桂枝挥发油 含挥发油饮片桂枝饮片规范汤剂质量规范的树立及讨论
邓哲 冯伟红 章军 焦梦姣 张国瑗 王淑慧 程锦堂 刘安
[摘要]制备桂枝饮片规范汤剂并树立质量规范，为配方颗粒等临床非传统用药方式供给质量参照，一起也为含蒸发油的饮片规范汤剂研讨供给參考。从商场上搜集14批不同质量的桂枝饮片，在中药饮片规范汤剂制备准则根底上进一步完善提取工艺，制备桂枝饮片规范汤剂，核算出膏率、桂皮醛的搬运率、pH等参数，点评工艺安稳性；树立目标成分含量测定办法和特征图谱。成果标明桂枝饮片规范汤剂的出膏率为606%～895%，均匀出膏率为718%；桂皮醛搬运率为296%～543%，均匀搬运率为432%；pH 433～482。14批桂枝饮片规范汤剂特征图谱与对照特征图谱类似度均>09。该研讨树立的制备办法安稳、质量规范完善，适用于桂枝饮片规范汤剂质量点评。
[关键词]桂枝饮片； 蒸发油； 规范汤剂； 质量规范
[Abstract]To prepare Cinnamomi Ramulus pieces standard decoction and establish its quality standard， provide quality reference for formula granules and other clinic nontraditional forms of medicines， and lay a foundation for standard decoction research for the pieces containing essential oil 14 batches of Cinnamomi Ramulus pieces with different quality were collected from market and their extraction process was further improved based on the preparation principle of standard decoction to prepare the standard decoction of Cinnamomi Ramulus pieces Then its transfer rate of Cinnamaldehyde， dry extract rate and pH value were calculated to evaluate its process stability； and a method for chromatographic fingerprint and content determination was also established Results revealed that the dry extract rate for standard decoction of Cinnamomi Ramulus pieces was from 606%895%， with an average value of 718%； the transfer rate of cinnamaldehyde was at the range of 296%543%， with an average of 432%； and the pH value was at the range of 433482 The fingerprint similarities between 14 batches of standard decoction of Cinnmomi Rammulus pieces and reference fingerprint were all>09 The established method for standard decoction was stable and its quality standard was perfect， suitable for evaluating the quality of standard decoction of Cinnanomi Ramulus pieces
[Key words]Cinnamomi Ramulus pieces； volatile oil； standard decoction； quality standard
中药饮片规范汤剂是以中医理论为辅导、临床使用为根底，参阅现代提取办法，经规范化工艺制备而成的单味中药饮片水煎剂，用于标化临床用药，确保用药的准确性和剂量的一致性[1]。中药规范汤剂作为一种规范物质和规范系统，能够标化一切以水为溶媒的包含配方颗粒在内的新式用药方式。它能够有用的处理配方颗粒规范不一致而导致配方颗粒商场“乱”相的问题[2]。2016年8月5日国家药典委起草的“中药配方颗粒质量操控与规范拟定技能要求（征求意见稿）”也明确提出中药配方颗粒的一切药学研讨均须与规范汤剂进行比照，以确保与规范汤剂质量一致性。
桂枝来源于樟科植物肉桂Cinnamomun cassia Presl的枯燥嫩枝。其辛、温、甘，归心、肺、膀胱经，具有发汗解肌、温通经脉、助阳化气、平冲降气之成效[3]。临床多用于风寒伤风、脘腹冷痛、血塞经闭、关节痹痛、痰饮、水肿、心悸等症。现代药理研讨标明它有抑菌、抗炎、抗过敏、抗肿瘤、抗病毒、利尿、解热、镇痛、扩张血管等多种药理活性[4]。桂枝首要含有蒸发性成分、有机酸类、香豆素类等化学成分，其间以桂皮醛为主的蒸发性成分是其发挥药效的物质根底。据统计，它是《伤寒论》中继甘草临床使用第二多的药物。结合文献，有关规范汤剂研讨的报导首要会集在不含蒸发油的中药饮片上，如黄芩[5]、甘草[6]、白芍[7]、人参[8]、红花[9]、葛根[10]等。而关于含蒸发油、目标成分水溶性差的饮片鲜有文章报导。本文展开了桂枝饮片规范汤剂质量规范研讨，以期为含蒸发油类成分的中药饮片规范汤剂研讨供给参阅。
1资料
11仪器与试剂
Waters Alliance高效液相色谱仪（美国Waters公司，2695四元溶剂管理器，2996二极管阵列检测器，Empower 3色谱工作站），XS205型1/10万电子剖析天平（瑞士，梅特勒托利多仪器有限公司）；KQ250 DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；桂皮醛对照品（成都克洛玛生物科技有限公司，经HPLC面积归一化法测定，纯度> 98%，批号CHBG029），甲醇、乙腈均为HPLC级（美国，Fisher公司），水为娃哈哈纯净水，其他试剂为均剖析纯。
12样品
本研讨共搜集了14批桂枝饮片，其来源于商场上7家中药饮片企业，包含3个不同产地及不同质量的饮片。经DNA条形码判定，14批样品均为樟科植物肉桂C cassia的枯燥嫩枝。其详细信息见表1。
2办法与成果
21桂枝饮片桂皮醛含量测定
依照2015年版《我国药典》办法测定14批桂枝饮片中桂皮醛的含量，见表2。成果标明14批桂枝饮片均契合桂皮醛不得少于10%的定量要求。
22桂枝饮片规范汤剂的制备
将契合药典规范的饮片，在《中药规范汤剂研讨战略》一文中主张枝干皮藤类煎煮工艺的根底上，稍作改善，进行桂枝饮片规范汤剂的制备。其详细工艺参数为：取桂枝饮片100 g，加8倍量的水浸泡30 min后，置蒸发油提取器中提取2 h，接出蒸发油，水提液滤过，药渣再加7倍量的水，于蒸发油提取器中持续提取30 min，接出蒸发油，水提液滤过。兼并2次水提液，浓缩至适量，兼并2次提取的蒸发油，参加浓缩液中，并参加适量的聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温80），混匀，定容至500 mL，摇匀，得到规范为02 g·mL-1的桂枝饮片规范汤剂。
23桂枝饮片规范汤剂中桂皮醛含量测定
231色谱条件Chromegabond WR C18色谱柱（46 mm×250 mm，5 μm），乙腈（A）水（B），梯度洗脱（0 ～ 30 min，10% ～ 40% A；30 ～ 45 min，40% A），柱温30 ℃，流速1 mL·min-1，检测波长290 nm，进样量10 μL。在此条件下，供试品溶液中的桂皮醛与其他成分分離杰出，见图1。
232对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压枯燥器中枯燥36 h的桂皮醛对照品适量，精细称定，加甲醇制成每1 mL含24 μg的溶液，即得。
233供试品溶液的制备取桂枝饮片规范汤剂摇匀，精细汲取量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过022 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
234线性联系调查精细汲取232项下的桂皮醛对照品溶液02，2，3，4，5，6，7，8，9 mL，别离置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，按231项下办法进样，测定桂皮醛的峰面积，以桂皮醛的进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，得到回归方程Y=108×107X+325×104，R2= 0999 9，线性规模0024 0～108 μg。
235精细度试验取同一桂枝饮片规范汤供试品溶液，按231项下色谱条件办法接连进样6次，核算供试品溶液中桂皮醛的峰面积的RSD为020%，标明仪器精细度杰出。
236重复性试验平行制备6份桂枝饮片规范汤剂供试品溶液，按231项下色谱条件进样，成果桂枝饮片规范汤剂中桂皮醛的均匀含量为083 g·L-1，RSD 为11%，标明该办法的重复性杰出。
237安稳性试验取桂枝饮片规范汤剂供试品溶液，别离于供试品溶液制备后0，2，4，8，12，24 h按231项下色谱条件测定，核算桂皮醛的峰面积的RSD为030%，标明供试品溶液在制备后24 h内安稳。
238加样收回试验取已知含量的桂枝饮片规范汤剂（099 g·L-1），根据规范汤剂中桂皮醛的含量按约1∶1的量增加桂皮醛对照品（0495 9 mg），平行制备6份供试品溶液，按231项下色谱条件进行试验，核算供试品溶液中桂皮醛的均匀加样收回率为9520%，RSD为045%，标明该办法的准确度较好。
239样品测定精细汲取对照品溶液20 μL、桂枝饮片规范汤剂供试品5 μL按231项下色谱条件测定，按外标一点法核算桂皮醛含量，测定14个批次，每批次平行2份，成果见表2。
24桂枝饮片规范汤剂搬运率核算及其他参数测定
241搬运率核算以桂皮醛为目标，核算其搬运率，得出桂皮醛搬运率为296%～543%，均匀搬运率为432%，成果见表2。
242其他参数测定pH用pH计（sartorius PB10）测定，pH 433～482，成果见表2。出膏率取桂枝饮片规范汤剂适量，摇匀，精细汲取10 mL置已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃烘3 h，取出，置枯燥器中冷却30 min，称定质量，每批平行2份，出膏率为606%～895%，均匀出膏率为718%。成果见表2。
25特征图谱的树立
251色谱条件同231项色谱条件，稍有不同是特征图谱检测波长为254 nm。
252供试品溶液制备同233项下供试品溶液制备办法。
253精细度试验取同一批桂枝饮片规范汤剂（GZ09）供试品溶液，按231项下办法接连进样6次，以桂皮醛峰（7号峰）为参照峰，核算各共有峰相对保存时刻和相对峰面积的RSD，成果标明各峰相对保存时刻RSD<01%，相对峰面积RSD<20%，标明仪器精细度杰出。
254重复性试验平行制备6份桂枝饮片规范汤剂（GZ09）供试品溶液，按231项下办法进样，测定桂枝规范汤剂供试品溶液中各特征峰的保存时刻和峰面积。以桂皮醛峰为参照峰，核算各共有峰相对保存时刻和相对峰面积的RSD，成果标明各峰相对保存时刻的RSD<030%，相对峰面积的RSD<20%，标明该办法的重复性较好。
255安稳性试验取桂枝饮片规范汤剂（GZ09）供试品溶液，别离于供试品溶液制备后第0，2，4，8，12，24 h按231项下办法进样测定，以桂皮醛为参照峰，核算各共有峰相对保存时刻和相对峰面积的RSD。成果各峰相对保存时刻的RSD<020%，相对峰面积的RSD<19%，标明桂枝规范汤剂供试品溶液在24 h内安稳。
256样品检测与剖析别离取14批桂枝饮片规范汤剂，按233项下办法制备供试品溶液，再按251项下色谱条件别离测定，记载HPLC图，见图2。将14批供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱类似度点评系统软件（2004A），选用中位数法，时刻窗为01，进行类似度核算，见图3，表3。成果发现14批桂枝饮片规范汤剂与对照特征图谱类似度均>09，标明各批次桂枝饮片规范汤剂具有较好的一致性。
26工艺安稳性验证
取同一批饮片样品（GZ09），按22项下桂枝饮片规范汤剂制备办法平行制备3份规范汤剂试样，别离按233项下供试品溶液制备办法制备供试品，依照231项下色谱条件测定桂枝饮片规范汤剂中桂皮醛的含量，核算搬运率，并进行其他参数的测定。3次试验中桂皮醛的均匀质量分数为1012 g·L-1，RSD为95%；均匀搬运率为464%，
3评论
31不同质量的样品
本研讨搜集了广西、广东、湖北3个产地的桂枝饮片，以广西居多，其间广西既是道地产区也是主产区。一起这些桂枝饮片来源于7个简直涣散全国的不同厂家，包含有不同规范、不同生产日期的饮片。所研讨的样品基本能代表商场上一切流转的桂枝饮片。
32供试品处理调查
对桂枝饮片规范汤剂前处理要点调查了溶劑种类和稀释倍数。溶剂种类中调查了纯水、无水乙醇、甲醇3种溶媒，成果发现甲醇处理效果最优，测得的桂皮醛含量最高。稀释倍数调查了5，10，25，50倍，不同稀释倍数，桂皮醛含量挨近，10倍稍高点，因而挑选稀释10倍。所以桂枝饮片规范汤剂前处理为取1 mL样品，用甲醇稀释10倍。
33桂枝饮片外观形状与规范汤剂中目标成分含量、搬运率和出膏率的相关性
桂枝饮片现在首要是切斜片和切段2种方式。桂枝饮片的同外观形状是否直接影响到汤剂中桂皮醛含量、搬运率及出膏率？从研讨成果剖析，搬运率及出膏率与外观形状没有明显的联系，而与汤剂中桂皮醛含量相关。一般个小的桂枝饮片其汤剂中桂皮醛含量相对较高。这与药典规则的桂枝来源于嫩枝以及桂皮醛首要散布在桂枝皮部[11]成果相一致。一起，这也为感官辨别桂枝饮片质量供给了参阅。
34工艺改善
前期预试验中随机选取了GZ08样品，严厉依照《中药饮片规范汤剂研讨战略》给定的工艺参数，采纳回流提取，不独自提取蒸发油，别离制备浓缩前和浓缩后的样品，发现浓缩后桂皮醛的搬运率偏低，为104%；而浓缩前搬运率为462%。从中能够揣度，浓缩进程明显的影响桂皮醛的含量。为处理浓缩后搬运率偏低问题，经查文献[1214]，发现以桂皮醛为目标成分含量测守时，桂枝的提取大多是用蒸发油提取器提取或水蒸气蒸馏的办法。因考虑到水蒸气蒸馏一起会带有很多的水，后期或许仍是面对浓缩进程。因而，挑选了蒸发油提取器提取的办法。桂枝蒸发油是重油，因而选用重油蒸发提取器依照规范汤剂工艺参数提取。将所得的汤剂浓缩至适量，兑入提取出的蒸发油。通过提取蒸发油后兑入的办法，桂皮醛的搬运率与浓缩前适当。有文献报导[15]桂枝配方颗粒的研讨也需求独自提取出蒸发油，将提取出的蒸发油通过β环糊精包合后，然后浓缩、枯燥、制粒。因而，关于检测目标为蒸发性成分且含有蒸发油的，应针对种类特性，注重蒸发油的提取。关于一煎提取时刻的断定，根据文献[16]断定为2 h，加8倍水量，每100 g饮片可提出069 mL蒸发油。关于二煎提取时刻的断定，调查了20，30，60 min蒸发油的体积，成果30 min较为适宜。因而，断定一煎为2 h，二煎为30 min。
35出膏率问题
出膏率是指固体物得率，一般办法为取适量溶液，105 ℃烘3 h，置枯燥器冷却30 min，称定质量。而关于桂枝饮片，为快速简洁，仍能够选用这种办法。由于桂枝饮片提取的蒸发油量少，对出膏率的成果简直没有影响。可是，关于含蒸发油量多的饮片，有必要把溶液和蒸发油分隔，主张做法为取适量溶液（未兑入蒸发油），105 ℃烘3 h，置枯燥器冷却30 min，参加蒸发油，称定质量。这样就能够防止枯燥进程中蒸发油丢失而形成出膏率成果不恰当的问题。
36桂枝饮片规范汤剂的使用
为满意现代人日子便利、方便的需求，中药饮片呈现了多种立异方式，如超微颗粒、破壁饮片、配方颗粒。这些新式饮片形状上失去了传统饮片的辨别特征，内涵质量又缺失一致的点评规范，不利于商场监管和流转。中药饮片规范汤剂正是为了处理上述问题应运而生，它从定量和定性2个方面一起把控包含配方颗粒在内的新式用药方式质量。定量目标包含搬运率规模、出膏率规模、pH规模，它能为内涵质量点评供给合理的参照数值；定性目标为饮片规范汤剂特征图谱，它能从谱图信息上补偿对传统饮片的辨别。因而，定量和定性目标之间是相得益彰，一起构成了一个完好的质量规范点评系统。本文对桂枝饮片规范汤剂也侧重从定量和定性两方面加以研讨，树立了一套完好的桂枝饮片规范汤剂质量点评系统。因而，它对桂枝配方颗粒在内的新式饮片方式具有规范参照的效果。
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[责任编辑孔晶晶]