小鼠肝癌模型 OK—432肿瘤疫苗对小鼠肝癌细胞Hca—F抑制作用的研讨

乔莎++赵彬

[摘要] 意图 研讨评论OK-432肿瘤疫苗对小鼠淋巴高搬运肝癌细胞Hca-F的按捺效果。 办法 对DBA/2小鼠背部接种高搬运肝癌细胞Hca-F，树立肿瘤搬运模型，设对照组和OK-432肿瘤疫苗组，3周后丈量肿瘤巨细，并制作肿瘤成长曲线，检测各组抑瘤率、淋巴结搬运按捺率，淋巴结白腊切片HE染色调查两组淋巴细胞数。 成果 OK-432肿瘤疫苗具有显着的抑瘤效果，抑瘤率达68.4%；淋巴结搬运按捺率为31.6%；经过比较对照组和给药组淋巴结的HE染色，发现给药组淋巴结内淋巴细胞显着多于对照组。 定论 OK-432肿瘤疫苗能够有用按捺肿瘤成长，促进机体免疫应对，按捺肿瘤的淋巴结搬运。

[关键词] OK-432肿瘤疫苗；淋巴结搬运；抑瘤率

[中图分类号] R739.86 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）01-0001-03

Research on inhibitory effect of OK-432 tumor vaccine on mice' liver cancer cells Hca-F

QIAO Sha ZHAO Bin

Department of Stomatology， Shanxi Medical University， Taiyuan 030001，China

[Abstract] Objective To investigate the inhibitory effect of OK-432 tumor vaccine on mice' highly lymph-metastatic liver cancer cells Hca-F. Methods Highly metastatic liver cancer cells Hca-F were planted in the back of DBA/2 mice and the tumor metastasis model was built. The control group and the OK-432 tumor vaccine group were set up， with 20 mice in each group. Three weeks later， the tumor size was measured， the tumor growth curve was drawn， the tumor inhibition rates and lymph node metastasis inhibition rates were detected， and the numbers of lymphocyte of the two groups were observed based on lymph gland paraffin section HE staining. Results OK-432 tumor vaccine had obvious tumor inhibition effects， with the tumor inhibition rate of 68.4%； The lymph node metastasis inhibition rate was 31.6%； Comparison of HE staining of the control group and the medication lymph node group showed that the number of lymphocyte in lymph node of the medication group was significantly larger than that of the control group. Conclusion OK-432 tumor vaccine can effectively inhibit tumor growth， promote body immune response and inhibit lymph node metastasis of tumor.

[Key words] OK-432 tumor vaccine； Lymph node metastasis； Tumor inhibition rate

近年来，肿瘤的发病率逐年增高且越来越年轻化，对患者的生命和健康形成严峻的影响。现在全世界都在对肿瘤的防备和医治进行研讨。跟着肿瘤药理学、分子生物学及免疫学等相关学科的快速开展和穿插浸透，肿瘤疫苗作为肿瘤医治、放疗、化疗后的一种辅佐医治手法越来越遭到人们的重视，本研讨所用肿瘤疫苗为OK-432肿瘤疫苗[1]。OK-432肿瘤疫苗是经过菌体与癌细胞的直触摸摸，使肿瘤细胞变性并露出瘤细胞“躲藏”着的某些抗原决定簇，然后到达增强肿瘤抗原性的意图。研讨标明，OK-432肿瘤疫苗能够显着按捺荷瘤小鼠肿瘤的成长及搬运[2]，并延伸其生存期。本研讨将背部接种了高搬运肝癌细胞Hca-F的DBA/2小鼠随机分为两组，别离给予腹腔打针OK-432肿瘤疫苗和生理盐水，调查OK-432肿瘤疫苗对肿瘤的按捺效果。

1 材料与办法

1.1 试验动物

雌性DBA/2小鼠40只，5～6周，体重16～20 g，购自北京维通利华试验技能有限公司。在SPF条件下喂食，试验前至少习惯1周。

1.2 肿瘤细胞及培育办法

高搬运肝癌细胞Hca-F购自于上海爱丁堡生物科技有限公司。KLN-205肿瘤细胞在37℃，5%CO2恒温箱传代培育，每次运用的培育液依照45 mL的RPMI-1640培育液参加5 mL胎牛血清，0.5 mL的双抗的份额制造。选取培育4代以上生机旺盛的肿瘤细胞作为靶细胞。

1.3 药物与试剂

OK-432为溶血链球菌减毒株冻干制剂，由中外制药株式会社（日本） 供给。青链霉素购自Solarbio公司；胰蛋白酶（含EDTA），无菌PBS，D-Hanks缓冲液；无支原体胎牛血清为浙江天杭生物科技有限公司出品。

1.4 荷瘤小鼠的制备、分组及给药办法

疫苗的制备按Li X等[1]的办法制备而成。将Hca-F肿瘤细胞在37℃，5%CO2恒温箱传代培育，每次运用的培育液依照45 mL的RPMI-1640培育液参加5 mL胎牛血清，0.5mL的双抗的份额制造。选取培育4代以上生机旺盛的肿瘤细胞作为靶细胞，用100 μL打针器及30#针头接种于DBA/2小鼠的背部（2×105/50 μL）。试验小鼠接种24 h后随机分为两组，每组20只，作为对照组（生理盐水）和给药组（OK-432肿瘤疫苗），接种24 h后开端给药，给药办法为腹腔打针，每只100 μL（5×105个），每周1次，接连给药3周。

1.5 肿瘤巨细的测定

各组小鼠处理后每天调查肿瘤巨细，每隔5天丈量肿瘤最大径a和最小径b， 核算肿瘤体积。肿瘤体积=a×b×b×0.52（mm3）。

1.6 抑瘤率及淋巴结搬运按捺率[3]

给药3周后处死小鼠，摘取腋下、腹部、胭窝处的淋巴结，依据淋巴结白腊切片HE染色，计数淋巴结搬运数， 剥离原发肿瘤，测定淋巴结分量，核算抑瘤率、淋巴结搬运率及搬运按捺率。

抑瘤率=（对照组均匀瘤重-给药组均匀瘤重）/对照均匀瘤重×100%；淋巴结搬运率=同组搬运小鼠数/同组小鼠数×100%；淋巴结搬运按捺率=（对照组淋巴结搬运率-给药组淋巴结搬运率）/对照组淋巴结搬运率×100%。

1.7 淋巴结HE染色

用40 g/L甲醛固定液固定淋巴结，惯例办法白腊包埋固定，制成4 μm的白腊切片，进行HE染色，调查两组淋巴细胞滋润状况。

1.8统计学办法

使用SPSS17.0软件进行数据剖析，计量材料用（x±s）表明，组间比较选用方差剖析，计数材料用相对数表明，选用χ2查验，P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 OK-432疫苗对DBA/2小鼠肿瘤增殖的按捺效果

腹腔打针OK-432疫苗及生理盐水后，每隔5天丈量一次肿瘤的巨细，核算肿瘤体积。见表1，使用SPSS17.0软件进行方差剖析：5、10、15、20 d给药组与对照组差异均有统计学含义（P<0.01），OK-432肿瘤疫苗能够按捺肿瘤成长。以天数为横坐标，肿瘤的均匀体积为纵坐标制作肿瘤成长曲线，见图1。由图1可见对照组肿瘤成长速度显着高于给药组。

表1 两组肿瘤巨细比较（x±s，mm3）

图1 肿瘤成长曲线

2.2 两组抑瘤率及淋巴结搬运按捺率比较

给药3周后处死小鼠，摘取腋下、腹部、胭窝处的淋巴结（包含搬运瘤），计数淋巴结搬运数，测定原发肿瘤分量，核算抑瘤率、淋巴结搬运率及搬运按捺率见表2。疫苗组原发淋巴结分量显着低于对照组（P<0.01），抑瘤率为68.4%；淋巴结搬运率疫苗组（65%）低于对照组（95%），有统计学差异（P<0.05），淋巴结搬运按捺率为31.6%。OK-432肿瘤疫苗能够按捺肿瘤成长及肿瘤的淋巴结搬运。

表2 两组淋巴结搬运状况比较

2.3 小鼠搬运淋巴结HE染色成果

从图2可见，对照组淋巴结内淋巴细胞显着少于给药组。OK-432疫苗能够促进机体免疫应对并可按捺肿瘤淋巴结搬运。

图2 对照组（左）与给药组（右）小鼠淋巴结HE染色病理切片

3 评论

肿瘤疫苗是用肿瘤细胞、肿瘤抗原或肿瘤细胞裂解物等激活机体免疫系统来发生抗肿瘤效应。它是一种新式的、自动免疫医治肿瘤的办法[4]。OK-432[5-7]制剂是将A群溶血性链球菌（Su株）以苯基尼西林加热处理并冷冻干燥之制剂，具有免疫活性效果。OK-432肿瘤疫苗[8，9]是把OK-432与KLN-205癌细胞经过戊二醛（GA）架桥剂交联，除掉未结合的剩余物而制成。

本试验经过给接种了肝癌肿瘤细胞的小鼠腹腔打针肿瘤疫苗，调查肿瘤疫苗对小鼠肿瘤的按捺效果，成果显现，OK-432肿瘤疫苗能够按捺肿瘤细胞成长，按捺肿瘤细胞的淋巴结搬运，能够激活机体免疫，增强小鼠抗肿瘤才能。其抗肿瘤机制可能为：①OK-432肿瘤疫苗使菌体与癌细胞直触摸摸，使用OK-432直接杀伤癌细胞的效果使肿瘤细胞变性，能使细胞膜和细胞内的肿瘤抗原得到加工呈上与显露，然后肿瘤细胞“躲藏”着的某些抗原决定簇被露出，使肿瘤抗原性增强得到添加[10，11]。②OK-432肿瘤疫苗能够激活宿主CD4+Th1细胞主导的细胞免疫，增强巨噬细胞和NK细胞的抗肿瘤效果，然后诱发CTL应对，使荷瘤小鼠肿瘤的成长得到显着按捺，延伸小鼠生命，激起和增强宿主的特异性免疫功用[12]。

综上所述，OK-432肿瘤疫苗不只能够按捺肿瘤的成长，并且能够增强机体免疫应对，并可按捺肿瘤的搬运，值得临床上推广使用。

[参考文献]

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（收稿日期：2014-07-29）