呼应面优化工艺 呼应面法优选两头尖的提取工艺

赵旭 汪坤 王楠斐

摘要：意图 优选两头尖的提取工艺条件。办法 以竹节香附素A提取率为调查目标，选用呼应面实验规划调查乙醇浓度、液料比、提取时刻对两头尖提取工艺的影响。成果 优化的提取工艺条件为：乙醇浓度82%，液料比为11.7∶1，提取2次，每次2 h。在该优化条件下，竹节香附素A的提取率为2.24 mg/g。定论 该优化工艺简洁、猜测性杰出，可认为两头尖的开发供给参阅。

关键词：两头尖；呼应面法；竹节香附素A

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.03.016

中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）03-0066-03

Optimization of Extraction Anemones Raddeanae Rhizoma by Using Response Surface Method ZHAO Xu， WANG Kun， WANG Nan-fei （Henan Province Hospital of TCM， Zhengzhou 450002， China）

Abstract： Objective To optimize the extraction process of Anemones Raddeanae Rhizoma. Methods The extraction rate of raddeanin A was set as response value， and response surface method was employed to investigate the influence of ethanol concentration， extraction time and the amount of alcohol added on the extraction process of Anemones Raddeanae Rhizoma. Results Optimized extraction technology was： extracted 2 times with 11.7 times the amount of 82% ethanol， 2 h per time. Under this optimization process， the extraction rate of raddeanin A was 2.24 mg/g. Conclusion The optimized extraction process can provide a reference for production.

Key words： Anemones Raddeanae Rhizoma； response surface method； raddeanin A

兩头尖为毛茛科植物多被银莲花Anemone raddeana Regel的枯燥根茎，具有祛风湿、消痈肿成效，用于医治风寒湿痹、四肢拘挛、骨节痛苦、痈肿溃烂等[1]。现代研讨发现，两头尖抗肿瘤效果明显，其首要化学成分为皂苷类，其间竹节香附素A含量较高，抗肿瘤活性较强[2-3]。

现在两头尖的提取工艺研讨规划办法首要为正交实验法[4]，提取办法有超临界提取法[5]、回流提取法[6]、微波提取法[7]等，一般以总皂苷为目标性成分。呼应面法现在已广泛使用于中药提取工艺研讨的实验规划[8-10]，其剖析办法直观，精细度更高，猜测性更好。本研讨运用呼应面法进行实验规划，以竹节香附素A为调查目标，优选两头尖加热回流提取工艺。

1 仪器与试药

Aglient-1260高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，安捷伦科技（我国）有限公司；AE240型十万分

基金项目：河南省科技公共方案项目（132102310243）

之一电子剖析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；电子恒温水浴锅，北京中兴伟业仪器有限公司。

竹节香附素A对照品（批号110718-201108），我国食品药品检定研讨院。两头尖购于亳州药材商场，经河南省中医院黄小敏副主任中药师鉴定为毛茛科植物多被银莲花Anemone raddeana Regel的枯燥根茎。乙腈、甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。

2 办法与成果

2.1 竹节香附素A含量测定

2.1.1 色谱条件 Agilent TC-C18色谱柱（5 ?m，4.6 mm×250 mm），十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；活动相A为乙腈，B为0.1%磷酸溶液，梯度洗脱（0～7 min，47%A；7～5 min，47%～55%A），检测波长206 nm，柱温25 ℃，流速1 mL/min。理论塔板数以竹节香附素A核算不低于4000。

2.1.2 对照品溶液的制备 精细称取竹节香附素A对照品1.10 mg置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 称取两头尖粗粉3 g，按正交实验规划的条件加热回流提取，滤纸过滤搜集提取液，水浴挥干后用甲醇定容至50 mL容量瓶中，经0.45 ?m微孔滤膜过滤，即得。

2.1.4 规范曲线的制备 取竹节香附素A对照品溶液2、4、6、8、10、12 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=513.47X-0.060 7（r2=1），竹节香附素A线性规模为0.22～1.32 ?g。

2.1.5 精细度实验 取竹节香附素A对照品溶液，重复进样6次，每次10 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件测定，核算竹节香附素A峰面积RSD=1.88%，标明仪器精细度杰出。

2.1.6 安稳性实验 称取两头尖粗粉3 g，按供试品溶液制备办法制备（10倍量90%乙醇提取2次，每次1.5 h），别离放置0、2、4、6、8 h后进样，进样量10 ?L，按“2.1.1”项下色譜条件测定，核算竹节香附素A峰面积RSD=2.14%，标明供试品溶液在8 h内安稳。

2.1.7 重复性实验 称取两头尖粗粉6份，每份3 g，按供试品溶液制备办法制备（10倍量90%乙醇提取2次，每次1.5 h），别离进样10 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件测定，核算竹节香附素A峰面积RSD=2.96%，标明办法重复性杰出。

2.1.8 加样回收率实验 称取已知含量的两头尖提取液6份，每份1 mL，置于10 mL量瓶中，参加相当于两头尖提取液中含有量的竹节香附素A对照品，加甲醇定容，核算均匀回收率为98.43%，RSD=1.97%，成果标明本法回收率杰出。

2.2 提取工艺优选

在预实验的基础上，固定提取次数为2次，挑选乙醇浓度、液料比、提取时刻为自变量，以竹节香附素A提取率为呼应值，规划三要素三水平中心复合实验，要素水平见表1。

称取两头尖粗粉，按实验规划方案提取，按“2.1.3”项下办法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定竹节香附素A含量，实验组织及成果见表2。选用Design Expert 8.06软件对所得数据进行回归剖析，成果见表3。

经Design Expert 8.06软件拟合，得竹节香附素A提取率Y对乙醇浓度、提取时刻、液料比的回归方程Y=2.45+0.15A+0.077B+0.20C-0.007 5AB+0.36AC+0.097BC-0.30A2-0.086B2-0.27C2。

由表3可知，模型回归P值为0.000 4，阐明模型回归明显牢靠；失拟差错P值为0.426 8（P>0.05），阐明失拟度不明显；相关系数r2=0.961 0，调整值为0.910 8，阐明该方程拟合度较高，该模型能够猜测两头尖提取工艺进程。

乙醇浓度、液料比、乙醇浓度与液料比的交互效果、乙醇浓度的平方对归纳评分的影响较明显（P<0.05），在3个要素之间，乙醇浓度对实验成果的影响最大。

根据二次多项式方程，别离制作各目标与呼应值交互项的呼应曲面图，以断定各要素对两头尖提取工艺的影响，成果见图1～图3。

经过Design Expert 8.06软件核算并剖析得到提取工艺的最优条件为：81.56%乙醇提取2次，每次1.97 h，液料比为11.69∶1，猜测竹节香附素A提取率为2.57 mg/g。结合实际出产断定优化提取工艺为：11.7倍量82%乙醇提取2次，每次2 h。

2.3 验证实验

取同一批两头尖，精细称取粗粉3份，每份3 g，依照优选的提取工艺进行提取，核算竹节香附素A均匀提取率为2.61 mg/g，RSD=2.58%，与猜测值误差较小，阐明优选的提取工艺安稳牢靠。

3 评论

近年来，两头尖的抗肿瘤效果使其临床使用越来越广泛，但现阶段两头尖有效成分提取工艺的研讨较少，首要选用正交实验法进行研讨。呼应面法现在现已广泛使用于中药提取工艺研讨。

本研讨在预实验的基础上首要固定提取次数为2次，经过呼应面法剖析提取时刻、乙醇浓度、液料比3个要素对两头尖提取工艺的影响，经过回归剖析标明，模仿的二次项方程具有可猜测性。本研讨可认为两头尖的提取开发供给根据。

参阅文献：

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[2] 路金才，徐琲琲，张新艳，等.两头尖的化学成分研讨[J].药学学报， 2002，37（9）：709-712.

[3] 任风芝，张雪霞，牛桂云，等.两头尖的抗肿瘤活性成分研讨[J].中草药，2005，36（12）：1775-1778.

[4] 李国军，王扎根，王风景.两头尖总皂提取条件优化研讨[J].我国保健养分，2012，22（36）：2283-2284.

[5] 马晓红，姚向阳，韩凤梅，等.超临界CO2萃取两头尖皂甙研讨[J].湖北大学学报：自然科学版，2003，25（2）：156-159.

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[7] 李会芳，李孝波，闫菁华，等.正交规划法优化两头尖总皂苷微波提取工艺[J].中华中医药学刊，2011，29（3）：553-555.

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[9] 侯小涛，刘鹏，邓家刚，等.均匀规划优选甘蔗叶多糖颗粒制备工艺[J].中成药，2014，36（12）：2636-2639.

[10] 符少莲，冯翠娟，李沙.星点规划-效应面法优化脂溶性丹参提取物速释滴丸处方工艺[J].中成药，2013，35（4）：690-695.

（收稿日期：2016-04-28）

（修回日期：2016-05-17；修改：陈静）