肺癌血清标志物 生物芯片技能在肺癌血清标志物检测中运用的功能点评
杨昊 熊娟 钟平
[摘要] 意图 剖析点评生物芯片技能在肺癌血清肿瘤符号物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、细胞角蛋白19片段（cytokeratins 19，CYFRA211）、神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）、鳞状上皮细胞癌抗原（squmaous cell carcinoma antigen，Scc）检测中运用的功能。 办法 经过精密度试验、线性试验和比对试验进行生物芯片技能在CEA、Scc、CYFRA211和NSE检测中的功能点评，运用SPSS 19.0计算学软件进行相关数据计算剖析。 成果 精密度试验显现4个检测项目CV值均低于厂家设定值；线性试验显现4个项目R2均>0.95，线性规模契合试验要求；比对试验两套检测体系在进行多元回归剖析后，R2均为0.314，拟合优度相同，可视为检测成果具有较高共同性。 定论 将生物芯片技能交融运用到化学发光免疫剖析法中，对肺癌肿瘤血清标志物检测功能点评较好，能满意临床需求。
[关键词] 生物芯片；肺癌；血清标志物；功能点评
[中图分类号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）05-0098-03
生物芯片技能是90年代中期以来影响最深远的严重科技开展之一，是融微电子学、生物学、物理学、化学、核算机科学为一体的高度穿插新技能，具有严重的根底研讨价值。江苏三联SLXP-001全自动生物芯片阅览仪是依据微阵列化学发光免疫剖析检测技能的全自动生物芯片剖析体系，可用于肿瘤标志物的检测。本试验依据《医疗机构临床试验室办理办法》和《医学试验室质量和才能认可原则》（ISO15189：2012）的要求，结合科室实践工作，参照美国国家临床试验室规范化研讨所（CLSI）文件攻略[1-3]，经过精密度试验、线性试验和比对试验进行生物芯片技能在肺癌血清标志物CEA、Scc、CYFRA211和NSE检测中的功能点评，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 一般材料
一切检测标本均来自2016年8～10月汉川市公民医院临床新鲜血清样本，无显着溶血、黄疸及脂血。
1.2 仪器与试剂
江苏三联SLXP-001全自动生物芯片阅览仪，德国西门子Centaur XP全自动化学发光免疫剖析仪，SLXP-001生物芯片批号：F160526E3，规范品和质控品批号：F160912K18；Centaur XP配套肺癌肿瘤血清标志物检测试剂：CEA（试剂批号130201003M，规范品和质控品批号02516082502），Scc（试剂批号130201018M，规范品和质控品批号06316092001），CYFRA211（试剂批号130201013M，规范品和质控品批号06216093001），NSE（试剂批号130201016M，规范品和质控品批号02316072502）。试剂均在有用期内运用。
1.3办法
试验前对仪器进行每日保养和质控检测并在控，严厉依照仪器和试剂阐明书进行试验操作。
1.3.1 精密度试验 别离选取CEA、Scc、CYFRA211和NSE的高、中、低三个浓度水平新鲜血清样本，每个浓度水平别离在SLXP-001上重复测定20次，核算其变异系数CV值；用高、中、低三个浓度水平质控品（厂家配套供给）接连测定20 d，核算其变异系数CV值，要求CV值低于厂家产品阐明书。
1.3.2 线性试验 别离挑选CEA、Scc、CYFRA211和NSE高浓度水平的临床血清样本，用SLXP-001专用稀释试剂做倍比稀释（1、1/2、1/4、1/8、1/16），配成5个系列浓度样本，用稀释试剂做空白样本，每个样本测定3次并进行均值核算；对样本的理论和检测浓度行线性回归并进行线性回归剖析，核算相关系数R值，要求相关系数R2≥0.95。
1.3.3 比对试验 三联生物芯片阅览仪SLXP-001与西门子全自动化学发光免疫剖析仪CENTAUR XP均运用双抗体夹心法原理定量检测人血清中的肿瘤标志物浓度，两台仪器查验原理相同，但查验办法及试验过程不同，契合对两套检测体系进行临床比对的要求。别离选取20例临床确诊肺癌患者血清样本和20例非癌症患者血清样本（样本浓度掩盖不同水平），一起在两台仪器上测定CEA、Scc、CYFRA211和NSE4个项目，对两组检测成果进行回归剖析，核算相关系数R值，比较R2拟合优度。
1.4 计算学处理
运用SPSS 19.0计算学软件进行相关数据处理及计算剖析，计数材料以例数或百分率表明，组间比较选用配对χ2查验，P<0.05为差异有计算学含义。精密度试验选用线性回归剖析；比对试验选用多元线性回归剖析并核算其回归方程。
2成果
2.1精密度验证成果
CEA、Scc、CYFRA211和NSE的高、中、低三个浓度水平批内和批间不精密度CV均低于厂家阐明书声明的CV值（CEA：CV高值<11.74%，低值<7.15%；Scc：CV高值<8.55%，低值<7.62%；CYFRA211：CV高值<7.36%，低值<6.47%；NSE：CV高值<6.93%，低值<6.54%），见表1。
2.2 线性规模验证成果
CEA线性试验相关方程Y=1.035X-0.700，R2=0.998，丈量线性（1.68～288.60）ng/mL，试剂厂家指定线性（1～300）ng/mL；Scc线性试验相关方程Y=0.979X+0.168，R2=0.996，丈量线性（0.88～92.77）ng/mL，試剂厂家指定线性（0.5～100）ng/mL；CYFRA211线性试验相关方程Y=0.998X-0.005，R2=0.999，丈量线性（0.51～186.70）ng/mL，试剂厂家指定线性（0.65～200）ng/mL；NSE线性试验相关方程Y=0.994X+0.240，R2=0.998，丈量线性（2.28～292.40）ng/mL，试剂厂家指定线性（2.6～300）ng/mL。
2.3比对试验成果
SLXP-001进行多元线性回归，得到回归方程Y=1.672-0.003X1-0.008X2-0.006X3+0.003X4（其间Y为样本类型，Y=1时表明为肺癌患者样本，Y=2时表明非肺癌患者样本，X1表明CEA值，X2表明Scc值，X3表明CYFRA211值，X4表明NSE值），Anova模型核算Sig值为0.009，Sig<0.05，证明所树立的回归方程有用，核算R值为0.560，R2为0.314；西门子CENTAUR XP进行多元线性回归，得到回归方程Y=1.678-0.003X1-0.008X2-0.005X3+0.001X4，Anova模型核算Sig值为0.009，Sig<0.05，证明所树立的回归方程有用，核算R值为0.560，R2为0.314。从R2拟合优度来看，两个模型的拟合优度相同，均为0.314，从成果来看，两个模型中最先进入“线性回归模型”的均是NSE值，见表2、3。
3评论
SLXP-001型生物芯片阅览仪将生物芯片技能运用于化学发光免疫剖析中，对血清符号物进行微阵列化学发光免疫剖析，其主要优势是运用生物芯片技能防止惯例仪器样本搬运操作中的样本穿插污染，从而使仪器的准确率和重现性得到进步，进一步确保剖析成果的准确性。SLXP-001运用蛋白芯片外表包被的抗体与患者血清中的抗原进行免疫反响，经过高活络制冷CCD检测蛋白芯片样本点的发光亮度来量化测定肿瘤血清符号物，其办法原理在该范畴归于先进，但厂家的功能参数是在其适宜的环境下测定得到的与本试验室实践的外部条件存在差异，在运用仪器日常检测前有必要对仪器的功能进行验证[4-9]。
对SLXP-001芯片阅览仪进行精密度验证，试验成果显现CEA、Scc、CYFRA211和NSE的高、中、低三个浓度水平批内和批间不精密度CV均低于厂家阐明书声明的CV值（CEA：CV高值<11.74%，低值<7.15%；Scc：CV高值<8.55%，低值<7.62%；CYFRA211：CV高值<7.36%，低值<6.47%；NSE：CV高值<6.93%，低值<6.54%），阐明仪器的重复性较好，测定成果安稳。本研讨对其批内和批间的CV值进行比较和相关性剖析，CEA、Scc、CYFRA211和NSE的相关系数别离为0.998、0.996、0.999、0.998，R2均>0.95，阐明SLXP-001不管在批内仍是批间，其检测成果均具有很好的重复性，批内和批间要素不会影响其安稳性。
办法学比对共同是试验室质量操控办理的重要依据，对SLXP-001和CENTAUR XP两套检测体系比对试验测定成果别离进行多元线性回归剖析，成果可见其R2拟合优度相同，均为0.314，阐明从办法学共同的视点来讲，两套检测体系的测定成果具有高度的共同性。CENTAUR XP肺肿瘤符号物CEA、Scc、CYFRA211和NSE在我试验室2016年湖北省临检中心室间质评PT成果为100，所以，咱们以为SLXP-001的检测成果具有相同较高的准确性。对CEA、Scc、CYFRA211和NSE别离进行Pearson相关性计算，其相关系数别离为0.914、0.802、0.903、0.927（P均<0.05），可見Scc的测定成果较CEA、CYFRA211、NSE在两套检测体系上共同性略低，这可能与Scc在血清中的半衰期极短、安稳性较差有关。Scc的半衰期长短现在尚无有关的切当报导，Laure Ritti等[10]的研讨报告中说到Scc的半衰期约为20 min，这明显与其他三种血清符号物比较其半衰期要短许多，别的温度、pH值、样本血脂含量等理化要素均会对其成果形成不同程度影响。SLXP-001线性规模验证成果与厂商指定线性相符，而本次检测标本的浓度，均在其有用检测浓度规模以内。
现在，化学发光免疫剖析办法已成为国内外广泛认可并运用的检测肿瘤血清符号物的办法[11-13]，在科学技能不断开展以及强壮的市场需求驱动下，各大医疗研讨机构及厂商均不断将新的技能交融到化学发光技能中，生物芯片技能的引进，对化学发光技能的开展也拓荒了新视野，其微量、低成本、少污染的优势也在技能开展中得到了很好的表现。本试验经过多方面的数据剖析，对生物芯片技能在肿瘤血清符号物检测中的精密度、线性、重复性、准确性进行验证，断定其规划满意临床需求，但其临床解说也应充分考虑不同生产厂家、不同检测体系对成果形成的差错，试验室应有专门的技能人员对不同检测体系间的成果进行点评剖析，对差错超出答应差错的成果予以校对，以确保临床成果的准确性和可比性，满意临床需求[14，15]。
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（收稿日期：2016-12-23）