胃癌7901 吡格列酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的研讨
曹纪源++陈健
[摘要] 意图 研讨吡格列酮（PGZ）对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。办法 设不同浓度 PGZ 组 （0.01、0.1、1.0、10.0、50.0、100.0 mol/L）、不加药为对照组，运用MTT 法检测PGZ对胃癌细胞SGC-7901的增殖按捺效果。 成果 与对照组比较，不同浓度的PGZ （0.1、1.0、10.0、50.0、 100.0mol/L）经 12h、24h、48h、72h 的效果后，不同浓度胃癌细胞 SGC-7901 吸光度均有显着性差异（P<0.05）。除0.01 mol/L PGZ对胃癌细胞SGC-7901 增殖没有显着的按捺效果（P>0.05），其它各剂量组对胃癌细胞SGC-7901增殖有显着的按捺效果，不同效果时刻比较有显着性差异（P<0.05）。定论 PGZ能够显着的按捺胃癌细胞SGC-7901的成长，且存在剂量-时刻的联系。
[关键词] PGZ；胃癌细胞株；SGC-7901；增殖；MTT
[中图分类号] R735.2[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2014）18-0004-04
Effect study of anti-proliferation on pioglitazone of human gastric cancer SGC-7901 cells
CAO Jiyuan1 CHEN Jian2
1.Pharmacy Department， Ningbo Beilun Xiaogang Hospital，Ningbo 315801，China；2.Zhejiang University，Hangzhou 310027，China
[Abstract] Objective To investigate the effect of anti-proliferation on pioglitazone of human gastric cancer SGC-7901 cells. Methods Different concentrations of PGZ groups （0.01，0.1，1.0，10.0，50.0 and 100.0 mol/L） were set up， control group were without drugs. The anti-proliferation effect of PGZ on human gastric cancer SGC-7901 cells were detected by MTT method. Results Compared with the control group，the OD value of gastric cancer SGC-7901 cells through different concentrations PGZ（0.1，1.0，10.0，50.0 and 100.0 mol/L） incubating 12，24，48，72 h were higher，the differences were significant（P<0.05）. The concentration of 0.01 mol/L PGZ had no significant inhibition on the proliferation of gastric cancer SGC-7901 cells（P>0.05），the other dose groups had significant effect of inhibition on the proliferation of gastric cancer SGC-7901 cells，compared with the control group，the differences were significant（P<0.05）. Conclusion The PGZ is capable of inhibiting proliferation of human gastric cancer SGC-7901 cells in vitro significantly， and the result of inhibiting proliferation rate shows a significant dose-time relationship.
[Key words] Pioglitazone; Human gastric cancer; SGC-7901;Proliferation; MTT胃癌是临床常见恶性肿瘤之一，是我国癌症发病和逝世的首位恶性肿瘤，近年来胃癌的发病率和逝世率呈逐年上升的趋势，己成为严重威胁我国公民生命健康的严重疾病。我国防治胃癌的局势非常严峻。现在有关胃癌的发作和开展的机制尚不非常淸楚。手术切除、放化疗以及免疫疗法是其首要的医治办法，但传统化疗药物的客观反响率仅为24%~40%[1-2]，寻觅医治胃癌的药物和医治办法是现在抗肿瘤研讨亟待解决的关键问题。过氧化物酶增殖因子活化受体 γ（peroxisome proliferators activated receptor γ，PPAR γ）归于配体依靠性核激 素受体，它存在于脂肪安排和免疫系统中，它对脂肪构成以及免疫反响发挥着重要的效果。近年来的研讨发现[3]，PPAR γ在脂肪肉瘤、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、胃 癌等恶性肿瘤中均有表达。与PPAR-γ相关的配体如吡格列酮（pioglitazone， PGZ）、罗格 列酮（ciglitazone）、环格列酮（ciglitazone）等作为一类抗糖尿病新药在临床上已得到运用[4]。而PGZ 是PPAR-γ的高亲和力配体，能竞争性与PPAR-γ结合，具有潜在的抗肿瘤效果。因而，2011~2013年本研讨经过运用体外试验评论PGZ对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响，然后为其在临床上医治胃癌供给新的医治办法及理论依据。
1 资料与办法
1.1资料
人胃癌细胞SGC-7901由上海细胞资源中心供给。胰蛋白酶系、四甲基偶氮哇蓝（MTT）， RPMI-1640培育液（内含0.1%青霉素、链霉素）、二甲基亚枫（DMSO）均为美国Solarbio公司产品，重生牛血清购自杭州四季青生物工程资料有限公司，碘化丙啶（PI） 购于南京晶美生物技能公司，PBS缓冲液（1X）购自北京索莱宝科技有限公司。PGZ为中美华东制药公司产品，用DMSO配成10～20 μmol/L原液，-20℃冻存，运用时用细胞培育液稀释至终浓度，培育液中DMSO终浓度< 0.1%。
1.2仪器
SW-CJ-IBU超净工作台（苏净集团姑苏安泰空气技能有限公司），MCO-175 CO2 培育箱（日本三洋产品〉，HT6100酶标剖析仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司产品）， CKX-31倒罝相差显微镜（日本OlymPys公司产品），低温台式离心机（Eppendorf公司）， Bio-RAD550全主动酶标读数仪（美国伯乐公司）等。
1.3试验办法
将人胃癌细胞SGC-7901惯例培育于含10%重生牛血淸的RPM1-1640培育液中， 罝37℃、5%的CO2培育箱中培育，取对数成长期的细胞用于本试验。将对数成长期的人胃癌细胞SGC-7901用0.25%胰酶消化后配制成浓度为2.6×103的细胞液，接种于96 孔培育板中，贴壁24h后分别加0.01、0.1、1.0、10.0、50.0、100.0 mol/L的PGZ，未加药物为对照组。对照组参加等体积细胞液，每个浓度设3复孔，持续培育12、24、48、72h后每孔加 入0.5% 20 μL MTT，持续培育4 h，弃去孔内上清液，每孔参加150μL DMSO，振动混匀后， 在主动酶标检测仪测定每孔在570 nm处的吸光度（OD），依据OD值断定药物对细胞增殖的影响。核算细胞成长按捺率（IR）[5]，IR=（1-试验组OD值/对照组OD值）×100%，并核算IC50。
1.4 统计学办法
单要素方差剖析比较各组间差异，成果选用均数±标准差（x±s）标明，运用统计学软件包SPSS21.0剖析处理上述数据，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1各组效果不一起刻后胃癌细胞SGC-7901吸光度比较
与对照组比较，不同浓度PGZ效果12 h、24 h、48 h、72 h后癌细胞SGC-7901吸光度均表现为下降的趋势，不同浓度的PGZ （0.1、1.0、10.0、50.0、100.0mol/L）经不同的效果时刻后，各组不同浓度胃癌细胞SGC-7901吸光度进行F查验，差异均具有统计学含义（P<0.05）。成果见表1 、封三图2。
2.2各组效果不一起刻后对胃癌细胞SGC-7901增殖按捺的影响
除0.01mol/L PGZ对胃癌细胞SGC-7901增殖没有显着的按捺效果（P>0.05），其它各剂量组对胃癌细胞SGC-7901 增殖有显着的按捺效果，各组不同效果时刻选用F查验，差异均具有统计学含义（P<0.05）。PGZ对胃癌细胞SGC-7901 的增殖按捺效果跟着用药剂量和效果时刻的添加而进步，表现出剂量和时刻的依靠性联系，成果见表2、封三图3。
3评论
3.1 胃癌及其医治概述
胃癌是癌症中比较常见的一种，己构成严重危害人类健康的严重疾病，在我国的发病率居于各类肿瘤首位，引发的逝世人数极多，约占恶性肿瘤逝世人数的25%，且近年来，其检出率出现逐年上升的趋势。现在，临床还没有彻底说明其病因，猜想饮食习惯、环境要素等或许直接而深刻地影响着其发病，一起，HP感染、胃黏膜异性增生等癌前病变也或许直接而深刻地影响着其发病。彻底治愈性切除手术是胃癌首要的医治办法，但由大都患者确诊时己进入晚期而失去了手术医治的最佳时期。对这类患者多以化疗为主。近年来研讨标明PPAR-γ在肿瘤安排中呈上调表达， PPAR-γ配体激活PPAR-γ后具有抗肿瘤、促进细胞分解、诱导细胞凋亡的效果[6~7]。PPAR-γ在胃癌细胞中亦出现高表达，有望成为防备、医治胃癌的新位点。
3.2 PPAR-γ配体在胃癌化疗中的运用
过氧化物酶增殖物激活受体（PPARs）归于核转录因子宗族，激活主体为配体，在储存脂肪及代谢中具有至关重要的效果。PPARs 能够分为三种亚型，即PPAR α、PPAR γ、PPAR e，且三者均具有独立的基因编码。其间PPAR-γ最具脂肪安排特异性，现阶段临床现已对其进行了最为广泛和深化的研讨。PPAR-γ最早发现于脂肪细胞的分解中，并在脂肪细胞的构成、分解等方面发挥着至关重要的效果，其和一些配体作为一类抗糖尿病新药现已在临床得到了日益广泛的运用。PPAR-γ具有较为杂乱的生物学功用，在脂肪糖代谢、炎性反响等生理病理过程中均有参加。PPAR-γ配体依据来历不同可分为两大类：生理性配体和药理性配体。药理性配体包含比格列酮、罗格列酮等在内的噻唑烷二酮类药物。现在的研讨以为，PPAR-γ配体分子进入细胞核后激活PPAR-γ而到达抗肿瘤的意图[8~11]。PPAR-Y配体可经过按捺增殖、诱导细胞凋亡及分解、按捺血管构成和下降肿瘤侵袭才能等不同机制发挥抗肿瘤效果，有望成为肿瘤 化疗的一个新途径[11-15]。最新研讨标明，PPAR-γ在配体激活下能够对许多和癌构成相关的基因进行有用的调理，发挥着活跃的抗肿瘤效果，如抗增殖、对细胞周期进程进行有用的按捺、对终端分解进行有用的诱导等，临床普遍以为其在癌症新药的防备和医治中具有极为宽广的运用远景。
3.3 吡格列酮（PGZ）对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响
吡格列酮归于一种PPAR-γ组成配体噻唑烷二酮类药物，在糖尿病的医治中被作为胰岛素增敏剂运用。可是，很多医学研讨均证明，PPAR-γ配体一方面能够促进患者血糖的极大下降，另一方面还能够经过对肿瘤细胞增殖的按捺及促进肿瘤细胞侵袭才能的下降等将其抗肿瘤的效果充沛发挥出来。全反式维甲酸归于一种维生素A的组成衍生物，其促分解活性及抗增殖效果极为广泛，能够对多种肿瘤细胞的恶性成长进行有用的按捺，归于一种诱导分解剂，在临床极为常用。20世纪80年代今后，全反式维甲酸在白血病等的医治中表现出极为显着的临床效果，在肿瘤的化疗及防备中发挥着至关重要的活跃效果，现在临床现已对其进行了广泛而深化的研讨。在胃癌方面，在对体外培育的SGC-7901细胞进行处理的过程中运用全反式维甲酸能够对细胞的增殖进行切实有用的按捺，并对癌细胞进行有用的诱导，使其转化为正常细胞。维甲酸的首要效果是由其核内受体RAR和RXR介导。大都医学研讨显现，维甲酸或许经过对肿瘤细胞表型的改动及对基因表达的调控来完成一直增殖并诱导分解细胞水平的意图的。PPAR-γ受体结合其配体后，异源二聚体PPAR-γ/RXR在其结合RXR的情况下构成，作为转录因子能够和含有PPAR反响元件的下有意图基因进行有用的结合，然后将其转录调控效果充沛发挥出来，并对意图基因表达进行有用的调理，因而一些医学学者在肿瘤细胞的研讨中有机结合了PPAR-γ配体和RXR配体，发现联合运用二者能够促进其各自抗肿瘤效应的极大强化。
在胃癌SGC-7901细胞株中，咱们联合运用了PPAR-γ配体吡格列酮及RXR配体全反式维甲酸，运用CCK-8法对不同浓度的吡格列酮、全反式维甲酸进行检测，一起对联合运用二者时增殖按捺胃癌SGC-7901细胞株的效应进行有用的检测，并运用RT-PCR办法对胃癌SGC-7901细胞株中PPAP-γ基因的表达和改变进行了检测，此外，MTT是常用的检测肿瘤细胞增殖活性效应的一种办法，该办法具有简洁、快速、所需细胞数较少，人为差错小且较准确，没有放射污染等长处而广泛用于抗癌药物挑选。本研讨选用MTT法调查PGZ对胃癌细胞SGC-7901的成长按捺效果，与对照组比较，不同浓度PGZ效果12 h、24 h、48 h、72 h后癌细胞SGC-7901吸光度均表现为下降的趋势，不同浓度的PGZ （0.1、1.0、10.0、50.0、100.0 mol/L）经不同的效果时刻后，胃癌细胞SGC-7901吸光度与 对照组比较均有显着性差异（P<0.05），标明PGZ对胃癌细胞 SGC-7901具有成长按捺效果，而且呈剂量和时刻依靠联系。除0.01mol/LPGZ对胃癌细胞 SGC-7901增殖没有显着的按捺效果（P>0.05），其它各剂量组对胃癌细胞SGC-07901增殖有显着的按捺效果，与对照组比较均有显着性差异（P<0.05），标明PGZ对胃癌细胞SGC-7901 有较强的体外细胞毒性效果，能够显着的按捺胃癌细胞SGC-7901的成长，且存在剂量-时刻的联系，但有关其切当的机制还有待于进一步深化研讨。
综上所述，PGZ能够显着的按捺胃癌细胞SGC-7901的成长，且存在剂量-时刻的联系。
[参考文献]
[1]邬万新，江悦琴，姜叙诚. Caspase-3和bcl-x_L在胃癌中的表达及含义[J]. 癌症，2011，40（7）：125-126.
[2]朱理辉，张王利. PPARγ激活剂罗格列酮对人胃癌MGC803细胞周期及其PTEN表达的影响[J]. 有用癌症杂志，2012，41（3）：101-102.
[3]胡向阳. 细胞周期调控基因CyclinD_1、p16与肿瘤[J]. 临床与试验病理学杂志，2011，37（4）：96-97.
[4]林显敢，黄开红，谢德荣，等. 进展期胃癌术后腹部内生物热疗联合FOLFOX计划的效果剖析：附68例报导[J]. 南边医科大学学报，2011，27（10）： 1501-1503.
[5]郑海，蒋春舫，陈庆. PPARγ参加调理胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达及临床含义[J]. 临床外科杂志，2011，45（12）：78-79.
[6]程骏，余作黔，韩少良，等. 胃癌安排中PTEN、caspase-3表达与临床病理特征的联系[J]. 温州医学院学报，2012， 35（5）：223-224.
[7]Shaco LR，Sharabi S， Benharroch D，et al.Matrix metallop-roteinases 2 and 9， E-caderin and beta-catenin expression in endometriosis，low-grade endometrial carcinoma and non-neoplastic entopic endometrium[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Bio，2012， 139 （2）： 226-232.
[8]Michalik L， Desvergne B， Wahli W.Peroxisome proliferatorsactivated receptors and cancers complex stories[J]. Nat Rev Cancer，2013，4 （1）： 61-70.
[9]Iyer P， Zekri AR， Hung CW， et al. Concordance of DNA methylation pattern in plasma and tumor DNA of Egyptian hepatocellular carcinoma patients[J]. Exp Mol Pathol, 2013，88 （1）： 107-11.
[10]Zander T，KrausJA， Gramres C， et al. Induction of apoptosis in human and rat glioma by agonists of the nuclear receptor PPAR gamma[J]. J Neurochem， 2012， 81 （5） ：1052-1060.
[11]Kim EJ， Parkk S， Chung SY， et al.Peroxisome proliferators-activated receptor gammga activator 15-deoxy-delta 12 14-prostagl and inJ2inhibits neuroblastama cell growth through induction of apoptosis association with extracellular signal-regulated kinase signal pathway[J]. J Phamracol Exp Ther，2013， 307 （5）：505-517.
[12]Thieringer R， Fenyk-Melody J， Le Garmd CB， et al.Activation of peroxisome proliferator-activated receptor-ydoes not inhibit IL-6 or TNF-alpha responses of macrophages to lipopotysac charidein vitroorin vivo[J]. The Journal of Immunology， 2011，164 （2）：1046-1054.
[13]Del Pulgar TG， Bandres E， Espina C.Differential expression of Racl identifies its target genes and its contribution to progression of colorectal cancer[J]. Int J Biochem Cell Biol，2012，39 （12）： 2289-2302.
[14]Leung WK， Bai AH，Chan VY， et al. Effect of peroxisome proliferator activated receptor gamma ligands on growth andgene expression profiles of gastric cancer cells[J]. Gut，2013， 53 （3） ： 331-338.
[15]Sabichi Anita L，Subbarayan V，Llansa N，et al. Peroxisome pronferator-activated receptory suppresses cyclooxygenase-2 expression in human prostate cells[J]. Cancer Epidemiology Biomarkers&Prevention，2013，13（2）：1704-1709.
（收稿日期：2013-11-28）
[4]林显敢，黄开红，谢德荣，等. 进展期胃癌术后腹部内生物热疗联合FOLFOX计划的效果剖析：附68例报导[J]. 南边医科大学学报，2011，27（10）： 1501-1503.
[5]郑海，蒋春舫，陈庆. PPARγ参加调理胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达及临床含义[J]. 临床外科杂志，2011，45（12）：78-79.
[6]程骏，余作黔，韩少良，等. 胃癌安排中PTEN、caspase-3表达与临床病理特征的联系[J]. 温州医学院学报，2012， 35（5）：223-224.
[7]Shaco LR，Sharabi S， Benharroch D，et al.Matrix metallop-roteinases 2 and 9， E-caderin and beta-catenin expression in endometriosis，low-grade endometrial carcinoma and non-neoplastic entopic endometrium[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Bio，2012， 139 （2）： 226-232.
[8]Michalik L， Desvergne B， Wahli W.Peroxisome proliferatorsactivated receptors and cancers complex stories[J]. Nat Rev Cancer，2013，4 （1）： 61-70.
[9]Iyer P， Zekri AR， Hung CW， et al. Concordance of DNA methylation pattern in plasma and tumor DNA of Egyptian hepatocellular carcinoma patients[J]. Exp Mol Pathol, 2013，88 （1）： 107-11.
[10]Zander T，KrausJA， Gramres C， et al. Induction of apoptosis in human and rat glioma by agonists of the nuclear receptor PPAR gamma[J]. J Neurochem， 2012， 81 （5） ：1052-1060.
[11]Kim EJ， Parkk S， Chung SY， et al.Peroxisome proliferators-activated receptor gammga activator 15-deoxy-delta 12 14-prostagl and inJ2inhibits neuroblastama cell growth through induction of apoptosis association with extracellular signal-regulated kinase signal pathway[J]. J Phamracol Exp Ther，2013， 307 （5）：505-517.
[12]Thieringer R， Fenyk-Melody J， Le Garmd CB， et al.Activation of peroxisome proliferator-activated receptor-ydoes not inhibit IL-6 or TNF-alpha responses of macrophages to lipopotysac charidein vitroorin vivo[J]. The Journal of Immunology， 2011，164 （2）：1046-1054.
[13]Del Pulgar TG， Bandres E， Espina C.Differential expression of Racl identifies its target genes and its contribution to progression of colorectal cancer[J]. Int J Biochem Cell Biol，2012，39 （12）： 2289-2302.
[14]Leung WK， Bai AH，Chan VY， et al. Effect of peroxisome proliferator activated receptor gamma ligands on growth andgene expression profiles of gastric cancer cells[J]. Gut，2013， 53 （3） ： 331-338.
[15]Sabichi Anita L，Subbarayan V，Llansa N，et al. Peroxisome pronferator-activated receptory suppresses cyclooxygenase-2 expression in human prostate cells[J]. Cancer Epidemiology Biomarkers&Prevention，2013，13（2）：1704-1709.
（收稿日期：2013-11-28）
[4]林显敢，黄开红，谢德荣，等. 进展期胃癌术后腹部内生物热疗联合FOLFOX计划的效果剖析：附68例报导[J]. 南边医科大学学报，2011，27（10）： 1501-1503.
[5]郑海，蒋春舫，陈庆. PPARγ参加调理胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达及临床含义[J]. 临床外科杂志，2011，45（12）：78-79.
[6]程骏，余作黔，韩少良，等. 胃癌安排中PTEN、caspase-3表达与临床病理特征的联系[J]. 温州医学院学报，2012， 35（5）：223-224.
[7]Shaco LR，Sharabi S， Benharroch D，et al.Matrix metallop-roteinases 2 and 9， E-caderin and beta-catenin expression in endometriosis，low-grade endometrial carcinoma and non-neoplastic entopic endometrium[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Bio，2012， 139 （2）： 226-232.
[8]Michalik L， Desvergne B， Wahli W.Peroxisome proliferatorsactivated receptors and cancers complex stories[J]. Nat Rev Cancer，2013，4 （1）： 61-70.
[9]Iyer P， Zekri AR， Hung CW， et al. Concordance of DNA methylation pattern in plasma and tumor DNA of Egyptian hepatocellular carcinoma patients[J]. Exp Mol Pathol, 2013，88 （1）： 107-11.
[10]Zander T，KrausJA， Gramres C， et al. Induction of apoptosis in human and rat glioma by agonists of the nuclear receptor PPAR gamma[J]. J Neurochem， 2012， 81 （5） ：1052-1060.
[11]Kim EJ， Parkk S， Chung SY， et al.Peroxisome proliferators-activated receptor gammga activator 15-deoxy-delta 12 14-prostagl and inJ2inhibits neuroblastama cell growth through induction of apoptosis association with extracellular signal-regulated kinase signal pathway[J]. J Phamracol Exp Ther，2013， 307 （5）：505-517.
[12]Thieringer R， Fenyk-Melody J， Le Garmd CB， et al.Activation of peroxisome proliferator-activated receptor-ydoes not inhibit IL-6 or TNF-alpha responses of macrophages to lipopotysac charidein vitroorin vivo[J]. The Journal of Immunology， 2011，164 （2）：1046-1054.
[13]Del Pulgar TG， Bandres E， Espina C.Differential expression of Racl identifies its target genes and its contribution to progression of colorectal cancer[J]. Int J Biochem Cell Biol，2012，39 （12）： 2289-2302.
[14]Leung WK， Bai AH，Chan VY， et al. Effect of peroxisome proliferator activated receptor gamma ligands on growth andgene expression profiles of gastric cancer cells[J]. Gut，2013， 53 （3） ： 331-338.
[15]Sabichi Anita L，Subbarayan V，Llansa N，et al. Peroxisome pronferator-activated receptory suppresses cyclooxygenase-2 expression in human prostate cells[J]. Cancer Epidemiology Biomarkers&Prevention，2013，13（2）：1704-1709.
（收稿日期：2013-11-28）