保枫堂抑菌提取物 常春卫矛提取物体外及体内抑菌作用的实验研讨

罗宇东++++张强++++++蒋林++++++李娜

[摘要] 意图 研讨常春卫矛水提物、醇提物及5种不同溶剂提取物的抑菌活性。 办法 体外抑菌实验选用试管二倍稀释法联合琼脂平板法，调查常春卫矛水提物、醇提物及5种不同溶剂（石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇）提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌的体外抑菌活性；体内抑菌实验以金黄色葡萄球菌为指示菌种，小鼠灌胃别离给予常春卫矛水提物、醇提物14 d，腹腔打针金黄色葡萄球菌，经过调查小鼠逝世率衡量常春卫矛提取物的体内抑菌活性。 成果 体外抑菌实验显现，常春卫矛水提物及醇提物均对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌有必定程度的按捺效果，5种不同溶剂提取物中，甲醇、正丁醇、乙醇乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌有必定程度的按捺效果，石油醚、氯仿提取物无显着按捺效果。体内抑菌实验显现，常春卫矛水提物低（16.0 g/kg）、高（32.0 g/kg）剂量组、醇提物高剂量组（32.0 g/kg）有显着下降金黄色葡萄球菌感染小鼠逝世率的效果（P<0.05）。 定论 常春卫矛提取物具有必定程度的抑菌效果。

[关键词] 常春卫矛；提取物；体内；体外；抑菌效果

[中图分类号] R282[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）06（c）-0009-04

Experimental study in vitro and in vivo antibacterial effect of the extract of Euonymus hederaceus

LUO Yu-dong ZHANG Qiang▲ JIANG Lin LI Na

Pharmaceutical Factory of Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning 530023,China

[Abstract] Objective To investigate antibacterial activity of Euonymus hederaceus water extract,alcohol extract and 5 different solvent extracts. Methods In vitro inhibitory effect of Euonymus hederaceus water extract,alcohol extract and different solvent extracts(petroleum ether,chloroform,ethyl acetate,n-butanol,methanol)on Staphylococcus aureus,Escherichia coli,Salmonella and Pseudomonas aeruginosa were assayed by the method of tube double dilution method combined with agar plate method.In vivo inhibitory effect of the Euonymus hederaceus water and alcohol extraction with Staphylococcus aureus as index,the mice were given Euonymus hederaceus water and alcohol extraction by gavages for 14 days,then the mice were intraperitoneally injected with Staphylococcus aureus suspension.In vivo antibacterial activity of Euenymus hederaceus watder and alcohol extraction was detected respectively by observing the mortality rate in mice. Results Bacteriostatic test in vitro showed that Euonymus hederaceus water extract and alcohol extract on Staphylococcus aureus,Escherichia coli,Salmonella,Pseudomonas aeruginosa had certain degree of restrained.Different solvent extracts of methanol,ethanol,n-butanol,ethyl acetate extract against Staphylococcus aureus,Escherichia coli,Salmonella,Pseudomonas aeruginosa had certain degree of restrained,no obvious inhibition effect of petroleum ether,chloroform extract.Bacteriostatic test in vivo showed that the water extract of Euonymus hederaceus low dose group(16.0 g/kg),high dose group(32.0 g/kg),high dose group of alcohol extract(32.0 g/kg)of the death rate of mice infected with Staphylococcus aureus was markedly decreased. Conclusion Euonymus hederaceus extract has a certain degree of bacteriostatic action.

[Key words] Euonymus hederaceus;Extraction;In vitro;In vivo;Bacteriostatic action

常春卫矛为卫矛科植物常春卫矛（Euonymus hederaceus Champ.Ex Benth）的根、树皮或叶，具有补肝肾、强筋骨、活血止血的成效，临床用于医治肾虚腰痛、缓慢腹泻、跌打损伤、月经不调。国内已展开了常春卫矛抗凝血、活血化瘀、抗炎、镇痛、抗疲劳、免疫增强等效果的药理研讨，但有关其抑菌效果的研讨没有见报导[1-3]。本研讨调查常春卫矛提取物的抑菌活性，为进一步拓展常春卫矛的运用规模供给实验根据。

1 材料与办法

1.1 药物与试剂

常春卫矛采自广西壮族自治区资源县，经广西中医药大学药用植物教研室韦松基教授鉴定为卫矛科植物常春卫矛的地上部分。阳性药：阿莫西林胶囊[中诺药业（石家庄）有限公司，国药准字H13021770，批号：257130477，规范：0.5 g]。养分琼脂培育基（北京三药科技开发公司，批号：111205）。养分肉汤培育基（北京三药科技开发公司，批号：121227）。培育基运用时按说明书制造。

1.2 仪器

HV-50主动高压灭菌器（日本Hirayama Manufacturing Corporation）、SW-CJ型超净工作台（苏净集团安泰公司）、SPX-150B-Z生化培育箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、AM100电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）、101-2电热恒温鼓风枯燥箱（上海跃进医疗器械厂）、RE-52A旋转蒸腾器（上海亚荣生化仪器厂）、恒温水浴锅（上海精细实验设备有限公司）。

1.3 菌株与动物

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠埃希菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、沙门菌（Salmonella）由广西中医药大学榜首隶属医院微生物实验室供给。昆明种小鼠，体质量（20±2） g，男女参半，清洁级，由广西医科大学实验动物中心供给，合格证号：SCXK桂2009-0002。

1.4 办法

1.4.1 常春卫矛提取物的制备①常春卫矛水提物（A）：药材破坏，用水煎煮2次，1 h/次，煎液过滤，滤液浓缩至浸膏（A），每克浸膏相当于2.0 g药材量，备用。②常春卫矛醇提物（B）：药材破坏，75%回流提取2次，1 h/次，提取液过滤，收回乙醇，浓缩至浸膏（B），每克浸膏相当于2.0 g药材量，备用。③常春卫矛五倍位提取物（C～G）：药材打成细粉，用60%乙醇浸泡3次，浸泡7 h/次，浸泡液过滤，滤液用旋转蒸腾仪减压浓缩至无醇味，浓缩液再顺次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，每种溶剂萃取3次，兼并萃取液，抽滤，滤液收回溶剂后减压枯燥，别离得到常春卫矛石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物；萃取后的剩下稠膏用甲醇溶解，蒸干，为甲醇提取物；每克甲醇（C）、正丁醇（D）、乙酸乙酯（E）、氯仿（F）、石油醚（G）提取物别离相当于14、50、300、200、700 g药材量。以上提取物均由广西中医药大学制药厂供给，临用时制造成实验所需浓度。

1.4.2 常春卫矛提取物体外抑菌实验［4-11］①菌液的制备：挑取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及沙门菌4个实验菌株的一般琼脂斜面培育基上的单个菌落数个，别离接种于2 ml肉汤管中，37℃培育18～24 h，用无菌生理盐水稀释到菌液浓度为1×106 CFU/ml，备用。②抑菌实验：试管二倍稀释法联合琼脂平板法测定常春卫矛系列提取物的最小抑菌浓度；取装有1 ml养分肉汤培育基试管若干支，按二倍稀释法，将常春卫矛提取物A、B、C、D、E、F、G从第1管进行稀释至第7管，稀释倍数别离为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，药物浓度别离为80、40、20、10、5、2.5、1.25 mg提取物/ml，每管加相应受试规范菌液各50 μl，充沛混均，置37℃培育箱培育18～24 h，考虑到提取物色彩较深，细菌成长后肉眼难以调查或调查的成果易呈现误差，因而再从每一管中取培育物10 μl转种养分琼脂平板培育基上，用L棒涂布，置37℃培育箱培育18～24 h，以不成长菌落的最高药物稀释度为该药物对该种细菌的最小抑菌浓度；平行做3次，以2次或3次相同成果为准。

1.4.3 常春卫矛提取物体内抑菌实验[12-13]①体内抑菌的预实验：取金黄色葡萄球菌备用菌液置无菌瓶中，用无菌生理盐水稀释成不同浓度（1×103～1×108 CFU/ml）的细菌悬液，将上述细菌悬液别离打针于小鼠腹腔，每浓度组6只，打针量0.5 ml，调查小鼠4 d内的逝世状况，选定使小鼠逝世率达80%的菌液浓度为实验打针浓度。②常春卫矛提取物体内按捺金黄色葡萄球菌的实验：取体质量18～22 g的小鼠70只，男女参半，按体质量随机分为7组，别离为模型对照组，常春卫矛水提物低（16.0 g/kg）、高（32.0 g/kg）剂量组，常春卫矛醇提物低（16.0 g/kg）、高（32.0 g/kg）剂量组，阿莫西林胶囊组（0.260 g/kg），每组16只。模型对照组灌胃等体积的蒸馏水，其他各组则灌胃相应的药物剂量。各组小鼠接连灌胃给药14 d后，腹腔打针预实验所断定的金黄色葡萄球菌接种浓度，调查并计算4 d内各组小鼠的逝世率，各组小鼠逝世率与模型对照组比较。

1.5 计算学处理

选用 Excel 2003软件进行数据的剖析和处理，计数材料选用χ2查验，以P<0.05为差异有计算学含义。

2 成果

2.1 体外抑菌实验成果

常春卫矛水、醇提取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌有按捺效果，水提物的最小抑菌浓度别离为2.5 mg提取物/ml、5 mg提取物/ml、40 mg提取物/ml、40 mg提取物/ml；醇提物的最小抑菌浓度别离为5 mg提取物/ml、2.5 mg提取物/ml、40 mg提取物/ml、40 mg提取物/ml（表1）。常春卫矛5种溶剂提取物中，甲醇、正丁醇、乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌有按捺效果，甲醇提取物的最小抑菌浓度别离为5 mg提取物/ml、2.5 mg提取物/ml、10 mg提取物/ml、10 mg提取物/ml；正丁醇提取物的最小抑菌浓度别离为5 mg提取物/ml、10 mg提取物/ml、40 mg提取物/ml、20 mg提取物/ml；乙酸乙酯提取物的最小抑菌浓度别离为10 mg提取物/ml、10 mg提取物/ml、40 mg提取物/ml、20 mg提取物/ml；氯仿、石油醚提取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌无显着按捺效果（表2）。

表2 常春卫矛5种溶剂提取物对各菌株最小抑菌浓度测定的成果

（mg提取物/ml）

2.2 体内抑菌实验成果

体内抑菌的预实验断定腹腔打针金黄色葡萄球菌接种浓度为1×107 CFU/ml（表3）。常春卫矛水提物低（16.0 g/kg）、高（32.0 g/kg）剂量组及醇提物高（32.0 g/kg）剂量组有显着下降金黄色葡萄球菌感染小鼠逝世率的效果（P<0.05）（表4）。

表3 小鼠腹腔打针金黄色葡萄球菌预实验的成果

表4 常春卫矛提取物对金黄色葡萄球菌感染小鼠的维护效果

与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

3 评论

卫矛属植物是一类重要的天然药用资源，在世界各地均有散布，在我国民间作为药物运用有悠长的前史，首要用于抗肿瘤、抗炎、抗菌等[14]。本文对常春卫矛提取物的体内及体外抑菌效果进行实验研讨，体外抑菌实验选用试管二倍稀释法联合琼脂平板法，调查常春卫矛水提物、醇提物及5种不同溶剂（石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇）提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌的体外抑菌活性，成果表明，常春卫矛水提物及醇提物均对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌有必定程度的按捺效果，5种不同溶剂提取物中，甲醇、正丁醇、乙醇乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌有必定程度的按捺效果，石油醚、氯仿提取物无显着按捺效果；体内抑菌实验，常春卫矛水提物低、高剂量组及醇提物高剂理组有显着下降金黄色葡萄球菌感染小鼠逝世率的效果（P<0.05）。

常春卫矛含有卫矛醇、齐敦果烷型五环三萜等成分，国内有关药效效果的物质基础研讨较少[15-17]。本研讨的体外抑菌实验提示，常春卫矛的水、醇、高极性（甲醇、正丁醇、乙醇乙酯）提取成分的抑菌效果较好，非极性（石油醚、氯仿）提取成分的抑菌效果不显着。常春卫矛是具有研讨、开发价值的广西壮、瑶特征药材，但抑菌效果还需进一步研讨。

[参考文献]

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[17]拂晓，蒋林，雷震鸣.常春卫矛农药残留及重金属含量的剖析[J].广西中医学院学报，2010，13（4）：46-48.

（收稿日期：2014-03-22本文修改：李亚聪）

常春卫矛含有卫矛醇、齐敦果烷型五环三萜等成分，国内有关药效效果的物质基础研讨较少[15-17]。本研讨的体外抑菌实验提示，常春卫矛的水、醇、高极性（甲醇、正丁醇、乙醇乙酯）提取成分的抑菌效果较好，非极性（石油醚、氯仿）提取成分的抑菌效果不显着。常春卫矛是具有研讨、开发价值的广西壮、瑶特征药材，但抑菌效果还需进一步研讨。

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（收稿日期：2014-03-22本文修改：李亚聪）

常春卫矛含有卫矛醇、齐敦果烷型五环三萜等成分，国内有关药效效果的物质基础研讨较少[15-17]。本研讨的体外抑菌实验提示，常春卫矛的水、醇、高极性（甲醇、正丁醇、乙醇乙酯）提取成分的抑菌效果较好，非极性（石油醚、氯仿）提取成分的抑菌效果不显着。常春卫矛是具有研讨、开发价值的广西壮、瑶特征药材，但抑菌效果还需进一步研讨。

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[17]拂晓，蒋林，雷震鸣.常春卫矛农药残留及重金属含量的剖析[J].广西中医学院学报，2010，13（4）：46-48.

（收稿日期：2014-03-22本文修改：李亚聪）