肿瘤分子靶向医治：免疫组织化学临床病理使用与肿瘤分子含义
管蕾
[摘要] 医学科技一日千里，20世纪70年代跟着单克隆抗体技能的展开，在病理学上展开了免疫安排化学（IHC），其把人们从传统病理安排学（形状学）面向蛋白质水平（抗原、抗体的定性和定位），在现代病理确诊中的使用日益广泛，尤其在肿瘤确诊与辨别中起着非常重要的效果，关于确诊肿瘤、肿瘤分类、判别预后产生了巨大的影响，扩展了对各种疾病及肿瘤构成进程的知道，进步了病理确诊与研讨水平。近来肿瘤的分子病理确诊及靶向医治的含义成为研讨热门。
[关键词] 免疫安排化学；肿瘤；肿瘤分子；靶向医治
[中图分类号] R730.4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）09（b）-0188-03
Immunohistochemical clinical pathological application and tumor molecular significance
GUAN Lei
Department of Pathology，Jiangdu People′s Hospital of Yangzhou City in Jiangsu Province，Yangzhou 225200，China
[Abstract] Medical technology is changing rapidly，in the 1970s with the development of monoclonal antibody technology，immunohistochemistry （IHC） is developed in pathology，IHC brings people from the traditional pathological histology （morphology） into protein levels （qualitative and positioning of antigen and antibody） and it is widely applied increasingly in modern pathological diagnosis，and plays a very important role in tumor diagnosis and differential and has a great influence on diagnosis of tumor，tumor classification，prognosis estimation，and expandes people′s understanding of the various diseases and tumor formation，improve the level of the pathological diagnosis and research.Recent molecular pathological diagnosis of tumor and the significance of targeted therapy becoms a hot research topic.
[Key words] Immunohistochemistry；Tumor；Tumor molecular；Targeted therapy
免疫安排化学（immunohistochemistry， IHC）是使用免疫学基本原理，即抗原抗体的特异性结合，符号显色剂的抗体和安排细胞内抗原（多肽和蛋白质）发作化学反响，是免疫学和安排化学相结合而构成的[1]。它具有较高的灵敏度、特异度，操作比较简洁，能将形状和功用代谢相结合，定性、定位和定量相结合，细胞水平缓超微结构水平相结合，基因水平缓蛋白质水平检测相结合，其特色是形状学改动与功用、代谢改动结合起来。分子病理的展开只能是完善弥补之，而不能取而代之。对疑问病例的确诊和分型、辅导临床医治、了解肿瘤预后发挥重要效果，已成为病理科不行短少的技能支持。
1 IHC的一般临床病理使用
1.1 判别肿瘤的安排来历及断定搬运性恶性肿瘤的原发部位
如上皮性符号常用HCK （34βE12）、LCK、CK-pan、CK7、CK19、CK20、EMA、CEA、TG、TTF-1等；软安排符号常用Vimentin、Desmin、SMA、MyoD1、CD31、CD34、CR等；神经安排符号常用GFAP、NF、S-100、CgA、SY、NSE、MBP等；关于某些搬运性腺癌能够经过CK7、CK20、TTF-1、CA125、CA15-3、E-Cadherin等来断定癌的来历。
1.2 断定肿瘤及分期
肿瘤相关抗原有利于临床病理确诊和辨别确诊，常用的有AFP、CEA、CA15-3、CA19-9、CA125、Melan-A、HMB45等。判别肿瘤是原位或滋润，有无血管、淋巴管或神经侵略与肿瘤分期密切相关。如用层粘连蛋白（laminin）和Ⅳ型胶原抗体（collagen Ⅳ）能够显现基底膜受损损坏状况，用于区别原位癌和滋润癌。有研讨发现，IHC检测胃癌标本的CD34、D2-40有助于判别血管滋润和淋巴结搬运[2]。
1.3 判别肿瘤良恶性以及淋巴瘤的分型
如用免疫球蛋白（Ig）的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别是肿瘤性增生仍是反响性增生。淋巴体系、髓体系的细胞在分解老练的不同阶段和外周淋巴细胞活化的进程中细胞表达的抗原是不尽相同的，因而各种恶性淋巴瘤和白血病也可经过IHC检测肿瘤细胞所表达的抗本来确诊与辨别确诊[3]。一般选用CD3、CD45RO、CD43、CD20、CD79a、CD10、Bcl-2等，一组抗体有时作几个T系及几个B系，IHC简直已成为惯例展开的作业项目。
1.4 发现细小搬运灶
惯例病理安排学办法要在一个安排中认出单个搬运性肿瘤或几个瘤细胞是困难的，选用IHC则有助于发现细小搬运灶，如胃黏膜活检中的印戒细胞癌，淋巴结内很少搬运性瘤细胞的寻觅，骨髓内单个搬运性瘤细胞的断定等，使细小癌、细小搬运灶（淋巴结及骨髓）、乃至不易发觉的病变得以确诊，有助于临床医治计划的断定，包含手术规模的断定等。
1.5 检测肿瘤增殖活性
肿瘤增殖活性的凹凸直接影响临床医治与预后，用IHC检测增殖细胞抗原（PCNA）、Ki-67最为简洁、牢靠。符号指数高者常淋巴结搬运率高，无瘤缓解期和存活时间短，预后不良。Ki-67高表达与乳腺癌的ER阴性、人类表皮生长因子受体-2（HER-2）阳性、高等级及淋巴结搬运相关，是其重要的预后与猜测符号[4-5]。其他预后目标如p53、Bcl-2等也常使用于临床。
1.6 确诊感染性疾病
能够辨认安排切片中的病原体而用于感染性疾病的确诊[6]。IHC使用特异性抗体检测结核分枝杆菌、幽门螺杆菌、梅毒螺旋体、乙型肝炎病毒（HBV）、巨细胞病毒（CMV）、人乳头状瘤病毒（HPV）、疱疹病毒（HSV）等，这样病理医师就能够在病毒感染导致的可辨认的细胞形状病理改动之前或病毒培育成果之前清晰发现病原体抗原的部位及定量。
2 几种常见癌基因检测及肿瘤分子靶向医治
2.1 HER-2
HER-2基因坐落17号染色体q12～q21，是具有受体酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，归于表皮生长因子受体宗族，具有促进肿瘤细胞增殖、增强侵袭力及按捺细胞凋亡的效果，HER-2受体蛋白介导的信号转导有RAS/RAF/MEK/ERK途径和PI3K/PIP2/PIP3/PDK1/AKT途径[7]。20%～30%的乳腺癌患者有HER-2的扩增和蛋白过表达，其阳性与乳腺癌分级和淋巴结搬运正相关，提示预后差。HER-2基因高扩增与ER、PR阴性表达相关，对内排泄医治的反响差及生存率低[8]。近年来一种新式分子靶向医治药物——曲妥珠单抗，已被成功使用于医治HER-2基因扩增或过表达伴或不伴腋窝淋巴结搬运的乳腺癌患者。临床最常用的HER-2基因检测办法是IHC和荧光原位杂交（FISH），IHC操作简洁、价格低廉，与FISH契合率高，HER-2蛋白高强度表达（3+）与基因扩增有极好的一致性，而中等强度表达（2+）有必要进一步行FISH法基因检测，IHC可用作临床医治是否使用曲妥珠单抗的初筛[9]。
2.2 拓扑异构酶Ⅱ（TOP2）A
与HER-2基因相邻，参加DNA的重组、修正、转录与仿制进程，可促进癌发作。TOP2A的反常分为扩增与缺失。三阴性乳腺癌（TNBC）预后差、短少特异医治，TOP2A蛋白过表达可见于TNBC，它是细胞内蒽环类药物医治的靶点，蒽环类药物给TNBC患者带来福音[10-11]。胃癌的发病率和死亡率很高，但没有树立牢靠的确诊和预后的标志物，用IHC法检测胃癌安排样本中HER-2和TOP2A的表达均高于癌旁正常胃安排，与胃癌的发作、展开、远处搬运和肿瘤分期相关，但两者表达无相关性，HER-2与胃癌的淋巴结搬运相关，TOP2A与胃癌的滋润深度相关，它们可作为点评胃癌患者预后的有用符号[12]。
2.3 表皮生长因子受体（EGFR）
EGFR是HER宗族成员之一，其高表达与肿瘤细胞的增殖、血管生成以及搬运相关。在全球规模内，肺癌是发病率和病死率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占80%，存在EGFR的反常高表达，用EGFR酪氨酸激酶按捺剂（TKIs）（gefitinib 或erlotinib）单药医治NSCLC，可增加患者总生存期（OS）和无展开生存期（PFS），特别是不吸烟、腺癌和EGFR基因骤变患者[13]。用IHC办法剖析肺癌安排中EGFR骤变蛋白，调查染色肿瘤细胞的份额和染色的深度，以此规范量化NSCLC 患者EGFR骤变阳性，并可用以猜测EGFR- TKIs的医治效应[14]。
2.4 p53
p53坐落人类第17号染色体短臂上（17p13.1），是一种抑癌基因，在肿瘤代谢进程中发挥重要效果。野生型p53为细胞周期调理蛋白，当DNA或染色体损害严峻时，触发凋亡机制，按捺细胞增殖，而骤变型p53则具有致癌活性，与许多肿瘤的发作、展开密切相关[15]，具有泛瘤性。p53骤变率高的乳腺癌细胞增殖生机强、分解差、恶性度高和淋巴结搬运率高，用IHC检测p53蛋白表达，可作为评判乳腺癌生物学行为的一个独立要素。近来报导[16]使用二氧化硅纳米颗粒的p53基因医治，对人乳腺癌细胞有显着的按捺效应。不断增加对p53调理机制的了解，在此基础上加强对新药的研讨，以期在癌症展开时经过从头激活p53的疗法让患者获益[17]。研讨发现在24例NSCLC患者体内打针rAd-p53并联合顺铂医治，17例患者到达病况安稳，进步了日子质量并延缓了病况展开[18]。
2.5 间变性淋巴瘤激酶（ALK）
棘皮动物微管相关类蛋白4（EML4）与ALK交融基因存在于3%～5%的NSCLC，EML4-ALK交融基因激活了ALK酪氨酸激酶，引发凋亡按捺和促进肿瘤细胞增殖，ALK交融基因作为NSCLC一个特别的分子类型，该患者具有共同的临床特色，比如肺腺癌、从不吸烟或少吸烟、一般与EGFR骤变不一起存在。IHC法检测ALK基因重排灵敏度、特异度及可重复性均佳，单个检测成果不断定可结合FISH和逆转录-聚合酶链反响（RT-PCR）法[19-20]。Crizotimib是一种新式靶向抗癌药，被美国食物和药品管理局（FDA）同意用于ALK阳性的晚期NSCLC效果显着，能改进肿瘤患者症状、延伸患者的PFS，且毒性低，患者耐受性较好，遭到临床重视[21-22]。
3 结语
白腊切片是制造标本最常用、最基本的办法，IHC首选之，对安排形状保存好，能接连切片，便于各种染色调查，还能长时间存档，供回忆性研讨，但甲醛固定法关闭了细胞内部分抗原决定簇以及蛋白发作交联使抗原决定簇荫蔽，因而IHC首先要行抗原修正或露出，还着重做好安排前期的处理以及阳性对照和阴性对照，防止假阳性和假阴性，严厉做好IHC质量操控，才干得到牢靠的IHC染色[23]。IHC便于在大部分底层医院展开，满意底层患者疾病诊治的需求，进步了病理确诊的水平。
在惯例肿瘤病理确诊中，大约10%的肿瘤确诊是疑问的，跟着IHC技能的展开和各种特异性抗体的出现，使越来越多的疑问肿瘤得以清晰确诊。在低分解或未分解肿瘤的辨别确诊时，准确率可达50%～75%。
正如一切的事物都有两面性，IHC亦如此。迄今为止特异性单抗比较少，现在没有一种抗体只对其相应的安排或细胞是肯定特异的，病理医师挑选抗体及判别成果都要客观慎重地以HE形状为根据，这是一个重要准则，IHC成果判别的正确性和牢靠性表现病理医技人员的归纳水平。
跟着分子病理学的展开，靶向医治在肿瘤医治中有了很大展开[24-25]，为一些细胞毒类药物效果欠安的恶性肿瘤患者带来了期望，挑选适宜个体化医治的药物正成为一种展开方向和趋势，IHC则发挥着不行小觑的效果。
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（收稿日期：2014-06-05 本文修改：许俊琴）