结直肠癌肝搬运 血清TTR的表达与结直肠癌搬运的相关性研讨
徐静 张洪柱 徐玉芬
[摘要] 意图 研讨剖析结直肠癌搬运与血清转甲状腺素蛋白（TTR）表达之间的相关性。 办法 挑选2014年1月～2015年12月间我院收治的23例结直肠癌患者进行本次研讨，收集其血液样本。依据是否呈现了远处搬运进行分组，将其间无远处搬运的样本设为对照组，共11例；发作远处搬运的样本设为调查组，共12例。一切样本都选用蛋白免疫印迹办法对TTR 表达进行半定量剖析。 成果 经过核算两组样本的光密度比值，成果显现无远处搬运的结直肠癌患者血清样本（对照组）中TTR的表达量更高，显着高于发作远处搬运患者（调查组）血清TTR表达量，差异有核算学含义（P=0.023<0.05）。 结论 结直肠癌患者血清TTR的表达水平与肿瘤是否发作搬运有相关性，发作远处搬运结直肠癌患者血清TTR表达量显着更低，在往后对结直肠癌滋润与搬运水平的评价中，TTR可作为一种肿瘤标志物。
[要害词] 血清TTR；结直肠癌；相关性；表达水平
[中图分类号] R735.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）30-0016-04
转甲状腺素蛋白（TTR），也被称为“前白蛋白”，英文简称PA，是由4个相同亚基一起构成的一种四聚体，每个亚基由127个氨基酸组成，其首要功用是以转运蛋白的身份参加转运甲状腺素、视黄醇，一起TTR还可以表现体内蛋白的组成状况，当体内蛋白丢掉，呈现应激状态时，TTR水平会敏捷下降，反之则增高[1]。因为TTR是一种甲状腺素与视黄醇的转运蛋白，所以其表达状况可表现机体的养分及某些病理改动，可作为猜测疾病、判别疾病预后的一项目标[2]。为此，我院选取2014年1月～2015年12月间所收治的结直肠癌住院患者进行研讨，剖析发作远处搬运与未发作远处搬运患者TTR的表达状况，现将成果报导如下。
1 材料与办法
1.1 一般材料
归入我院2014年1月～2015年12月结直肠癌住院患者23例为研讨目标，一切患者均经病理确诊，经查看均未发现其他恶性肿瘤与甲状腺代谢疾病。收集血清样本，其间11例患者未呈现远处搬运，12例患者伴有远处搬运（均归于肝或许胃搬运），患者年纪最小48岁，最大79岁，均匀（69.1±3.1）岁，其间男12例，女11例。悉数患者于术前收集血清样本，术前均未进行放射医治、化疗与免疫医治，悉数患者临床材料均完全。血清样本均置于-80℃保存，选用全自动生化仪对血清蛋白浓度进行检测。
1.2办法
对23例患者血清选用蛋白免疫印迹半定量检测。①汲取30 μL血清标本，选用SDS-PAGE，变性温度设置为100℃，处理时刻设置为18 min。②电泳浓缩胶电压设置为60 V，别离胶电压设置为120 V。90 min半干电转仪转膜，选用关闭液进行关闭，关闭液选用5%脱脂奶粉+PBST；关闭一抗，关闭液选用抗体稀释剂，TTR抗体：关闭液=1∶1000，β-actin抗体：关闭液=1∶400，在4℃下过夜；PBST：0.05% Tween+PBS，每20分钟对膜进行一次清洗，共清洗3次。关闭二抗，TTR抗体与β-actin抗体别离选用山羊抗兔（LgG H+L）辣根过氧化物酶抗体与山羊抗小鼠（LgG H+L）辣根过氧化物酶抗体，其间TTR抗体：关闭液=1∶1500，β-actin抗体：关闭液=1∶2000，将其放置在温室摇床孵育，时刻设置为90 min，PBST每15分钟进行一次洗膜，共进行3次，选用DBA显色液对膜显色5 min[3]。然后选用剖析软件Image J进行条带光密度的核算和剖析。
1.3核算学处理
选用SPSS 21.0核算学软件对取得的计量材料、计数材料进行核算处理，伴有远处搬运组与未发作远处搬运组的计量材料选用t查验，计数材料选用χ2查验，显着水平95%，P<0.05为差异有核算学含义。
2 成果
2.1 有远处搬运与无远处搬运组患者血清TTR的表达成果比较
收集11例未发作远处搬运的结直肠癌患者血清，试验以5或6例为一组，选用Western blotting杂交试验对血清中的TTR 进行测定，试验以β-actin 为内参，成果见图1。相同办法，运用杂交试验半定量剖析12例发作远处搬运结直肠癌患者血清中TTR表达，成果见图2。
2.2远处搬运与无远处搬运组结直肠癌患者血清TTR半定量成果比较
比较远处搬运与无远处搬运组结直肠癌患者血清TTR 与β-actin光密度值，β-actin 为参阅规范，比照剖析两类患者血清TTR的表达量相对改变，一起核算TTR 的改变比较照率。核算学剖析显现，比较发作远处搬运结直肠癌患者（调查组）与未呈现远处搬运结直肠癌患者（对照组）血清中TTR 的表达量，前者为（3.6±0.8），后者为（11.4±3.5），发作远处搬运结直肠癌患者血清TTR表达量显着更低，二者差异有核算学含义（t=7.524，P=0.023<0.05）。
3 评论
转甲状腺素蛋白（TTR）也被称为前白蛋白（PA），组成于肝脏与头绪丛，担任转运人体内甲状腺素、视黄醇蛋白并参加维生素A 的代谢。甲状腺结合前清蛋白，归于血浆运送蛋白，首要担任转运维生素A与蛋白和甲状腺素结合。甲状腺结合前清蛋白首要于肝脏、眼睛和头绪膜中发作，在人体血浆及脑脊髓液中有散布[4]。在pH=7.2的生理条件与环境下，TTR是一种安稳的蛋白质，其根本结构及其功用均是安稳的[5]。当TTR发作分化成为单体后，将会导致淀粉变性病[6]。与正常人血清中TTR表达量比较，恶性肿瘤患者血清中的TTR表达量往往表现为低表达。相关研讨成果表明，与正常人比较，在肝癌、肺癌患者中TTR表达呈下降态势[7-8]，所以，在恶性肿瘤中TTR 基因具有抑癌基因的效果。经过查阅很多的文献材料，有关恶性肿瘤TTR表达的研讨报导指出，在恶性肿瘤的发作与展开的过程中，TTR起到了肿瘤按捺物的效果，对肿瘤有按捺效果[9-10]。国外相关研讨报导指出，经过比照结直肠癌患者与正常人的血清蛋白差异点，成果显现二者在TTR 的表达上存在显着的差异，但比照CEA阴性与阳性患者血清蛋白差异点，成果显现并无显着性差异[11-12]。在结直肠癌的确诊中，TTR可作为标志物，研讨显现，血清蛋白优势愈加显着。当时在恶性肿瘤的分期和分级中，有关TTR的报导较少，有关研讨指出结直肠癌患者呈现淋巴搬运的与未呈现淋巴搬运的TTR表达量并没有显着差异[13-14]。上述研讨成果显现，TTR基因具有按捺癌癥的效果，而结直肠癌的展开与TTR表达存在必定的联络，而且不同分期中TTR蛋白的表达存在显着的差异，预示着TTR的确诊价值。
本研讨挑选2014年1月～2015年12月我院所收治的结直肠癌患者作为研讨目标，试验成果表明，比照没有呈现远处搬运结肠癌患者血清中的TTR表达，呈现远处搬运结直肠癌患者血清中TTR的表达呈显着下降态势，比照剖析两类患者血清TTR的表达量相对改变，核算TTR 的改变比较照率。远处搬运结直肠癌患者TTR 的改变比较照率为（3.6±0.8），与未呈现远处搬运结直肠癌患者TTR 的改变比较照率（11.4±3.5）比较显着更低，此成果提示对TTR表达水平的研讨可作为一种重要的标志物来揣度结直肠癌的发作与展开[15-17]。
TTR参加到甲状腺素、视黄醇的转运傍边，意图在于确保体内甲状腺素、视黄醇以及结合蛋白水平处于正常水平[18]。TTR有很多种突变体，突变体的存在会形成多种疾病发作，其与细胞自身的变异、疾病的发作与展开严密相关。现阶段大部分恶性肿瘤的医治的要害就在于前期确诊，这对肿瘤研讨起着巨大的效果。结合国内外相关研讨，建议TTR检测可对多种恶性肿瘤进行猜测，因而被认定是一种杰出的标志物，用于恶性肿瘤的确诊具有很高的价值[19]。当时其他肿瘤相关研讨并未提及恶性肿瘤在TTR基因结构上存在反常，用于体外转染癌细胞是否可以按捺其成长并无结论，且对TTR详细影响肿瘤的机制也尚待研讨[20-21]。当时针对TTR与肿瘤发作、展开联系的研讨样本数量并不多，成果也有待进一步的研讨，经过对TTR及其突变体在肿瘤中的效果机制研讨，可对该基因多态性病因学更好地做出论述[22]。因为TTR存在部分突变体，当这些突变体发作改变时将可能对确诊的精确性形成必定的影响，形成成果不精确，这也是需求进一步讨论的问题。当时测定整体TTR含量可选用电流测定，一起酶联免疫法测定TTR技能也逐步得到使用推行，测定技能变得愈加老练，而测定成果也愈加安稳，特异性也显着进步，因而进一步展开对TTR表达的研讨可使临床肿瘤测定成果安稳性和特异性也进一步进步，信任深入展开TTR 关于临床肿瘤的确诊具有非常重要的含义和展开前景。
综上所述，结直肠癌患者血清TTR的表达水平与肿瘤是否发作搬运有相关性，发作远处搬运结直肠癌患者血清TTR表达量显着更低，在往后对结直肠癌滋润与搬运水平的评价中，TTR可作为一种肿瘤标志物。
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（收稿日期：2016-06-24）