耐甲氧西林金葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌同源性剖析及耐药性研讨
陆军++++++祝进++++++徐礼锋++++++白永凤++++++余旭良
[摘要] 意图 对临床别离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行耐药状况和分子盛行病学监测，评论院内MRSA的盛行趋势。办法 搜集我院2009年1月～2011年6月临床标本别离的MRSA菌株60株；选用 Microscan WalkAway 40进行菌株断定，一起对一切金黄色葡萄球菌进行药物灵敏性剖析；选用脉冲场凝胶电泳技能对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行分子分型。成果 共搜集60株MRSA菌株，其间17株被以为是可疑社区取得（CA-MRSA），43株被以为是医院取得（HA-MRSA）。一切菌株均对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、呋喃妥因和奎奴普丁/达福普汀灵敏，未呈现耐药菌株。CA-MRSA与HA-MRSA对左旋氧氟沙星和利福平的灵敏性有显着差异。临床别离的MRSA菌株PFGE分型较为涣散，共分为13种型别，每种型别的菌株数分别为2～6株不等，未呈现大规模的院内盛行克隆。定论 本院搜集的临床别离的MRSA菌株多重耐药性严峻，其间CA-MRSA相对HA-MRSA灵敏性稍高。一切金黄色葡萄球菌未呈现糖肽类抗菌药物耐药。MRSA菌株未呈现大规模的院内盛行株，但仍应加强院内感染盛行操控。
[要害词] 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；社区取得性；医院取得性；药物灵敏性；脉冲场凝胶电泳
[中图分类号] R378.1+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）07-0084-04
自20世纪60年代英国检出世界上首例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），随后各国MRSA发作率逐步上升，至80年代后期MRSA已成为医院院内感染的重要病原菌，占医院别离的金黄色葡萄球菌的80%以上[1，2]。MRSA常对多种抗菌药物呈现耐药，并可经过触摸途径进行传达，然后引起传达盛行，故世界各国均将MRSA的盛行状况作为长时刻监测的要点[3，4]。我院于2009年末开端呈现MRSA克隆株的盛行，为了解MRSA分子盛行克隆的耐药性，评论本院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌首要盛行株及其散布特色，本研讨对临床非重复别离的60株MRSA进行分子分型，为院内感染的防控供给理论根据。
1 材料与办法
1.1 菌株来历
2009年1月～2011年6月自衢州市人民医院别离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌60株，除掉重复菌株。一切菌株用滤纸片法-70℃保存。
1.2 试剂与仪器
西门子德灵公司MicroScan WalkAway-40全自动微生物断定仪进行断定，药敏纸片选用英国OXOID公司产品，限制性内切酶ApaⅠ购自TaKaRa宝生物工程大连有限公司，溶葡萄球菌素、高密度琼脂糖和低熔点琼脂糖、溶菌酶、蛋白酶K购自生工生物（上海） 公司，Marker沙门菌Braendebrup血清型H9812由杭州邵逸夫医院俞云松教授惠赠。CHEP-MAPPER 脉冲电泳仪、Universal HoodⅡ型凝胶成像仪均为BIO-RAD 公司产品，DK-8D型电热恒温水槽购自上海精宏公司，Rotamax 420摇床为Thermo公司产品。
1.3 别离断定及药敏实验
将从临床搜集的合格标本中别离的可疑菌落行革兰染色、触酶实验、血浆凝结酶实验，并用WalkAway-40全自动细菌断定仪断定并检测各菌株对常用抗菌药物的灵敏性，一起用头孢西丁纸片涣散法及苯唑西林MIC法挑选MRSA菌株。严厉依照规范操作程序进行。判别规范参照CLSI 2010年版；质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213。
1.4 CA-MRSA的挑选
参照Fridkin等[5]主张根据临床材料挑选CA-MRSA，即从门诊或入院48h内别离搜集的MRSA，且该患者近期无长时刻住院病史。契合上述条件的将被可疑为CA-MRSA临床株。
1.5 MRSA临床菌株的PFGE
参照文献[6]，细菌的包埋；细胞壁的裂解；蛋白酶K消化；内切酶对细菌DNA的消化；加样及电泳；凝胶成像仪下查询成果，摄影。
1.6 PFGE条带的解说
经过目测断定其带型之间的联系，选用Tenover 等[7]提出的规范进行分型。酶切图谱间有相同的条带数，且相应条带巨细相同，能够为是同一型别；因为骤变、刺进、缺失或倒置的遗传改动导致1～3条条带有差异，能够为是严密相关，定为亚型；带型中4～6条条带有差异为或许相关，能够为是不同型别；7个或更多个条带有差异，能够为在盛行病学上无相关性。
1.7 统计学办法
对CA-MRSA 组与HA-MRSA 组对立菌药物的灵敏性进行统计学剖析，选用χ2查验，P<0.05 表明差异有统计学含义。
2 成果
2.1 HA-MRSA和CA-MRSA对立菌药物的耐药率
根据临床材料对60株MRSA进行挑选，取得17株疑似CA-MRSA（28.33%）及43株HA-MRSA（71.67%）。HA-MRSA和CA-MRSA对立菌药物的耐药率比较详见表1。
表1 CA-MRSA与HA-MRSA对立菌药物的耐药率比较（%）
2.2 60株MRSA临床别离株经PFGE分型
成功分型48株，型别共13种，命名从A型～M型（图3），其间A型3种亚型共6株，B型2种亚型共5株，C型2株，D型2株，E型6株，F型4株，G型2种亚型共6株，H型2株，I型2种亚型共2株，J型5株，K型2株，L型3株，M型3株。这13种型别均有4条或4条以上电泳条带不同，能够为无同源联系的发出克隆。同一型别菌株有不超越3条电泳条带差异，能够为是同源克隆。部分PFGE成果见图1。
图1 MRSA部分临床菌株PFGE电泳图
1～13为MRSA临床菌株，M为沙门菌Braendebrup血清型H9812endprint
从成功分型的48株MRSA菌株型别来看，这批菌株的同源分型较为涣散，没有典型的院内盛行克隆株，相对较多的A型、E型、G型菌株数也只要6株，其他分型的菌株数均不超越6株。HA-MRSA菌株在每种型中均有呈现，其间B型和G型的HA-MRSA菌株较多。CA-MRSA散布在7种型傍边，其间A型呈现3株，E型呈现5株。
2.3 PFGE不同型别在3年时刻内的改变趋势
本研讨搜集MRSA菌株时刻为2009年1月～2011年6月，期间每年别离到的MRSA菌株数逐年上升， 2009年别离12株，均匀月别离菌株仅1株，2010年别离26株，均匀月别离菌株到达2.2株，而2011年上半年就别离到22株，均匀月别离菌株到达3.7株。PFGE的分型成果显现，克隆分型数有逐年增多的趋势，2009年呈现5种分型，到2010年分型数就到达了9种， 2011上半年也已到达9种，那些新呈现的分型应引起特别注重。B型和E型两种分型3年时刻均有呈现，应加强对这种长时刻盛行克隆的监测作业。见图2。
图2 PFGE不同型别在3年时刻内的改变趋势
3 评论
MRSA已成为医院感染的重要病原菌之一[8]，感染多见于有严峻根底疾病、免疫功用低下并运用侵入性操作和广谱抗生素者[9]。本研讨中， HA-MRSA占别离MRSA中的71.67%（43/60），阐明院内感染仍是最首要的MRSA菌株来历，因而，为操控MRSA的院内感染，做好阻隔、消毒办法，合理运用抗生素，严厉执行医院感染操操控度是十分必要的[10]。Cepeda等[11]的研讨早已证明，加强阻隔等防备办法可有用堵截MRSA的传达、下降其感染率。CA-MRSA占一切MRSA菌株的28.33%，高于章锐锋等报导的15.3%[12]，低于温洪伟等报导的42%[13]，这或许与地域性和患者来历有关。从药敏成果剖析，一切MRSA菌株对一切β内酰胺类抗生素高度耐药，对大环内酯类、克林霉素类和四环素类等抗菌药物的耐药率>50.0%，而对万古霉素、呋喃妥因、奎奴普汀/达福普汀、利奈唑胺和替考拉宁彻底灵敏。所以，万古霉素仍是医治MRSA所造成的严峻全身性感染的首选药物，奎奴普汀/达福普汀、利奈唑胺和替考拉宁可作为万古霉素医治作用欠佳时的备选药物，而呋喃妥因现在仅用于医治下尿路感染性疾病。别的，咱们还发现，在对左氧氟沙星和利福平的灵敏性上两组菌株有显着差异，CA-MRSA的灵敏性高于HA-MRSA，这与一些报导不彻底相符，或许与不同区域存在不同的抗菌药物的挑选压力有关。
为了解感染源头、传达途径以及克隆株中占主导地位的菌株类型，对置疑MRSA盛行株进行盛行病学研讨是十分必要且是遏止其迸发盛行的要害，为此人们开发了很多种盛行病学监测的手法，现在MRSA分子盛行病学监测的办法首要有脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis，PFGE）、金黄色葡萄球菌A 蛋白基因（spa）分型、葡萄球菌染色体mec耐药盒（staphylococcal cassette chromosome mec，SCCmec）分型、多位点序列分型（multilocus sequence typing，MLST）等[14]。PFGE 是建立在限制性内切酶多态性剖析根底上的分型技能，具有分辨率高、费用相对较低一级特色，常用于短时刻、小规模的盛行病学查询[15]。本研讨所进行MRSA的分子盛行病学查询规模限制在医院内，因而选用PFGE的办法能够明晰明确地反映院内菌株的盛行克隆特色。PFGE分型电泳条带相差1～3条，能够为是同一克隆型菌株。从PFGE分型的成果来看，院内别离60株MRSA没有呈现大规模的盛行克隆，PFGE所分的型别较散，共有A型～M型13种，每种型别菌株数最多也仅为6株，有4种型别存在2种以上的亚型。HA-MRSA在各种型别上均有散布，没有显著性的差异，CA-MRSA因为菌株数较少而散布在7种型别，其间A型和E型菌株数较多，但没有显着会集趋势。MRSA菌株的盛行在院内有逐年增多的趋势，在一切别离到的60株MRSA菌株中，2009年别离12株，均匀月别离菌株仅1株，2010年别离26株，均匀月别离菌株到达2.2株，而2011年上半年就别离到22株，均匀月别离菌株到达3.7株。PFGE的分型成果显现，克隆分型数也有逐年增多的趋势，对一些长时刻呈现的同源克隆分型，应加强监测，采纳切实可行的院感操控作业。
MRSA很有或许经过医护作业人员的手及鼻腔传达给患者，或许在运用侵入性医疗器械时发作穿插感染。因而，加强医护人员的感染操控观念，使用准确、牢靠且分辨率强的分型技能加强MRSA感染监控至关重要。
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