鱼腥草素钠片 鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌luxS，agr/RNAⅢ 影响的研讨
许甘霏+王晶晶+吴大强+官妍
[摘要] 細菌的集体感应及特异基因表达调控在细菌生物被膜构成中有十分重要的效果。luxS，agr均是表皮葡萄球菌集体感应调控中的要害基因，RNAⅢ是agr体系的效应器分子。为了点评鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌转录水平的影响，选用接连稀释法测定鱼腥草素钠、红霉素、万古霉素对表皮葡萄球菌的MIC；荧光定量PCR测定鱼腥草素钠及其与红霉素联用、万古霉素、红霉素等对表皮葡萄球菌效果后不一起间段luxS，agr/RNAⅢ的转录水平。成果标明1/2MIC，1/4MIC鱼腥草素钠，1/2MIC鱼腥草素钠+1/2MIC红霉素，1/4MIC鱼腥草素钠+1/4MIC红霉素，1/8MIC鱼腥草素钠+1/8MIC红霉素等在效果于ATCC 35984伊始，就可敏捷上调luxS 的表达，与阴性对照比较，存在显着差异（P<0.05）；在效果6，12，48 h后，鱼腥草素钠仍然存在对luxS的上调效果。鱼腥草素钠在MIC，1/2MIC浓度时对agr表达均有显着下调效果（P<0.05），1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用、1/4 MIC鱼腥草素钠与1/4MIC红霉素联用，在效果6，12，24 h等时间段对agr表达的下调效果也很显着（P<0.05）。鱼腥草素钠在MIC浓度时，对RNAⅢ表达亦有显着下调效果（P<0.05），1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用对RNAⅢ表达的下调效果也很显着（P<0.05）。提示鱼腥草素钠及其与红霉素联用，能够敏捷上调表皮葡萄球菌luxS转录水平的表达，在特定浓度下可下调agr/RNAⅢ的表达，具有按捺表皮葡萄球菌生物被膜菌之间的彼此黏附集合、按捺膜内养分和输水通道的构成、阻挠膜内细菌脱离、并按捺细菌外毒素构成等效果的或许。
[要害词] 表皮葡萄球菌；鱼腥草素钠；红霉素；集体感应；luxS；agr/RNAⅢ；生物被膜
[Abstract] Quorum sensing of bacteria and its specific gene expression regulation have a very important role in bacterial biofilm formation. LuxS and agr are the key regulatory genes in quorum sensing of Staphylococcus epidermidis，and RNA Ⅲ is the effector molecule of agr system. In order to evaluate the effects of sodium houttuyfonate in combination with erythromycin on the transcription level of S. epidermidis，serial dilution method was used to determine the MIC of sodium houttuyfonate，erythromycin and vancomycin on S. epidermidis，and fluorescent quantitative PCR method was used to detect the transcription levels of luxS，agr/RNAⅢ in different time periods after treatment on S. epidermidis by sodium houttuyfonate in combination with erythromycin，vancomycin，and erythromycin alone. Our results showed that in treatment by 1/2MIC，1/4MIC sodium houttuyfonate，1/2MIC sodium houttuyfonate +1/2MIC erythromycin， 1/4MIC sodium houttuyfonate+1/4MIC erythromycin，and 1/8MIC sodium houttuyfonate+1/8MIC erythromycin for ATCC 35984，they could rapidly up-regulate the expression of luxS of S. epidermidis from the beginning as compared with negative control，with significant differences （P<0.05）；furthermore，sodium houttuyfonate can still up-regulate the expression of luxS even after treatment for 6，12 and 48 h. Sodium houttuyfonate in MIC and 1/2MIC concentration can significantly down-regulate the expression of agr （P<0.05）；1/2MIC sodium houttuyfonate+1/2MIC erythromycin，1/4MIC sodium houttuyfonate+1/4MIC erythromycin，can also significantly down-regulate the expression of agr in 6 h，12 h and 24 h（P<0.05）. Sodium houttuyfonate in MIC，can significantly down-regulate the expression of RNA Ⅲ （P<0.05），and 1/2MIC sodium houttuyfonate+1/2MIC erythromycin can also significantly down-regulate the expression of RNAⅢ（P<0.05）. Therefore，our presented results showed that sodium houttuyfonate in combination with erythromycin can rapidly up-regulate the transcription of luxS of S. epidermidis，and can down-regulate the expression of agr/RNA Ⅲ in certain concentrations，and suggested that sodium houttuyfonate in combination of erythromycin could inhibit mutual aggregation between S. epidermidis and biofilm bacteria，inhibit membrane nutrition and formation of water transport channels，prevent separation of bacterial cells in biofilm，and inhibit the formation of bacterial exotoxin of S. epidermidis.
[Key words] Staphylococus epidermidis；sodium houttuyfonate；erythromycin；quorum sensing；luxS；agr/RNAⅢ；biofilm
以表皮葡萄球菌Staphylococus epidermidis（Se）为代表的凝结酶阴性的葡萄球菌是临床导致以生物资料为中心感染的首要致病菌之一，在假体植入、手术缝合部位、心脏瓣膜置换、留置导管、静脉中心导管等医源性感染灶中检出率较高。表皮葡萄球菌能否构成生物被膜（biofilm），是现在用来点评其是否具有致病性的最重要的目标[1]。细菌生物被膜是指细菌黏附于慵懒或活性实体外表，被本身排泄的胞外黏质物所包裹，具有高度组织化的多细胞细菌集体结构[2]。在难治性感染病灶中，简直都存在细菌生物被膜感染源。生物被膜结构受许多要素影响，有很杂乱的调理机制，如基因调控、成长的环境条件等。
集体感应（quorum sensing，QS）是指细菌经过本身发生的自诱导因子，去感知周围同类细菌的密度或多寡并调控基因表达的体系[3]。自Davies等发现[4] 细菌的QS及特异基因表达调控在细菌生物被膜构成中有着十分重要的效果以来，搅扰QS体系已成为研讨新式抗菌药的新方向，在新的抗感染医治发展中，是一种有吸引力的靶位点。葡萄球菌具有獨特和完善的QS体系，Xu等[5]经过构建和剖析表皮葡萄球菌△luxS骤变株，证明了luxS（luciferase，荧光素酶）经过AI-2（autoinducer-2，自诱导物-2）的细胞间信号转导，下调ica操纵子，影响PIA（polysaccharide intercellular adhesion，多糖胞间黏附素）的发生，因而按捺了表皮葡萄球菌生物被膜的构成；agr（accessory gene regulator，隶属基因调理子）亦是表皮葡萄球菌QS调控中的要害基因[6]，RNAⅢ是agr体系的效应器分子。
因为在感染灶的细菌一旦构成生物被膜，不只引发难以医治的感染，还易发生多重耐药。因而，怎么有用医治由生物被膜引起的相关感染，已成为临床抗感染研讨的重要课题。从我国传统中药中寻求有用抗生物被膜菌的相关药物，研讨中西药联用，以到达药物减量增效、下降毒副效果等办法，现在被以为都是可行的途径。
作者以往的研讨[7]已证明，亚抑菌浓度的鱼腥草素钠及其与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜构成有显着影响，对表皮葡萄球菌黏赞同代谢均有按捺效果，因而挑选鱼腥草素钠及其与红霉素联用，在不一起间段调查药物对悬浮状态下的产膜表皮葡萄球菌luxS，agr/RNAⅢ 转录水平的影响，以期从分子水平点评鱼腥草素钠及其与红霉素联用抗表皮葡萄球菌感染的效果，为中药及中西药联用医治表皮葡萄球菌引起的相关感染，供给研讨根据和实践参阅。
1 资料
1.1 菌株与培育基
ATCC 35984（表皮葡萄球菌产膜规范菌株，复旦大学上海医学院瞿涤教授奉送）；TSB培育基（胰蛋白胨大豆肉汤培育基，杭州微生物试剂有限公司）；MH液体培育基（杭州微生物试剂有限公司）。
1.2 药品与试剂
万古霉素规范品、鱼腥草素钠规范品、红霉素规范品（我国食品药品检定研讨院）；二甲基亚砜（天津市克复精细化工研讨所）；SYBR GreenⅠRT-PCR试剂盒（宝生物工程有限公司）；SYBR Premix Ex TaqⅡ（Tli RNaseH Plus）（宝生物工程有限公司）；其他所用试剂均为国产剖析纯。
1.3 仪器
紫外-可见分光光度计（上海龙尼科仪器有限公司）；PCR仪（Eppendorf）；凝胶成像体系 Tanon-1600（Tanon）；核酸电泳体系（Bio-Rad）；高速冷冻离心机（日立公司）；qRT-PCR仪（QuantStudio TM 6 Flex美国赛默飞世尔）：恒温摇床（上海智城剖析仪器制作有限公司）。
1.4 引物组成
根据NCBI中 ATCC 35984 gryB和luxS，agr，RNAⅢ的序列规划、组成的扩增引物序列见表1。
2 办法
2.1 鱼腥草素钠、万古霉素、红霉素对产膜表皮葡萄球菌MIC的测定
用MH液体培育基，以接连稀释法使每支试管2 mL培育基中药物的终浓度别离为128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25 mg·L-1，向各试管中参加200 μL 0.5 Mc菌液；另设空白对照（不含药物和菌液的培育基），阴性对照（只含有菌液而不增加药物的培育基），每组设置2个平行。37 ℃条件下恒温培育24 h，分光光度计法测A600，与空白对照比较得药物的MIC。
2.2 药物对悬浮状态下产膜表皮葡萄球菌的效果
2.2.1 菌细胞制备 取2 mL 0.5 Mc菌液，按1%的接种量接种于200 mL TSB液体培育基中，于37 ℃，150 r·min-1条件下培育；分光光度计测A600到达1.6时，8 000 r·min-1，4 ℃离心30 min，弃上清；别离用新鲜的TSB培育基200 mL重悬细胞。
2.2.2 药物处理 不增加药物（阴性对照），MIC万古霉素（阳性药对照），1/2MIC万古霉素（阳性药对照），MIC红霉素，1/2MIC红霉素，1/4MIC红霉素，MIC鱼腥草素钠，1/2MIC鱼腥草素钠，1/4MIC鱼腥草素钠，1/2MIC鱼腥草素钠+1/2MIC红霉素，1/4MIC鱼腥草素钠+1/4MIC红霉素，1/8MIC鱼腥草素钠+1/8MIC红霉素。
2.2.3 药物处理后菌细胞的保存 阴性对照及参加药物的各组菌液，持续于37 ℃，150 r·min-1培育；在1，6，12，24，48 h别离取样10 mL于10 mL Ep管（DEPC水处理并灭菌）中，12 000 r·min-1，4 ℃离心8 min，弃上清，-70 ℃保存备用。
2.3 表皮葡萄球菌RNA抽提
取冻存于-70 ℃的菌体，加液氮研磨菌体至粉末状；参加350 μL裂解液RL，涡旋振动30 s，12 000 r·min-1，4 ℃离心5 min；取上清参加250 μL无水乙醇，转入吸附柱CR3中（吸附柱放在搜集管中），12 000 r·min-1，4 ℃离心1 min；向吸附柱CR3中参加350 μL去蛋白液RW1，12 000 r·min-1，4 ℃离心1 min，弃废液；再向吸附柱CR3中心参加80 μL DNaseⅠ工作液，放置10 min；参加350 μL去蛋白液RW1，12 000 r·min-1，4 ℃离心1 min；参加500 μL漂洗液RW，放置2 min，12 000 r·min-1，4 ℃离心1 min（重复该进程1次），弃废液。吸附柱放置5 min，彻底晒干吸附柱资猜中剩下的漂洗液；将吸附柱CR3转入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜中心悬空滴加40 μL RNase-Free ddH2O，放置2 min，12 000 r·min-1，4 ℃离心2 min，得到RNA溶液。-70 ℃保存备用。
2.4 意图基因表达的测定
选用荧光定量PCR检测产膜表皮葡萄球菌ATCC 35984 的luxS，agr，RNAⅢ转录水平。
2.4.1 将RNA逆转录为DNA 去除基因组DNA反响：按SYBR GreenⅠRT-PCR试剂盒说明书操作。反响体系均为10 μL，包含：5×gDNA Eraser 缓冲液2 μL，gDNA Eraser 1 μL，Total RNA 小于1 μg，剩下用RNase Free dH2O补至10 μL。反响条件为42 ℃反响2 min。
逆转录反响：逆转录反响体系均为20 μL，包含：上一进程的反响液10 μL，PrimeScript RT Enzyme MixⅠ1 μL，RT Primer Mix 4 μL，5×PrimeScript buffer 2（for Real time） 4 μL，RNase Free dH2O 1 μL。反响条件为37 ℃反响15 min，85 ℃反响5 s。反响产品均为cDNA。
2.4.2 荧光定量PCR检测表皮葡萄球菌ATCC 35984菌株luxS，agr，RNAⅢ转录水平 别离用反转录取得的cDNA作为模板，进行荧光定量PCR以检测内参基因gryB和意图基因luxS，agr，RNAⅢ的转录水平。每样本做3复孔，一起设置阴性对照。依照SYBR Premix Ex TaqⅡ（Tli RNase H Plus）试剂盒说明书操作，引物参照表1并配制成10 μmol·L-1。反响体系为20 μL，包含：SYBR Premix Ex TaqⅡ（Tli RNaseH Plus）（2×）10 μL，10 μmol·L-1引物（正向、反向）各0.8 μL，ROX Reference DyeⅡ（50×）0.4 μL，RT反响液（cDNA溶液）2 μL，dH2O（灭菌蒸馏水）6 μL。实时荧光定量PCR扩增仪QuantStudio TM 6 Flex进行检测。扩增条件：95 ℃预变性30 s；95 ℃变性5 s，60 ℃退火34 s，共40個循环，60 ℃搜集荧光信号。最终做融解曲线剖析，断定反响产品的单一性。
2.5 数据剖析
2.5.1 qRT-PCR成果核算 主动调理基线（base line）至适合处，各扩增曲线与阈值线的交叉点对应的横坐标即为Ct值，根据规范曲线上浓度与Ct值的对应联系，可求出各待测标本的初始浓度。以gryB作内参基因，luxS/gryB，agr/gryB，RNAⅢ/gryB作为衡量luxS，agr，RNAⅢ转录水平的目标。
2.5.2 计算学剖析 将设置的每个时间段未经药物处理的ATCC 35984 luxS，agr，RNAⅢ 的表达量作为“1”，核算出相对量，再用SPSS 10.0计算软件进行单要素方差剖析，两样本之间进行t查验，数据以±s标明，P<0.05为差异有计算学含义。
3 成果
3.1 鱼腥草素钠、红霉素、万古霉素对产膜表皮葡萄球菌MIC的成果
鱼腥草素钠对ATCC 35984 MIC为64 mg·L-1，万古霉素对ATCC 35984 MIC为8 mg·L-1，红霉素对ATCC 35984 MIC为8 mg·L-1。
3.2 药物干涉后意图基因表达的成果
3.2.1 药物对luxS表达的影响 1/2MIC，1/4MIC鱼腥草素钠，1/2MIC鱼腥草素钠+1/2MIC红霉素，1/4MIC鱼腥草素钠+1/4MIC红霉素，1/8MIC鱼腥草素钠+1/8MIC红霉素等在效果于ATCC 35984伊始，就可敏捷上调luxS的表达，与阴性对照比较，存在显着差异（P<0.05）；在效果6，12，48 h后，鱼腥草素钠仍然存在对luxS的上调效果，见图1。
3.2.2 药物对agr表达的影响 MIC，1/2MIC的鱼腥草素钠在效果的各时间段对agr表达均有显着下调效果（P<0.05），见图2；1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用、1/4 MIC鱼腥草素钠与1/4MIC红霉素联用，在效果6，12，24 h等时间段，对agr表达的下调效果也很显着（P<0.05），见图2。
3.2.3 药物对RNAⅢ表达的影响 MIC的鱼腥草素钠在效果的各时间段对RNAⅢ表达亦有显着下调效果（P<0.05），见图3；1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用对RNAⅢ表达的下调效果也很显着（P<0.05），见图3。
4 评论
表皮葡萄球菌生物被膜的构成是个动态进程。首先是由菌体外表疏水性蛋白或多糖黏附素对生物资料的初始附着，构成细菌群落；随后细菌彼此集合，构成生物被膜[8]。其间，PIA是细菌生物被膜构成的集合阶段所必需的物质[9]。Ica基因座编码PIA，由icaA，icaD，icaB，icaC 4种基因组成，构成操纵子icaADBC；其间，icaA在PIA的构成中起决定效果。
luxS在多种革兰阳性菌和革兰阴性菌中均高度保存，这些微生物能够发生相似的AI-2信号分子，因而AI-2分子被以为是各种细菌进行中心沟通的通用言语，luxS为AI-2构成的标志基因。Xu等[5]经过构建和剖析△luxS骤变株，研讨了表皮葡萄球菌中的luxS/AI-2感应体系的活性；模型证明luxS经过AI-2的细胞间信号转导下调ica操纵子，因而影响了PIA的发生，减少了细菌间黏附集合，按捺生物被膜的构成，并削弱了它在动物体内的致病力。
生物被膜并不是细菌经常性的生活方式，生物被膜老练后，膜内的细菌还会从膜内涣散出来构成新的感染灶。细菌从生物被膜上的别离，是导致疾病涣散的生理根底之一。现在已知的与细菌涣散有关的要素包含：QS体系、外表活性剂、基质降解酶等；在葡萄球菌中，涣散的机制是经过agr体系来调控的。葡萄球菌的致病才能和所造成的感染的严峻程度还与其发生的毒素有关。葡萄球菌的agr亦是最重要的毒力因子调理体系，担任对毒力因子成长阶段进行依赖性调理[10]；RNAⅢ是agr体系的效应器分子。RNAⅢ可编码δ-毒素，δ-毒素具有去垢剂样效果，能够协助生物被膜构成输水及养分通道，并可使生物被膜基质降解，有助于生物被膜中的细菌脱离等[11]；也有学者研讨标明，RNAⅢ还能够上调细胞外毒性因子的发生和下调细胞壁外表相关蛋白的转录，促进外毒素的发生[12]。
针对生物被膜构成进程的医治办法包含阻挠细菌开端黏附及细菌间彼此黏附；阻断QS机制所需的生物被膜组件基因的表达；按捺组成生物被膜基质多聚糖和胞外蛋白的生物组成；降解生物被膜基质所需酶类等[13]。现在，临床抗葡萄球菌感染常运用的抗生素以红霉素、环丙沙星为代表，但临床耐药性的问题还很杰出；万古霉素作为抗葡萄球菌有用的药物，但临床对其间度耐药的表皮葡萄球菌也逐步增多[14]。因而，寻求有用抗生物被膜菌的药物，研讨中西药联用以到达药物减量增效、下降毒副效果等办法，已日益得到人们的注重。
鱼腥草，性寒味辛，具有清热解毒、行水消肿、祛瘀生新之成效，入肝肺二经。体外试验已证明，鱼腥草煎剂对多种革兰阳性菌、革兰阴性菌均有不同程度的按捺效果。鱼腥草中抗致病微生物的首要成分是挥发油，挥发油中首要为癸酰乙醛。癸酰乙醛已能人工组成，被称为鱼腥草素，但该种物质性质不安稳，而其亚硫酸氢钠加成物（鱼腥草素钠），则性质安稳而又保存其抗菌活性。
根据以往的研讨[7]，发现包含亚抑菌浓度在内的鱼腥草素钠及与红霉素联用，对ATCC 35984的初始黏附及在生物被膜内的代谢均有显着的按捺效果，并干涉了生物被膜的构成。本试验在不一起间段（时间段的设置首要参阅表皮葡萄球菌生物被膜构成的一般规则[15]；0～4 h完结初始黏附，6 h黏附的细菌开端彼此集合，24 h生物被膜根本老练，30～48 h部分生物被膜开端崩解），调查各药物对悬浮状态下的产膜表皮葡萄球菌luxS，agr，RNAⅢ的转录水平的影响；成果显现鱼腥草素钠及其与红霉素联用能够敏捷上调luxS的表达，效果并不弱于万古霉素、红霉素等抗生素，从药物效果的持久性来看，鱼腥草素鈉的效果乃至优于抗生素，提示鱼腥草素钠及与红霉素联用可调控luxS，因而具有按捺表皮葡萄球菌生物被膜的构成，并削弱其致病力的或许。鱼腥草素钠与红霉素联用在效果初期对luxS的上调效果尤为显着，但效果持续时间较短，详细原因尚不清楚。
鱼腥草素钠在MIC，1/2MIC浓度时，对agr表达均有显着下调效果（图2）；1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用、1/4 MIC鱼腥草素钠与1/4MIC红霉素联用，在效果6，12，24 h等时间段，对agr表达的下调效果也很显着。相同，也发现鱼腥草素钠在MIC浓度时，对RNAⅢ表达亦有显着下调效果；1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用对RNAⅢ表达的下调效果也很显着；提示鱼腥草素钠及与红霉素联用，在特定浓度下，可显着下调agr，RNAⅢ的表达；因而，就具有按捺表皮葡萄球菌生物被膜内养分和输水通道的构成、阻挠生物被膜基质降解和生物被膜内细菌脱离涣散、并按捺细菌外毒素构成等效果的或许。
luxS，agr均是表皮葡萄球菌QS体系的要害基因；因为细菌的QS体系是调控非细菌生计所有必要的基因，以其作为药物靶标不会对细菌生计发生较大压力，因而不易使细菌发生耐药性[16]，从而对挑选抗表皮葡萄球菌药物靶标有着重要指导含义。RNAⅢ分子是调控葡萄球菌毒力表达的要害分子，经过体外试验研讨已证明[17-18]，RNAⅢ按捺肽能够有用按捺金黄色葡萄球菌肠毒素和溶血素的发生，能够按捺表皮葡萄球菌对关节假体资料外表的黏附。本研讨亦证明了特定浓度的鱼腥草素钠及与红霉素联用对luxS的上谐和对agr，RNAⅢ的下调效果，为点评鱼腥草素钠及与红霉素联用成为抗表皮葡萄球菌生物被膜感染药物，供给新思路及实践根据，也可为临床用药供给参阅。但细菌的QS体系毕竟是很杂乱的调控体系，许多机制尚未被彻底了解，而且作者发现药物在对luxS，agr，RNAⅢ等调控随药物浓度的改动而改动，其规则需在往后试验中进一步探求。别的，本试验是以强产膜规范株ATCC 35984为试验目标，往后还应扩展对临床株样本的试验，以使成果愈加客观、可信。
[参阅文献]
[1] Qin Z，Yang X，Yang L，et al. Formation and preperties of in vitro biofilms of ica-negative Staphylococus epidermidis clinical isolates[J]. J Med Microbiol，2007，56（1）：83.
[2] Nobile C J，Mitchell A P. Microbial biofilms： epluribus unum[J]. Curr Biol，2007，17（10）：R349.
[3] 刘琳，谭小娟，贾爱群. 细菌集体感应与细菌生物被膜构成之间的联系[J].微生物学报，2012，52（3）：271.
[4] Davies D G，Parsek M R，Pearson J P，et al. The involvement of cell-to-cell signals in the development of a bacterial biofilm[J]. Science，1998，280（5361）：295.
[5] Xu L，Li H，Vuong C，et al. Role of the luxS quorum-sensing system in biofilm formation and virulence of Staphylococcus epidermidis[J]. Infect Immunol，2006，74（1）：488.
[6] Li J，Wang W，Xu S X，et al. Lactobacillus reuteri-produced cyclic dipeptides quench agr-mediated expression of toxic shock syndrome toxin-1 in staphylococci[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2011，108（8）：3360.
[7] 官妍，李春，石晶金，等.亚抑菌浓度鱼腥草素钠及与红霉素联合对表皮葡萄球菌生物被膜的效果[J].我国中药杂志，2013，38（5）：731.
[8] Qin Z，Qu Y，Yang L，et al. Role of autolysin mediated DNA release in biofilm formation of Staphylococcus epidermidis[J]. Microbiology，2007，153（pt7）：2083.
[9] Jeng W Y，Ko T P，Liu C I，et al. Crystal structure of IcaR，a repressor of the TetR family implicated in biofilm formation in Staphylococcus epidermidis[J]. Nucleic Acids，2008，36（5）：1567.
[10] Vuong C，Gerke C，Someroille G A，et al. Quorum-sensing control of biofilm factors in Staphylococcus epidermidis[J]. J Infect Dis，2003，188（5）： 706.
[11] Kiran M D，Akiyoshi D E，Giacometti A，et al. OpuC-an ABC transporter that is associated with staphylococcus aureus pathogenesis[J]. Int J Artif Organs，2009，32（9）：600.
[12] Tsompanidou E，Sibbald M J，Chlebowicz M A，et al. Requirement of the agr locus for colony spreading of staphylococcus aureus[J]. J Bacteriol，2011，193（5）：1267.
[13] Benghezal M. Inhibitors of bacterial virulence identified in a surrogate host model[J]. Cell Microbio，2007，9（5）：1336.
[14] Otto M. Molecular basis of Staphylococus epidermidis infections[J]. Semin Immunopathol，2012，34（2）：201.
[15] 叶联华，黄云超，杨达宽，等. 聚氯乙烯资料外表细菌生物膜结构调查[J].生物医学工程与临床，2007，11（4）：251.
[16] Vendeville A，Winzer K，Heurlier K，et al. Making ‘sense of metabolism： Autoinducer-2，LuxS and pathogenic bacteria[J]. Nat Rev Microbiol，2005，3：383.
[17] 邢庆昌，郝立波，王继芳. 使用RNAⅢ按捺肽（RIP）按捺葡萄球菌毒素发生的實验研讨[J].科学技术与工程，2011，11（2）：317.
[18] 郝立波，邢庆昌，王继芳，等. RNAⅢ按捺肽按捺葡萄球菌在人工关节资料外表粘附的试验研讨[J].我国矫形外科杂志，2008，16（23）：1814.
[责任编辑 张宁宁]