMP2的表达
115例膀胱癌患者中63例表达KLF4阴性（54.78%），52例表达KLF4阳性（45.22%），其间KLF4低表达41例（35.65%），高表达11例（9.57%）；34例正常膀胱黏膜安排中KLF4表达均阳性，其间KLF4低表达15例（44.12%），高表达19例（55.88%）。计算标明癌安排内KLF4的表达明显低于正常膀胱黏膜（P<0.001）。而115例膀胱癌患者中80例表达MMP2阳性（69.57%），其间MMP2低表达39例（33.91%），高表达41例（35.65%），MMP2阴性35例（30.43%）。34例正常膀胱黏膜安排中MMP2表达阴性21例（61.76%），阳性13例（38.24%），且都为MMP2低表达者。计算标明癌安排内MMP2的表达明显高于正常膀胱黏膜（P<0.01）。见表1。
2.2 KLF4、MMP2的表达与临床病理特征的联系
膀胱癌安排中KLF4的表达与患者年纪、肿瘤滋润深度、安排学类型、淋巴结搬运明显相关，与患者性别、肿瘤巨细、肿瘤数目无关。膀胱癌患者中年纪≥60岁、肿瘤滋润性高（T2～T4）、肿瘤分解程度低（高等级）、有淋巴结搬运的患者，较年纪<60岁、肿瘤滋润性低（Ta～T1）、肿瘤分解程度高（低恶/低等级）、无淋巴结搬运患者的KLF4表达低，具有明显性差异（P<0.05）。KLF4的表达与患者年纪、肿瘤的滋润深度、安排学类型、淋巴结搬运之间的Spearman相联系数分别为-0.243、-0.268、-0.307、-0.250（P<0.05）。
膀胱癌安排中MMP2的表达与肿瘤滋润深度、安排学类型、淋巴结搬运明显相关，与患者性别、年纪、肿瘤巨细、肿瘤数目无关。膀胱癌患者中肿瘤滋润性高（T2～T4）、肿瘤分解程度低（高等级）、有淋巴结搬运的患者，较肿瘤滋润性低（Ta～T1）、肿瘤分解程度高（低恶/低等级）、无淋巴结搬运患者的MMP2表达高，具有明显性差异（P<0.05）。MMP2的表达与肿瘤的滋润深度、安排学类型、淋巴结搬运之间的Spearman相联系数分别为0.280、0.283、0.263。见表2。
2.3膀胱癌中KLF4与MMP2表达的相关性
在膀胱癌安排中，KLF4的阴性表达与MMP2的阳性表达之间存在高度偶然。63例KLF4表达阴性的患者中，34例有MMP2的高表达，17例MMP2低表达，仅有12例MMP2表达阴性。相关性剖析发现，在膀胱癌患者癌安排中，KLF4与MMP2的表达之间存在明显负相关性，Spearman相联系数为-0.466（P<0.001）。见表3。
3评论
KLF4亦称为胃肠富集Krüppel样因子（GKLF），是KLFs宗族的重要成员，KLF4在多种器官与安排中表达，包含皮肤、睾丸、乳腺、膀胱等，且KLF4的表达与多种肿瘤相关[3]，在肺癌、食管癌、肝癌、肾癌、胃癌及结直肠癌中KLF4表达下降或缺失，KLF4起到按捺肿瘤的效果[4-8]，而在乳腺导管癌、头颈部及皮肤鳞状细胞癌中KLF4表达升高，KLF4起到促进肿瘤的效果[9-11]，这些研讨标明KLF4既可作为致癌基因也可作为抑癌基因，其效果成果取决于其所调控的基因及其地点肿瘤细胞的染色质环境。
本研讨检测了KLF4在膀胱癌安排中的表达，成果发现相对于正常膀胱黏膜安排，膀胱癌安排中的KLF4的表达明显下降，与李凡等[12]的研讨检测膀胱癌安排内KLF4 mRNA的成果相似。本研讨还进一步剖析了KLF4表达量与膀胱癌临床特征的联系，咱们的研讨成果发现膀胱癌患者中年纪≥60岁、肿瘤滋润性高（T2～T4）、肿瘤分解程度低（高等级）、有淋巴结搬运的患者KLF4表达明显下降，提示KLF4表达的下降与膀胱癌的侵袭性增强有关，与KLF4在肺癌、食管癌、肝癌、肾癌及胃肠道肿瘤中的表达状况相似[4-8]。在胃癌、结直肠癌及髓母细胞瘤中，启动子甲基化可导致KLF4表达下降[4，13-15]，而在肝癌、肺癌、肾细胞癌亦存在KLF4启动子的超甲基化现象[6-7]。经过甲基搬运酶按捺剂按捺甲基化后，可恢复KLF4的表达，一起按捺结直肠癌和胃癌细胞系在体外和体内致瘤性[13，16][Restoration 27，38]，提示KLF4启动子的甲基化是KLF4表达下降的重要原因。别的，KLF4基因杂合性缺失（LOH）和位点骤变也或许导致KLF4表达的下降[4，13-15]，但有关膀胱癌中KLF4表达的下降机制现在尚不清晰，仍需求进一步研讨。
MMP2是一种需求金属离子作为辅助因子的蛋白酶，可以降解基底膜的主要成分——Ⅳ型胶原，使肿瘤细胞可以打破基底膜，终究构成搬运灶[17]。MMP2与多种肿瘤包含膀胱癌密切相关，MMP2可以促进膀胱癌细胞的滋润和搬运，MMP2高表达与膀胱癌的不良预后密切相关，因而MMP2在膀胱癌的侵袭中起着要害的效果[18，19]。在本研讨中咱们一起检测了MMP2的表达，成果标明在膀胱癌安排中，MMP2的高表达与膀胱癌侵袭性相关，而且MMP2的表达与KLF4的表达呈明显负相关。已有的研讨显现，MMP2 启动子区域有多个KLF4结合位点，KLF4 可以经过直接结合MMP2的启动子区域，按捺其活性，下降其mRNA及蛋白的表达[20，21]。别的，KLF4 可以按捺EMT相关转录因子Snail 等表达，而后者可以明显添加MMP2的表达，提示KLF4 可以直接按捺MMP2的表达[22-23]。因而，咱们估测KLF4经过直接或直接的方法按捺MMP2的转录然后按捺了膀胱癌细胞的侵袭性，但仍需求进一步研讨证明。
總之，咱们的研讨发现膀胱癌安排中KLF4的表达下降，并与膀胱癌的侵袭性增强有关，与癌安排中MMP2的表达到负相关，KLF4经过或许按捺MMP2的转录然后按捺了膀胱癌细胞的侵袭性，KLF4或许是清晰膀胱癌侵袭性的潜在生物学目标。
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（收稿日期：2017-12-21）