糖尿病视网膜病变 糖尿病视网膜病变患者氧化应激状态及炎症因子的临床研讨
关清华 旷劲松 程岚 辛彩虹
[摘要] 意图 经过测定糖尿病视网膜病变（DR）患者血清晚期蛋白氧化产品（AOPP）、血管内皮细胞成长因子（VEGF）及色素上皮衍生因子（PEDF）的水平，评论其在DR中的或许效果。 办法 选择2型糖尿病（T2DM）患者90例，分为T2DM无DR（NDR）组30例，布景期DR（BDR）组30例，增殖期DR（PDR）组30例。一起选择健康对照组30例。用Wikto-sarsat介绍的办法改善后测定各组血清AOPP水平，酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清VEGF及PEDF水平。 成果 跟着DR的开展，各组血清中AOPP水平逐步升高，差异均有统计学含义（P<0.05）。与正常对照组比较，2型糖尿病各组VEGF水均匀显着升高（P<0.05）；BDR组及PDR组与NDR组比较，VEGF水均匀显着高于NDR组（P<0.05）；但PDR组VEGF含量较BDR组有所下降（P<0.05）。各组血清中PEDF水平逐步下降，差异均有统计学含义（P<0.05）。Pearson相关剖析标明血清VEGF与PEDF水平呈负相关（r=-0.734，P<0.05）；而血清AOPP与VEGF水平呈正相关（r=0.816，P<0.05），与PEDF水平呈负相关（r=-0.905，P<0.05）。 定论 糖尿病患者血清AOPP和VEGF水平的升高，PEDF水平的下降或许促进了DR的发作开展。
[关键词] 糖尿病视网膜病变；晚期蛋白氧化产品；血管内皮细胞成长因子；色素上皮衍生因子
[中图分类号] R587.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）35-0029-03
[Abstract] Objective By measuring the level of serum advanced oxidation protein products （AOPP）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and pigment epithelium-derived factor （PEDF） in patients with diabetic retinopathy（DR）， and to explore its possible role in the pathogenesis of DR. Methods 90 type 2 diabetes mellitus （T2DM） patients were divided into three groups： 30 patients with non-DR （NDR）， 30 patients with back ground-DR （BDR）， 30 patients with proliferative-DR （PDR）. At the same time， 30 healthy controls were selected. The concentration of serum AOPP was measured by modified Wikto-Sarsat， while VEGF and PEDF by ELISA assay. Results The serum level of AOPP increased gradually along with the development of DR， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Serum levels of VEGF in T2DM groups were significantly increased compared with the control group （P<0.05）， and VEGF in BDR and PDR groups were significantly higher than that in NDR group （P<0.05）， but the serum level of VEGF in PDR group was significantly lower than that in BDR group （P<0.05）. The serum level of PEDF in each group was gradually decreased， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Pearson correlation analysis showed that the serum level of VEGF was negatively correlated with PEDF（r=-0.734， P<0.05）. The serum level of AOPP was positively correlated with VEGF （r=0.816， P<0.05）， and negatively correlated with PEDF（r=-0.905， P<0.05）. Conclusion The increase of AOPP and VEGF level in serum of patients with diabetes， and the decrease of PEDF may promote the development of DR.
[Key words] Diabetic retinopathy； Advanced oxidation protein products； Vascular endothelial growth factor； Pigment epithelium-derived factor
糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）作为一种渐进性疾病，是糖尿病最严峻的微血管并发症之一，可导致不可逆性失明，是致盲的主要原因之一，但是关于DR的切当发病机制现在仍未彻底明晰。现一起以为氧化应激状态是糖尿病缓慢并发症发作开展的一起土壤，长时刻高血糖及其引起的眼部安排氧化应激状态使血管生成的促进因子表达添加，并削减按捺因子的表达，使血管生成调理失衡，终究导致DR。本文测定了DR患者氧化应激目标血清晚期蛋白氧化产品（advanced oxidation protein products，AOPP）、炎症因子血清血管内皮细胞成长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）的水平，以评论其在DR中的或许效果，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 一般材料
根据2010年WHO糖尿病确诊规范选择我院2014年7月～2015年7月内排泄科住院2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者共90例，其间60例依照全国眼底病协作组拟定的DR确诊规范，根据眼底散瞳和眼底荧光素血管造影确诊为DR患者为DR组。其间布景期DR组（back ground-DR，BDR）30例。男16例，女14例；年纪（53.16±5.8）岁；增殖期DR组（proliferative-DR，PDR）30例。男15例，女15例，均匀年纪（57.2±7.9）岁。无DR组（non-DR，NDR）30例。男17例，女13例，均匀年纪（55.72±7.2）岁。所用病例均扫除心脑血管疾病、高血压、肝肾功用不全、恶性肿瘤及急缓慢感染等。患者进入研讨前1个月内未使用抗氧化剂如硫辛酸、维生素C及维生素E等。随机选择我院体检中心年纪相匹配的健康志愿者30名为正常对照（NC）组，经口服葡萄糖耐量实验证明扫除糖尿病。男15例，女15例，均匀年纪（54.91±6.7）岁。双眼散瞳检测眼底正常。
1.2 办法
1.2.1 标本收集 悉数受试者均于清晨空腹采静脉血2 mL，室温静置1 h，离心10 min（2000 r/min），取血清避光保存于-70℃冰箱待测，所用标本一次测定。
1.2.2 调查目标 所用患者均惯例核算体重指数及检测空腹血糖，使用Witko-sarsat提出的分光光度计法[1]加以改善检测AOPP，依照试剂盒说明书检测VEGF及PEDF。
1.2.3 测定办法 按Witko-sarsat提出的分光光度计法[1]加以改善，血清与PBS按1：5稀释，以氯胺-T同法稀释作空白对照，参加10 μL 1.1 6 mol/L KI及20 μL乙酸后当即测340 nm处的吸光度（A）值。AOPP浓度以氯胺-T含量标明。VEGF及PEDF的测定选用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法，试剂盒分别由深圳晶美生物工程有限公司及美国TSZ公司供给。
1.3 统计学处理
选用SPSS12.0软件进行数据剖析，计量材料以均数±规范差（x±s）标明，多组间均数比较选用单因素方差剖析判别组间差异，两参数间相关性查验使用Pearson相关剖析，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 各组一般材料及血清AOPP、VEGF及PEDF水平比较
NC组、NDR组、BDR组及PDR组的年纪、性别、体重指数差异均无统计学含义（P>0.05）。T2DM各组（包含NDR组、BDR组、PDR组）血糖均高于正常对照组，差异均有统计学含义（P<0.05）；而T2DM各组间比较，则差异无统计学含义（P>0.05）。跟着DR的开展，各组血清中AOPP水平逐步升高，差异均有统计学含义（P<0.05）；与正常对照组比较，T2DM各组VEGF水均匀显着升高（P<0.05）；BDR组及PDR组与NDR组比较，VEGF水均匀显着高于NDR组（P<0.05）；但PDR组VEGF含量较BDR组有所下降（P<0.05）；各组血清中PEDF水平逐步下降，差异均有统计学含义（P<0.05）。见表1。
2.2 相关性剖析
血清VEGF与PEDF水平呈负相关（r=-0.734，P<0.05）；而血清AOPP与VEGF水平呈正相关（r=0.816， P<0.05），与PEDF水平呈负相关（r=-0.905，P<0.05）。
3 评论
1型和2型糖尿病均可开展为DR，简直每个1型糖尿病经过15～20年的时刻均开展为DR，而T2DM超越60%开展为DR。在发达国家DR是成人视力残缺的主要原因[2]。现一起以为，DR与自由基介导的氧化损害有关[3]。机体中氧化自由基产品添加或抗氧化剂及抗氧化酶生机下降，导致自由基的生成与机体抗氧化才能间失衡，导致视网膜安排氧化应激发作。很多研讨标明添加的氧化应激是糖尿病患者视网膜炎症反响的一个主要原因[4]，活性氧经过改动多种炎症基因表达然后在介导炎症反响方面起到重要效果，终究引起视网膜损害导致DR的发作。糖尿病时，高血糖诱导的氧化应激显着增强[5]，自由基可效果于蛋白、脂肪及核酸等，构成各种损害产品，然后影响正常的生理进程。AOPP反映了氧化应激构成的蛋白质损害，特别对白蛋白的损害，是蛋白质被单核细胞、中性粒细胞活化生成的次氯酸所润饰的产品，是反响蛋白氧化程度的灵敏目标[6]。研讨标明，T2DM患者的AOPP水平较健康对照组显着升高，而在T2DM兼并DR患者的血清中AOPP水平显着高于无DR的患者[7]。本研讨标明跟着DR的开展，氧化应激反响逐步增强，表现为AOPP水平逐步升高，各组间比较有统计学含义，亦进一步支撑上述成果。
VEGF是现在已知的最强的内皮细胞有丝分裂原和诱导血管生成的细胞因子[2，8]，也是现在以为与DR重生血管构成联络最亲近的一个细胞因子，其特异性地直接效果于血管内皮细胞，影响血管成长的因子，其他各种因素影响血管生成的效果都是直接或直接经过诱导VEGF及其受体的表达来完成的，但是在糖尿病视网膜中这些重生血管脆性强，很简单决裂。Zhang等[9]标明VEGF在玻璃体液中的水平缓糖尿病视网膜病变的严峻程度亲近相关。本研讨成果标明，跟着DR的加剧，血清VEGF水平出现递加趋势。但PDR组血清VEGF水平较BDR组下降，剖析其原因或许为：BDR期因为机体高血糖及代谢紊乱，导致安排缺氧，影响VEGF排泄增多，而开展到PDR期，很多重生血管构成使得缺氧的压力减轻，一起有部分重生血管决裂，则VEGF发作也随之削减，这标明血清中VEGF水平与糖尿病患者重生血管活动性亲近相关。当重生血管活动期完毕，VEGF水平则下降。有研讨标明抗VEGF医治可有用推迟DR的开展[10]，Porta等[11]研讨标明对存在黄斑水肿的DR患者使用抗VEGF医治能够有用医治DR。
PEDF是一种具有多种功用的蛋白质，在视网膜及神经系统中表达最多，被称为“天然血管按捺因子”，经过按捺NADPH氧化酶介导的氧化应激而起到阻挠神经损害及下降血管通透性等效果，还能够按捺重生血管生成，然后阻挠DR发作开展[12、13]。本研讨成果标明跟着DR的开展，各组血清PEDF水平逐步下降，各组间比较有统计学含义。这标明血清PEDF水平的下降或许是DR病程开展的一个重要原因。弥补PEDF及各种促进PEDF表达的办法均或许为推迟DR病变的开展供给有用医治[14，15]。
相关剖析标明，血清VEGF与PEDF水平呈负相关（r=-0.734，P<0.05），这说明VEGF可在必定程度下调PEDF表达，进一步促进DR的开展；一起有研讨标明PEDF经过拮抗VEGF的生物学效果而按捺视网膜血管通透性[13]，然后阻挠DR的发作开展。而血清AOPP与VEGF水平呈正相关（r=0.816，P<0.05），与PEDF水平呈负相关（r=-0.905，P<0.05），这说明氧化应激损害产品或许会经过上调VEGF及下调PEDF水平，然后损坏血清VEGF与PEDF之间的平衡，参加DR的发作开展。
综上所述，氧化应激状态及添加的蛋白氧化损害与炎症反响在DR构成进程中起到重要效果，即当糖尿病患者血清AOPP和VEGF水平升高，PEDF水平下降时或许促进了DR的发作开展。因为DR前期缺少典型症状，晚期尚无特效药物医治，通常在患者发现视觉反常时已失去了最佳医治机遇，而经过联合检测血清AOPP、VEGF、PEDF水平有助于清晰DR严峻程度，为临床有用防治DR供给根据，具有宽广的使用远景。
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（收稿日期：2015-09-17）