叶酸代谢酶基因多态性检测环氧化酶2基因多态性和口腔癌风险性关系研讨

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蓝旭华+陈宁+樊彤海

[摘要] 意图本文旨在研讨环氧化酶2（COX-2）基因多态性与口腔癌发作危险的相关性。办法选取我院口腔中心2010年6月～2013年8月收治的56例口腔癌患者作为病例组，并依照1∶2的份额选取112例无口腔疾病研讨目标作为对照组，使用聚合酶链反响限制性片段长度多态性技能测定COX-2基因多态性，并选用多要素Logistic回归剖析。成果 -1195A>G位点基因频率在病例组平分别为AA（27.27%）、AG（54.55%）、GG（18.18%），对照组分别为AA（21.82%）、AG（63.44%）、GG（14.55%），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.341）。-765G>C位点基因频率在病例组平分别为GG（88.68%）、GC（11.32%）、CC（0），对照组分别为GG（93.33%）、GC（6.67%）、CC（0），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.707）。8473T>C位点基因频率在病例组平分别为TT（68.63%）、CC（27.45%）、TC（3.92%），对照平分别为TT（60.75%）、CC（29.91%）、TC（9.35%），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.539）。1795G>A位点基因频率在病例组平分别为GG（94.44%）、GA（5.56%）、AA（0%），对照平分别为GG（92.59%）、GA（7.41%）、AA（0），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.104）。定论本研讨成果显现，SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改动与口腔癌的发作易理性之间不存在显着的统计学联络。

[关键词] 环氧化酶2；基因多态性；口腔癌；危险

[中图分类号] R739.8 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）32-0005-04

Study on the risk relationship between cyclooxygenase 2 gene polymorphism and oral cancer

LAN Xuhua1 CHEN Ning2 FAN Tonghai1

1.Department of Stomatology， Lishui People's Hospital in Zhejiang Province， Lishui 323000， China； 2.Department of Stomatology， the Affiliated Stomatological Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing 210029， China

[Abstract] Objective To study the risk relationship between cyclooxygenase 2（COX-2） gene polymorphism and the oral cancer. Methods Selected 56 cases of oral cancer patients in our hospital from 2010 June to 2013 August center of Stomatology Hospital as the case group， and according to the ratio of 1∶2 to select 112 cases of no study of oral diseases as control group， used polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphismtechnique for determination of COX-2 gene polymorphism， and the multi factors logistic regression analysis. Results Gene frequency of -1195A>G in case group were AA （27.27%）， AG（54.55%）， GG （18.18%）， respectively in control group of AA controls （21.82%）， AG（63.44%）， GG （14.55%）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant （P=0.341）. Gene frequency of -765G>C in case group were GG （88.68%）， GC（11.32%）， CC （0）， respectively GG （93.33%）， GC （6.67%）， CC（0）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant（P=0.707）. Gene frequency of 8473T>C in case groupwere TT （68.63%）， CC （27.45%）， TC （3.92%）， respectively TT（60.75%）， CC （29.91%）， TC （9.35%）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant （P=0.539）. Gene frequency of 1795G>A in case group were GG （94.44%）， GA （5.56%）， AA （0%）， respectively GG（92.59%）， GA （7.41%）， AA （0）， the differences of gene distribution between the two groups were not significant （P=0.104）. Conclusion The results of this study show there is no significant correlation between susceptibility gene change of oral cancer and SNP gene loci -1195A>G，-765G>C， 8473T>C， 1795G>A loci.

[Key words] Cyclooxygenase 2； Gene polymorphism； Oral cancer； Risk

口腔癌特指发病于口腔内的恶性肿瘤，详细而言可分为牙龈癌、软硬腭癌、颌骨癌、唇癌、舌癌、口咽癌、涎腺癌、口底癌以及上颌窦癌等。大都口腔癌为鳞状上皮细胞癌，其发病机制可能与遗传要素及环境要素有关。环氧化酶2（COX-2）是花生四烯酸内的限速酶环氧化酶（COX）的一个亚型，COX-2过表达是肿瘤进一步开展的重要要素[1]。已有研讨证明，COX-2在肠癌、肺癌、皮肤鳞状细胞癌中存在过表达状况，但其在口腔癌中的表达规则研讨较少。因而，笔者选取我院口腔中心2010年6月～2013年8月收治的56例口腔癌患者进行如下研讨，旨在评论COX-2基因多态性与口腔癌发作危险的相关性。

1材料与办法

1.1一般材料

选取我院口腔中心2010年6月～2013年8月收治的56例口腔癌患者及112例无口腔疾病研讨目标作为对照组。归入规范：①口腔癌患者的确诊由临床医师查看与安排病理学查看相结合；②对照组的研讨人群为通过临床体检的健康人群。扫除规范：参加本次研讨前接受过相关放疗或化疗的口腔癌患者。一切患者均签定知情赞同书后开端本次研讨。

本次研讨共归入168例研讨目标，其间病例组患者56例，男 41例、女 15例，年纪44～68岁，均匀（54.8±7.3）岁；对照组112例，男 78例、女 34例，年纪48～71岁，均匀（56.4±5.7）岁；两组研讨目标的一般材料差异不具有统计学含义（P>0.05），见表1。

表1 两组研讨目标一般材料比较

1.2试剂与仪器

试剂如下：选用广东西陇化工有限公司出产的NaCl及NaAc试剂盒；选用大连TaKaRa生物公司出产的2×Premix Ex Taq酶套、限制性内切酶及DNAMarker；选用德国Sigma 公司出产的蛋白酶K；选用南京骥骜生物技能公司出产的TaqMan引物。

仪器如下：选用德国eppendorf公司出产的Eppendorf AG 22331 型PCR扩增仪；选用美国Bio-Rad公司出产的Bio-Rad Douerpae 电泳仪；选用美国ABI公司出产的7900荧光定量PCR仪及孔板高透过光度盖膜；选用美国AxyGen公司出产的光学384孔反响板。

1.3试验办法

取患者2 mL血标本，依据DNAMarker试剂盒说明书提取外周血细胞内的基因组DNA。选用限制性酶切片段长度剖析法检测COX-2基因765G>C多态性。对所提取的DNA进行PCR扩增，上游引物规划为：5-CCGCT-TCCTTTGTCCATCAG-3；下流引物规划为：5-GGCTG-TATATCTGCTCTATATGC-3。扩增条件如下：于94℃下行预变性1 min，于94℃环境下循环30 s，之后于62℃环境下过度30 s，72℃环境下完善30 s，共循环35次，最后于72℃环境中延伸1 min，即得到PCR扩增产品。选用限制性内切酶对扩增产品进行酶切反响，并水浴、电泳，电泳结束即行摄影操作，依据相片成果断定基因型。

1.4查询办法

选用一致规划的查询表进行流行病学问卷查询，查询内容首要包含：患者的一般材料（年纪、性别）、吸烟状况、喝酒状况、肿瘤部位及病理类型。数据查询完好后录入Epidata，收拾后导入SPSS10.0中进行统计剖析。

1.5 统计学办法

一切数据在SPSS 10.0软件中进行统计学剖析。计量材料以（x±s）表明，选用两样本独立t查验、危险要素的剖析选用多要素Logistic回归剖析，查验水准取α=0.05。

2成果

对COX-2的基因多态性研讨中，共归入4个SNP基因位点：-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型在病例组和对照组中的散布状况见表1。-1195A>G位点基因频率在病例组平分别为AA（27.27%）、AG（54.55%）、GG（18.18%），对照组平分别为AA（21.82%）、AG（63.44%）、GG（14.55%），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.341）。

-765G>C位点基因频率在病例组平分别为GG（88.68%）、GC（11.32%）、CC（0），对照组平分别为GG（93.33%）、GC（6.67%）、CC（0），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.707）。

8473T>C位点基因频率在病例组平分别为TT（68.63%）、CC（27.45%）、TC（3.92%），对照组平分别为TT（60.75%）、CC（29.91%）、TC（9.35%），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.539）。

1795G>A位点基因频率在病例组平分别为GG（94.44%）、GA（5.56%）、AA（0），对照组平分别为GG（92.59%）、GA（7.41%）、AA（0），两组基因散布差异无统计学含义（P=0.104）。COX-2基因多态性的四个基因位点各种基因型在病例组和对照组中的散布状况见表2。

3 评论

口腔癌发病要素首要表现为：长时间嗜烟、酒，口腔卫生较差，牙根、尖利牙尖、不匹配的假牙长时间影响，营养不良，长时间口腔溃疡等。前期口腔癌患者无显着症状，跟着疾病开展，患者将呈现肿块、结节、白色鳞状斑块、溃疡、炎症等，部分患者将呈现口齿不清、吞咽困难症状，严重影响患者日子质量[2]。吸烟作为口腔癌的重要危险要素，患者将吸入很多的氧自由基，氧自由基可与细胞内的靶分子相互效果，并导致靶细胞损害，损害的靶细胞氧化复原电势将被搅扰，其核酸及DNA链也将被氧自由基进犯，终究DNA链呈现断链及碱基润饰状况，此刻癌基因将逐渐露出，细胞周期开端骤变，终究癌变[3]。环氧化酶2（COX-2）被称为管家酶或要素酶，是前列腺素（PGs）组成所有必要的酶，该物质首要散布于血管、肾、胃安排内，是上述细胞癌变中的重要参加物质，正常状况下COX-2并无活性，而在某些因子的影响下，COX-2可快速激活，激活后的COX-2可诱使细胞黏附，按捺细胞凋亡，加快癌细胞的增殖及转录[4]。COX-2定坐落人类1号染色体长臂上，其长为8.3kb，共存有10个外显子。已有研讨证明，COX-2基因-765G/C与哮喘、胃癌、结肠癌、食管癌等疾病存在极大相关性[5]。而颈动脉中层厚度及纤维蛋白原、C-反响蛋白和白细胞介素-6等炎症标志物与COX-2基因-765G/C多态性存在显着相关性[6]。无症状高血脂的-765C基因带着患者其COX-2表达显着较低，患者亚临床动脉粥样硬化及全身性炎症反响率显着下降，提示C等位基因具有较强的动脉粥样硬化维护及抗炎效果[7]。而炎性反响是口腔癌的重要标志及成果，炎性病变可增强多形核嗜中性白细胞和其他吞噬细胞内氧自由基O2及H2O2的活性，这将导致抗氧化酶结构损害，DNA链进一步开裂，机体自由基铲除才能下降，脂质过氧化产品添加并参加到肿瘤的发作和开展中[8]。

本次研讨中，两组患者AA、AG、GG中的-1195A>G位点基因频率近似；而GG、GC、CC中-765G>C位点基因呈现频率也无显着差异。此外，两组患者TT、CC、TC内的8473T>C位点基因呈现频率及GG、GA、AA内的1795G>A位点基因呈现频率也无显着差异，这表明SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改动与口腔癌的发作易理性之间无显着相关性。欧洲学者研讨发现，东欧人群8473T>C位点内的T-C碱基改动与口腔癌、喉癌、咽癌也无显着相关性[9]，与本次研讨定论近似。可是需求留意的是，不同人群的同一SNP位点的等位基因改动状况不同，其头颈部肿瘤发病危险也不同[10]。因而，咱们以为口腔癌发病率与患者种族人群遗传布景、致癌要素露出程度等相关，也与研讨人员研讨方案、试验基因分型、研讨样本基数及不知道要素影响等相关。

综上所述，口腔癌易理性受多要素影响，但与SNP基因位点-1195A>G、-765G>C、8473T>C、1795G>A位点的各种基因型改动无显着相关性。

[参考文献]

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（收稿日期：2014-07-31）