Twist2、β—cadherin、E—cadherin在喉鳞状细胞癌中的表达及其相关性剖析
杨文婧 赵瑞力
[摘要] 意图 评论喉鳞状细胞癌安排中Twist2、β-cadherin、E-cadherin的表达及其含义。 办法 使用免疫安排化学S-P法检测Twist2、β-cadherin、E-cadherin在48例喉鳞状细胞癌安排及30例癌旁正常安排中的表达状况，剖析其在不同安排中的相互联系及与喉鳞状细胞癌临床参数的联系。 成果 Twist2、β-cadherin、E-cadherin在喉鳞状细胞癌及癌旁正常安排中的阳性表达率比较差异有计算学含义（P<0.01）；喉鳞状细胞癌中Twist2、β-cadherin及E-cadherin的阳性表达率在有无淋凑趣搬运、临床分期中差异有计算学含义（P<0.05或P<0.01）；在不同临床分型及年纪间差异无计算学含义（P>0.05）；喉鳞状细胞癌中Twist2的阳性表达与β-cadherin的阳性表达呈负相关（r=-0.434，P=0.005），与E-cadherin的阳性表达亦呈负相关（r=-0.344，P=0.034）。 定论 Twist2与β-cadherin、E-cadherin在喉鳞状细胞癌发作、滋润及搬运进程中起重要效果，Twist2与β-cadherin、E-cadherin的协同效果或许影响喉鳞状细胞癌的滋润和搬运。
[关键词] 喉鳞状细胞癌；Twist2；β-cadherin；E-cadherin；免疫组化
[中图分类号] R739.65 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）08（c）-0004-05
[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significances of Twist2，β-cadherin and E-cadherin in LSCC. Methods The expression of Twist2，β-cadherin and E-cadherin were detected by immunohistochemistry S-P method in 48 tissue LSCC and 30 tumor-adjacent normal tissue.The relationship between three factors and clinical pathological features of LSCC were investigated. Results The differences of the positive rates of Twist2，β-cadherin and E-cadherin in LSCC and tumor-adjacent normal were statistically significant （P<0.01）；the positive expression rates of Twist2，β-cadherin and E-cadherin in lympha node metastasis，clinical stage in LSCC were statistically significant （P<0.05 or P<0.01）；no statistically significant difference between the different clinical type and age groups（P>0.05）.The positive expression of Twist2 was negatively related to that of β-cadherin （r=-0.434，P=0.005），and also negatively related to that of E-cadherin （r=-0.344，P=0.034）. Conclusion Twist2，β-cadherin and E-cadherin play important role in the occurrence，infiltration and metastasis of laryngeal squamous cell carcinoma.The synergistic effect of Twist2，β-cadherin and E-cadherin may have some effects on the infiltration and metastasis of laryngeal carcinoma.
[Key words] Laryngeal squamous cell carcinoma；Twist2；β-cadherin；E-cadherin；Immunohistochemistry
肿瘤的发作、开展是一个多基因、多进程的进程。同其他恶性肿瘤相同，喉鳞状细胞癌的发作也是多基因、多要素、多条途径一起参加的杂乱进程，抑癌基因失活与癌基因的激活并存，终究导致了正常细胞成长和分解失掉操控，所以，现在从基因水平上了解喉鳞状细胞癌得到人们的高度重视。Twist2是碱性Helix-loop-helix（b-HLH）蛋白宗族中的重要一员，近年来开端被重视。国内外研讨发现，Twist2与上皮间质转化的发作及肿瘤的侵袭与搬运有密切联系。但在与喉鳞状细胞癌的相关性研讨还没有见报导。本试验选用免疫组化S-P法检测喉鳞状细胞癌及癌旁正常安排中的Twist2、β-cadherin及E-cadherin蛋白的表达状况，评论其在喉鳞癌的发作、滋润及搬运中的效果及三者的相关性。
1 材料与办法
1.1 一般材料
搜集48例喉鳞状细胞癌安排及癌旁正常安排30例，均来自于沧州市人民医院耳鼻喉科2010年2月～2013年5月的喉鳞状细胞癌手术切除标本和手术切除的距安全切缘1 cm以上的癌旁正常安排，并均经过病理查看断定。本研讨现已医院道德委员会经过。一切喉癌患者术前都未行放、化疗，临床材料完好。喉癌状细胞患者中有淋凑趣搬运者24例，无淋巴搬运者24例；高分解（G1级）13例，中分解（G2级）19例，低分解（G3级）16例；Ⅰ+Ⅱ期患者18例，Ⅲ+Ⅳ期患者30例；声门上型17例，声门型31例。年纪41～80岁，中位年纪60.2岁。
1.2 首要试剂
Twist2鼠单克隆抗体（Twist2 C1a：sc-81417，Santa Cruz Biotechnology Inc）；β-cadherin、E-cadherin鼠单克隆抗体（ZM-0094，北京中衫金桥生物技术有限公司）；鼠二抗免疫组化试剂盒（SP-9002，北京中衫金桥生物技术有限公司）；DAB显色液（ZLI-9032，北京中杉金桥生物技术有限公司）。
1.3 办法
所选标本均制成白腊标本，4 μm接连切片，一抗所选浓度Twist2、β-cadherin鼠单克隆抗体1∶100；E-cadherin鼠抗人单克隆抗体1∶50。选用免疫安排化学S-P法，严格遵守操作进程进行试验。设置PBS替代一抗为阴性对照，作为质量操控规范，癌旁正常安排为正常对照组。
1.4 成果断定
Twist2在细胞质中阳性上色，阳性上色细胞会出现片状或颗粒状的胞质。成果选用半定量记分法断定[1]，按阳性上色程度、阳性细胞所占份额别离评分，再用两者的乘积来断定成果：<4分为阴性表达，4～12分为阳性表达。
β-cadherin、E-cadherin在细胞膜上阳性上色，阳性细胞会出现呈棕黄色颗粒状或线状均匀完好的胞膜上色。断定成果参阅Fromowitz评分规范[2]，选取5个高倍视界（×400）得出阳性细胞百分率；再依据阳性细胞出现的染色强度予以记分，最终将两项得分相加：<3分为阴性表达，≥3分为阳性表达。
1.5 计算学办法
所得数据均经Excel收拾后选用SPSS 19.0计算软件进行剖析。计数材料以率标明，选用χ2查验。相关性选用Spearman等级相关剖析。以P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 Twist2在喉鳞状细胞癌及癌旁安排中的表达
Twist2在喉鳞状细胞癌中阳性表达率为58.33%（28/48），高于癌旁正常安排中阳性表达率，差异有计算学含义（16.67%，5/30）（P<0.01）（表1）。在喉鳞状细胞癌中，Twist2在存在淋凑趣搬运的病例组（N+）的阳性表达率（83.3%）显着高于无淋凑趣搬运的病例组（N0）的阳性表达率（33.3%），差异有计算学含义（P<0.05）。依据TNM分期，喉鳞状细胞癌Ⅰ+Ⅱ期病例组的阳性表达率（22.2%）显着低于Ⅲ+Ⅳ期病例组（80.0%），差异有计算学含义（P<0.05），而与肿瘤病理学分级、临床分型及年纪分组无关（P>0.05）（表2）。
β-cadherin在喉鳞状细胞癌中阳性表达率为35.42%（17/48），低于癌旁正常安排中阳性表达率（100.00%，30/30），差异有计算学含义（P<0.01）（表1）。在喉鳞状细胞癌中，β-cadherin在存在淋凑趣搬运的病例组（N+）的阳性表达率（16.7%）显着低于无淋凑趣搬运的病例组（N0）的阳性表达率（54.2%），差异有计算学含义（P<0.05）。依据TNM分期，喉鳞状细胞癌Ⅰ+Ⅱ期病例组的阳性表达率（55.6%）显着高于Ⅲ+Ⅳ期病例组（23.3%），差异有计算学含义（P<0.05），而与肿瘤病理学分级、临床分型及年纪分组无关（P>0.05）（表2）。
E-cadherin在喉鳞状细胞癌中阳性表达率为22.92%（11/48），低于癌旁正常安排中阳性表达率（100.00%，30/30），差异有计算学含义（P<0.01）（表1）。在喉鳞状细胞癌中E-cadherin的表达与淋凑趣搬运（N+组低于N0组，P<0.01）、临床分期（Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期，P<0.01）和病理分级（G2+G3级低于G1级，P<0.01）相关，而与临床分型及年纪分组无关（P>0.05）（表2）。Twist2、β-cadherin和E-cadherin在喉鳞状细胞癌及癌旁正常安排中的表达见图1～图3。
2.2 Twist2与β-cadherin、E-cadherin在喉鳞状细胞癌中的相关性
在48例喉癌中，Twist2、β-cadherin在5例喉鳞状细胞癌安排中均呈阳性表达，Twist2、β-cadherin在8例喉鳞状细胞癌中均呈阴性表达，Twist2表达阳性但β-cadherin表达阴性的喉鳞状细胞癌有23例，β-cadherin表达阳性但Twist2表达阴性的喉鳞状细胞癌有12例。Spearman相关剖析显现，Twist2与β-cadherin呈负相关表达（r=-0.434，P=0.005）。
在48例喉鳞状细胞癌中，Twist2、E-cadherin在3例喉鳞状细胞癌安排中均呈阳性表达，Twist2、E-cadherin在12例喉鳞状细胞癌中均呈阴性表达，Twist2表达阳性但E-cadherin表达阴性的喉鳞状细胞癌安排有25例，E-cadherin表达阳性但Twist2表达阴性的喉鳞癌安排有8例。Spearman相关剖析显现，Twist2与E-cadherin呈负相关表达（r=-0.344，P=0.034）。
3 评论
在胚胎的发育进程中，上皮细胞之所以会躲避安排结构所构成的空间约束，是因为它会改变成另一种愈加适宜的细胞移动表型——间充质表型，这个进程即为上皮-间充质转型（EMT）。现在研讨发现，EMT可以使不具有搬运潜力和侵袭性的非恶性肿瘤细胞获取侵袭的才能，搬运至其他器官。EMT被基质细胞外信号发动，这包含细胞外基质的组成成分和成长因子，EMT被EMT转录因子的激活物调理，如Twist1、Snail、Slug、ZEB1、ZEB2[3-6]。国外研讨标明，Twist2与Twist1相似，可诱导EMT的发作，导致肿瘤的侵袭及搬运[7]。最近研讨发现，Twist2在卵巢癌中表达上调，很或许经过促进EMT改变，然后使间叶细胞标志物Vimentin、fibronectin表达增多，继而添加侵袭和搬运的才能[8]。Twist2与甲状腺癌、乳腺癌的表达在国内外有相关报导[9-17]，但其在喉鳞状细胞癌中的表达没有研讨。本试验显现，Twist2在喉鳞癌安排中的阳性表达率显着高于癌旁正常安排中的阳性表达率（P<0.01）。在喉鳞癌安排中Twist2阳性表达与淋凑趣搬运及TNM临床分期相关（P<0.05），但在临床分型、肿瘤病理学分级及年纪分组中差异无计算学含义（P>0.05）。此成果与毛宇彬等[8]报导的卵巢癌中Twist2的基因表达成果相一致。由此揣度Twist2高表达的鳞状细胞癌安排具有更强的侵袭才能，Twist2或许成为判别喉鳞状细胞癌防备或预后的检测目标之一。
β-cadherin的羧基结尾与E-cadherin胞内区结合，氨基结尾与α-cadherin衔接可构成E-cadherin/cadherin复合体然后安稳E-cadherin结构，促进细胞间的黏附衔接。本试验发现，喉鳞状细胞癌中β-cadherin阳性表达显着低于癌旁正常安排，提示喉鳞状细胞癌的搬运、侵袭才能越高，β-cadherin的阳性表达率越低。焦阳等[18]研讨发现，在肝细胞癌中β-cadherin高表达，而且与临床分期、门静脉栓、肝外搬运显着相关，与本试验成果相吻合。本试验成果标明，喉鳞状细胞癌中E-cadherin阳性表达显着低于癌旁正常安排，提示喉鳞状细胞癌的搬运、侵袭才能越高，E-cadherin的阳性表达率越低。Rodrigo等[19]研讨发现，在声门上型喉癌安排中E-cadherin表达下调与喉癌患者的临床参数，如颈凑趣搬运、分期、安排学分解程度及肿瘤复发均呈负相关，提示检测喉癌患者的E-cadherin的表达关于评价病况及制定临床医治计划有重要含义。
EMT进程中，上皮细胞阅历了重要的表型改变，E-cadherin和其他上皮细胞功用的组成结构表达的缺失及侵袭特性使它们搬运至细胞外基质[20]。Twist2构成Twist1/Twist2/Mi2/NuRD蛋白复合物，其与E-box的发动子结合，下调E-cadherin的表达，导致EMT的发作[19]。β-catenin与E-cadherin链接构成复合体，对细胞间质起到安定效果[21]，当β-catenin表达反常或功用损失时，与E-cadherin的链接就会损失，然后导致肿瘤的发作和侵袭[22]。本试验对Twist2、β-cadherin和E-cadherin三者的相关性剖析发现，Twist2与E-cadherin及β-cadherin均呈负相关。Twist2参加喉鳞状细胞癌的发作、搬运及滋润或许经过上调E-cadherin一起下调β-cadherin介导发作EMT。联合检测喉鳞状细胞癌安排中Twist2、β-cadherin和E-cadherin的表达状况对患者的治疗与预后具有指导含义。
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（收稿日期：2015-06-11 本文修改：卫 轲）