糖化血红蛋白酶法 酶法测定糖化血红蛋白的使用点评
孙金旗++++++任艳萍++++++巩姣梅
[摘要] 意图 点评酶法测定糖化血红蛋白的可行性。 办法 酶法和离子交换高压液相色谱剖析法（HPLC法）一起检测91例糖尿病患者的糖化血红蛋白，对两组数据进行线性回归剖析。 成果 酶法与离子交换高压液相色谱剖析法的线性规模分别是2.5%～15.5%和3.8%～18.5%，批内精密度分别是1.09%和1.17%，批间精密度分别是2.2%和2.8%，酶法测定糖化血红蛋白的成果与离子交换高压液相色谱剖析法测定糖化血红蛋白的成果相关性杰出，线性方程y=1.0137x-0.072，R2=0.9886。酶法测定糖化血红蛋白成果与HPLC法测定的成果差异无统计学含义（P > 0.05）。 定论 酶法与离子交换高压液相色谱剖析法有杰出的相关性。酶法在全自动生化剖析仪上检测具有用率高、本钱低的长处，适合在临床上推行。
[关键词] 糖化血红蛋白；酶法；离子交换高压液相色谱剖析法
[中图分类号] R446.11 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）09-0080-03
糖化血红蛋白是血液中己糖（主要是葡萄糖）的糖基连接到蛋白质的氨基酸残基而构成的。这是一个缓慢的、不可逆的非酶促反响，与血糖浓度和高血糖存在的时刻相关[1]。继续的高血糖可增加血液中蛋白的糖化份额，蛋白质与葡萄糖结合后可发作变性，构成多器官功用衰竭，这是引起糖尿病（DM）缓慢并发症的一个原因[2，3]。因而，糖化血红蛋白的检测是一个十分重要的查看项目。酶法作为能够在全自动生化剖析仪上检测的办法近年来在试验室中得到推行。本文选用可溯源至IFCC的糖化血红蛋白检测验剂盒，特异地测定源于HbA1c糖化二肽，与HPLC法的测定成果进行比照剖析以断定酶法测定糖化血红蛋白的运用价值。
1 材料与办法
1.1 一般材料
2013年1～6月本院内排泄门诊与住院确诊的糖尿病患者91例，确诊规范契合2010年ADA糖尿病规范化医治攻略[4]。其中男55例，女36例，年纪37～75岁，均匀55.1岁。扫除贫血、低白蛋白血症等影响糖化血红蛋白测定的疾病。空腹静脉抽血2 mL，EDTA-K2抗凝。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 酶法 日立全自动生化剖析仪7600-020，糖化血红蛋白测定试剂盒（二代酶法）、前处理液、校准品、质控品均由积水医疗科技（我国）有限公司供给。
1.2.2 离子交换高压液相色谱剖析法 伯乐D-10糖化血红蛋白检测体系（HPLC法）、糖化血红蛋白检测验剂包及质控品由美国伯乐公司供给。
1.3 办法
1.3.1 酶法 将全血标本离心，离心速度800×g，5 min[5]。汲取25 μL红细胞参加500 μL前处理液，充沛混匀后由日立全自动生化剖析仪进行检测。
1.3.2 离子交换高压液相色谱剖析法 全血混匀后按照伯乐公司供给的操作规程，运用D-10糖化血红蛋白检测体系进行检测。
1.4 统计学处理
选用SPSS 18.0软件对数据进行统计学剖析。酶法和离子交换HPLC法的成果相关性选用线性回归剖析，两组数据比较选用两样本t查验，P < 0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 线性剖析
取一个高值样本稀释成如下份额（表1）：1/10、2/10、3/10、4/10、5/10、6/10、7/10、8/10、9/10、原倍。用两种办法一起检测后成果显现：酶法线性规模是2.5%～15.5%，R2=0.9920；离子交换HPLC法线性规模是3.8%～18.5%，R2=0.9987。
2.2 精密度剖析
酶法和HPLC法分别用各自公司供给的高、低水平的质控品进行精密度测验。同一批剖析运用两种办法测定质控品20次来断定批内精密度；每天测定一次，接连测定20 d来断定批间精密度。经核算得到酶法的批内精密度CV 1.09%，批间精密度CV 2.2%；离子交换HPLC法的批内精密度CV 1.17%，批间精密度CV 2.8%。
2.3 相关性剖析
分别用酶法和HPLC法一起检测91例糖尿病患者的糖化血红蛋白，以酶法为y，以HPLC法为x作线性相关性剖析。线性回归方程y=1.0137x-0.072，R2=0.9886（图1）。酶法测定的糖化血红蛋白成果与HPLC法差异无统计学含义（P>0.05）（表2）。
3 评论
糖尿病是一种由胰岛素排泄缺少或胰岛素反抗或两者一起效果构成的以高血糖为特征的代谢性疾病[6]。糖尿病的缓慢高血糖与各种安排的损害脏器功用紊乱衰竭有关，特别是眼、肾脏、神经、心脏和血管。长时间的高血糖可导致多种并发症的发作，尤其是病程长、病况操控差的糖尿病患者，后期往往会出现感染、糖尿病酮症酸中毒、糖尿病乳酸中毒、血管病变、神经病变[7]。因而，监测糖尿病患者的近期血糖水平尤为重要。糖化血红蛋白作为一个能反映患者2～3个月的血糖均匀水平刚好契合这一要求[8]。2002年美国糖尿病协会已将其作为检测糖尿病血糖操控的“金规范”[9]。糖化血红蛋白是血红蛋白在体内与己糖发作缓慢的非酶促化学反响而构成的较为安稳的化合物，而真正与葡萄糖发作结合的血红蛋白为HbA1c，HbA1c由葡萄糖与HbA的β链缬氨酸残基缩合而成，先构成一种不安稳希夫碱，希夫碱解离或分子重排构成糖化血红蛋白。
现在试验室中检测糖化血红蛋白的常用办法有以下几种：乳胶免疫比浊法、电泳法、高效液相色谱法（HPLC）、离子交换凝微柱层析法、酶法[10]。乳胶免疫比浊法是运用单克隆抗体或多克隆抗体特异辨认缬氨酸β链N-结尾糖化的血红蛋白最终4～8个氨基酸组成的抗原表位进行剖析测定，可是该办法的校准品得不到溯源，无法确保其精确性[11]。HPLC法作为检测糖化血红蛋白的参阅办法具有杰出的精密度和精确性，可是它检测本钱高而且需求专用贵重的仪器，不易在临床上推行。酶法是近年来开展的一种简洁、快速、精确的办法[12]，它特异地测定源于HbA1c的糖化二肽，在特定的蛋白酶体系中与果糖基氨基酸反响，生成的过氧化氢使显色剂出现色彩。在全自动生化剖析仪上能够经过特定波长检测这种色彩度吸光度，吸光度的巨细与色彩深浅成正比。endprint
王佑清等[13]在2012年报导酶法测定糖化血红蛋白的线性规模2.0%～16%，从本试验成果来看，线性规模与之挨近。2010年ADA糖尿病规范化医治攻略显现：糖尿病的确诊规范之一是糖化血红蛋白>6.5；糖尿病患者的糖化血红蛋白操控方针是<7.0。本试验室的酶法测定糖化血红蛋白的线性规模完全契合临床的要求。关于>15.5%的检测成果，能够在生化剖析仪的参数里边直接设置稀释份额进行复查。
有临床安排公布的攻略主张将HbA1c是否下降0.5%来评判新的医治计划是否有用[14]，这就要求试验室测定糖化血红蛋白时有更高的精密度，才干确保糖尿病患者医治前后成果的可比性。酶法的精密度与检测体系的安稳性也有着亲近的联系。全自动生化剖析仪加样体系的精确性、光路体系的安稳性、清洗安排的清洗才干都会影响到酶法的精密度，应该定时对生化剖析仪进行保护保养。别的酶法试剂装载到仪器上之后会一向敞口放置，触摸空气会使其有用成分发作改动。当室温高于生化剖析仪试剂仓的温度时，瓶口凝聚的水珠会流入试剂瓶稀释试剂。当糖化血红蛋白检测完结时，能够把试剂拧紧盖子放入冰箱。经过以上几种办法使酶法测定糖化血红蛋白处于最佳变异状况，到达杰出的精密度。本文的试验成果表明酶法的批内精密度CV 1.09%，批间精密度CV 2.2%，酶法的批内和批间精密度均优于HPLC法。
综上所述，酶法测定糖化血红蛋白精密度好，与HPLC法有杰出的相关性，操作简洁，值得在临床上推行运用。
[参阅文献]
[1] Berge LI，Riise T，Hundal O，et al. Prevalence and characteristics of depressive disorders in type 1 diabetes[J]. BMC Res Notes，2013，6（1）：543.
[2] Becquemont L，Benattar-Zibi L，Bertin P，et al. National observatory on the therapeutic management in ambulatory care patients aged 65 and over， with type 2 diabetes， chronic pain or atrial fibrillation[J]. Therapie，2013，68（4）：265-283.
[3] Malathi L，Masthan KM，Balachander N，et al. Estimation of salivary amylase in diabetic patients and saliva as a diagnostic tool in early diabetic patients[J]. J Clin Diagn Res，2013，7（11）：2634-2636.
[4] 陈妍，刘建国，徐磊，等. 空腹血糖、餐后2h血糖及糖化血红蛋白对糖尿病的确诊价值[J]. 郑州大学学报（医学版），2012，47（4）：534-537.
[5] 李义龙，单战海，韩冰，等. 酶法糖化血红蛋白试剂盒办法学比对点评[J]. 我国试验确诊学，2010，14（8）：1336-1338.
[6] 张瑾. 联合用药医治2型糖尿病的临床效果剖析[J]. 我国当代医药，2012，19（31）：184，186.
[7] 张莲文. 晚年糖尿病缓慢并发症及护理剖析[J]. 临床合理用药杂志，2013，6（18）：140.
[8] 穆银玉，吴巧萍. Bio-Rad D10全自动糖化血红蛋白仪开始点评[J]. 我国现代医师，2010，48（26）：34-35，91.
[9] Wium C，Gulseth HL，Eriksen EF，et al. Characteristics of glucose metabolism in Nordic and South Asian subjects with type 2 diabetes[J]. PLoS One，2013，8（12）：e83983.
[10] Lerstad G，Brodin EE，Enga KF，et al. Hyperglycemia， assessed by HbA1c，and future risk of venous thromboembolism：the Tromso study[J]. J Thromb Haemost，2014.12（3）：313-319.
[11] 赵翠伶，王丽娟，王连英，等. 不同糖化血红蛋白检测办法在临床中的运用讨论[J]. 我国医刊，2013，48（8）：36.
[12] Keltanen T，Sajantila A，Valonen T，et al. Measuring postmortem glycated hemoglobin-A comparison of three methods[J]. Leg Med （Tokyo），2013，15（2）：72-78.
[13] 王佑清，喻飞，王生忠，等. 酶法测定糖化血红蛋白的临床运用[J]. 临床和试验医学杂志，2012，11（9）：715-716.
[14] 宋银丹，段勇. 糖化血红蛋白检测规范化的研究进展[J]. 试验与查验医学，2013，31（2）：108-110，130.
（收稿日期：2013-12-05）endprint
王佑清等[13]在2012年报导酶法测定糖化血红蛋白的线性规模2.0%～16%，从本试验成果来看，线性规模与之挨近。2010年ADA糖尿病规范化医治攻略显现：糖尿病的确诊规范之一是糖化血红蛋白>6.5；糖尿病患者的糖化血红蛋白操控方针是<7.0。本试验室的酶法测定糖化血红蛋白的线性规模完全契合临床的要求。关于>15.5%的检测成果，能够在生化剖析仪的参数里边直接设置稀释份额进行复查。
有临床安排公布的攻略主张将HbA1c是否下降0.5%来评判新的医治计划是否有用[14]，这就要求试验室测定糖化血红蛋白时有更高的精密度，才干确保糖尿病患者医治前后成果的可比性。酶法的精密度与检测体系的安稳性也有着亲近的联系。全自动生化剖析仪加样体系的精确性、光路体系的安稳性、清洗安排的清洗才干都会影响到酶法的精密度，应该定时对生化剖析仪进行保护保养。别的酶法试剂装载到仪器上之后会一向敞口放置，触摸空气会使其有用成分发作改动。当室温高于生化剖析仪试剂仓的温度时，瓶口凝聚的水珠会流入试剂瓶稀释试剂。当糖化血红蛋白检测完结时，能够把试剂拧紧盖子放入冰箱。经过以上几种办法使酶法测定糖化血红蛋白处于最佳变异状况，到达杰出的精密度。本文的试验成果表明酶法的批内精密度CV 1.09%，批间精密度CV 2.2%，酶法的批内和批间精密度均优于HPLC法。
综上所述，酶法测定糖化血红蛋白精密度好，与HPLC法有杰出的相关性，操作简洁，值得在临床上推行运用。
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王佑清等[13]在2012年报导酶法测定糖化血红蛋白的线性规模2.0%～16%，从本试验成果来看，线性规模与之挨近。2010年ADA糖尿病规范化医治攻略显现：糖尿病的确诊规范之一是糖化血红蛋白>6.5；糖尿病患者的糖化血红蛋白操控方针是<7.0。本试验室的酶法测定糖化血红蛋白的线性规模完全契合临床的要求。关于>15.5%的检测成果，能够在生化剖析仪的参数里边直接设置稀释份额进行复查。
有临床安排公布的攻略主张将HbA1c是否下降0.5%来评判新的医治计划是否有用[14]，这就要求试验室测定糖化血红蛋白时有更高的精密度，才干确保糖尿病患者医治前后成果的可比性。酶法的精密度与检测体系的安稳性也有着亲近的联系。全自动生化剖析仪加样体系的精确性、光路体系的安稳性、清洗安排的清洗才干都会影响到酶法的精密度，应该定时对生化剖析仪进行保护保养。别的酶法试剂装载到仪器上之后会一向敞口放置，触摸空气会使其有用成分发作改动。当室温高于生化剖析仪试剂仓的温度时，瓶口凝聚的水珠会流入试剂瓶稀释试剂。当糖化血红蛋白检测完结时，能够把试剂拧紧盖子放入冰箱。经过以上几种办法使酶法测定糖化血红蛋白处于最佳变异状况，到达杰出的精密度。本文的试验成果表明酶法的批内精密度CV 1.09%，批间精密度CV 2.2%，酶法的批内和批间精密度均优于HPLC法。
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