氨茶碱片的副作用 黄芪注射液对氨茶碱在大鼠体内药代动力学的影响
王海芸 钟优艳 王琼 雷丽枝 陈连国
[摘要] 意图 研讨黄芪打针液长时刻给药后对氨茶碱在大鼠体内药代动力学的影响。 办法 将12只大鼠随机均匀分为A组与B组：A组腹腔打针黄芪打针液4 g/kg，接连10 d，B组腹腔打针等量生理盐水，接连10 d。第10天给药后，两组均灌胃给予氨茶碱打针液20.8 mg/kg，并于给药前和给药后10 min、20 min、30 min、1 h、1.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h和12 h尾静脉取血，选用UPLC测定血浆中茶碱的血药浓度。 成果 成果标明两组间药动学参数MRT（0-12）、Vz/F、Cmax、Tmax、t1/2z无显著性差异（P>0.05），AUC（0-12）和Clz/F差异有计算学含义（P<0.05）。A组的AUC（0-12）比B组下降了28.49%， Clz/F比B组进步了45.07%。 定论 黄芪打针液长时刻给药能诱导氨茶碱在大鼠体内的代谢，因而联合用药时应留意调整氨茶碱给药剂量，避免影响医治作用。
[关键词] 氨茶碱；黄芪打针液；药代动力学；超高效液相色谱
[中图分类号] R285 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）21-0033-04
Effects of Huangqi injection on the pharmacokinetics of aminophylline in rats
WANG Haiyun ZHONG Youyan WANG Qiong LEI Lizhi CHEN Lianguo
Department of Pharmacy， Wenzhou People's Hospital in Zhejiang Province， Wenzhou 325000， China
[Abstract] Objective To study effects of Huangqi injection on the pharmacokinetics of aminophylline in rats. Methods A total of 12 healthy male SD rats were randomly divided into group A and group B： group A was given Huangqi injection 4 g/Kg by intraperitoneal injection for 10 days， group B was given the same volume of saline by intraperitoneal injection for 10 days. Both group A and B were given aminophylline 20.8 mg/kg with intragastric administration after intraperitoneal injection on the 10th day. Blood samples were collected from the tail vein before administration and at 10 min， 20 min， 30 min， 1 h， 1.5 h， 2 h， 4 h， 6 h， 8 h， 10 h and 12 h points after administration. The concentration of theophylline in plasma was detected by UPLC. Results The results showed that MRT（0-12）， Vz/F， Cmax， Tmax and t1/2z have no significant differences（P>0.05）， AUC（0-12） and CLz/F were statistically significant differences between the two groups（P<0.05）. The AUC（0-12） of group A decreased 28.49% than group B and the Clz/F of group A increased 45.07% than group B. Conclusion Long term administration of Huangqi injection can induce aminophylline metabolism in rats. Therefore， the dosage of aminophylline should be adjusted when the two drugs used together， so as not to affect the treatment effect.
[Key words] Aminophylline； Hangqi injection； Pharmacokinetics； Ultra performance liquid chromatography
氨茶堿（aminophylline）已有超越七十年医治支气管哮喘的前史，是茶碱（teophylline）和乙二胺的缩合物，进入体内后敏捷转换成茶碱起作用[1]。茶碱在大鼠体内首要经过CYP1A2酶的代谢，且茶碱的医治指数窄，任何影响氨茶碱代谢的药物均有能使其达不到医治作用或呈现毒性反响。黄芪打针液在临床上常用于支气管哮喘急性发生、肺心病等[2，3]的医治，还可用于辅佐医治肿瘤方面的疾病[4]，因而与氨茶碱在临床上合用的时机较多。已有研讨报导黄芪打针液在体外能按捺CYP1A2酶的活性，在大鼠体内则呈诱导作用[5]，因而这两种药物合用时在体内的相互作用需求进一步研讨。本研讨首要评论黄芪打针液对氨茶碱体内药动学的影响，以期为两药联用合理性供给理论依据，现报导如下。
1 材料与办法
1.1试验动物
健康雄性SD大鼠12只，清洁级，体重220～250 g，动物合格证编号SCXK（沪）2012-0002，由温州医科大学试验动物中心供给，试验前12 h动物禁食不由水。于2016年3～5月进行试验。
1.2 仪器
Waters ACQUITY H-Class 超高效液相色谱仪（PDA eλ紫外检测器，FTN样品处理器，四元溶剂管理器），Empower 3色谱数据工作站（美国Waters 公司），电子剖析天平（AB204-A，上海梅特勒-托利多仪器公司），XW-80A旋涡混合仪（海门市其林贝尔仪器制作有限公司），高速离心机（TGL-16G，上海安亭科学仪器厂），氮吹仪（QGC-12T，上海安亭科学仪器厂），水浴恒温振荡器（SHZ-88A，江苏太仓市试验设备厂）。
1.3 药品与试剂
茶碱规范品（批号13020206），咖啡因规范品（批号1215-0104）均由我国药品生物制品检定所供给，甲醇、乙腈（J&K scientific Ltd，HPLC/ACS级，99.9%），乙酸乙酯（天津四友精细化学品有限公司，剖析纯），超纯水（Millipore， Bedford，MA，USA），氨茶碱打针液（上海现代哈森（商丘）药业有限公司，批号：140321 0111），黄芪打针液（威风药业集团有限公司，批号：120922D2），其它试剂均为市售剖析纯。
1.4 溶液的制造
精细称取茶碱规范品适量，用活动相定容成浓度为1 mg/mL的规范品储藏液，储存于4℃备用，临用时稀释。精细称取咖啡因规范品适量，加活动相定容成浓度为1 mg/mL的溶液，储存于4℃备用，临用时稀释成50 μg/mL的溶液作为内标溶液。
1.5色谱条件
色谱柱为UPLCRBEH C18 column（50×2.1 mm，1.7 μm，Waters），流速为0.2 mL/min，检测波长为273 nm，进样量2 μL，柱温30℃。活动相： A为乙腈和B为超纯水。梯度洗脱A相：0～3.0 min（5%→35%）；3.0～4.0 min（35%→5%）；4.0～7.0 min（5% A）。
1.6 样品预处理
取大鼠空白血浆100 μL于具塞离心管中，参加50 μg/mL的内标咖啡因溶液10 μL，准确参加1 mL乙酸乙酯萃取，涡旋混合2 min，13000 r/min离心10 min，取上清液0.9 mL，于尖底离心管中，40℃水浴中氮气（N2）流吹干，加100 μL甲醇-水（10：90 v/v）溶液溶解，涡旋2 min，13000 r/min离心10 min，取2 μL上清进样剖析。
1.7 动物试验办法
12只雄性大鼠随机分为合用组（A组）和单用组（B组）各6只。A组腹腔打针黄芪打针液4 g/kg，接连10 d，不约束饮食饮水，B组腹腔打针等量生理鹽水，接连10 d。第10天于给药前禁食12 h，自在饮水，A组腹腔给予黄芪打针液4 g/kg后半小时灌胃氨茶碱打针液20.8 mg/kg。B组于给药前禁食12 h，自在饮水，一起刻灌胃给予氨茶碱打针液20.8 mg/kg。两组大鼠别离在给药前和给药后10 min、20 min、30 min、1 h、1.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h尾静脉取血0.4 mL，置于加肝素的离心管中，以13000 r/min离心10 min后取血浆，-40℃保存。测守时按1.6项操作。
1.8 剖析办法确证
1.8.1 专特点调查 如图1 所示茶碱及内标咖啡因在上述条件下的出峰时刻别离为2.84 min和3.52 min。血浆中内源性物质以及兼并用药对测定均无搅扰，办法专特点杰出。
1.8.2 规范曲线的制作 取不同浓度茶碱规范溶液及内标各10 μL，别离参加到100 μL空白血浆中制造成茶碱血药浓度为0.625、1.25、2.5、6.25、12.5、25、50和100 μg/mL的规范系列血浆样品，按1.6项处理，进行剖析。以茶碱峰面积与内标峰面积之比（y）为纵坐标，茶碱质量浓度（x）为横坐标，进行回归运算，制作规范曲线，求得回归方程为y=0.1648x-0.1604，r=0.9994（n=8），茶碱在0.625～100 μg/mL 的范围内线性关系杰出。
1.8.3 精细度试验 取空白血浆，按规范曲线项下别离制造1、10、90 μg/mL低、中、高三种浓度的茶碱血浆规范品溶液各5份，按1.6项处理，各浓度在同1 d内测定5次，核算日内精细度；各浓度接连测定5 d，核算日间精细度。见表1。
1.8.4回收率试验 取空白血浆，按规范曲线项下别离制造低、中、高三种浓度（1 μg/mL、10 μg/mL、90 μg/mL）的茶碱血浆规范品溶液，按1.6项处理，用检测浓度与参加浓度的比值来标明茶碱的相对回收率，三种浓度茶碱血浆样品相对回收率别离为（97.66±2.71）%、（103.26±4.44）%和（102.32±3.12）%。
同法制造三种不同浓度的茶碱规范品溶液按1.6项处理，检测后记载峰面积。一起再别离制造相同浓度的茶碱纯标溶液，检测后记载峰面积，用血标峰面积与纯标峰面积之比来核算肯定回收率，低、中、高三种浓度（1 μg/mL、10 μg/mL、90μg/mL）茶碱血浆样品肯定回收率别离为（82.11±6.62）%、（80.89±4.53）%和（85.53±4.64）%。
1.8.5安稳性试验 别离制造低、中、高三种浓度（1 μg/mL、10 μg/mL、90 μg/mL）的茶碱血浆规范品溶液，别离调查于-40℃冰箱中放置28 d、室温放置24 h以及冻融3次后的安稳性，按1.6项处理后检测，RSD均小于7.0%，标明血浆样品长时刻冷冻后安稳性杰出，有杰出的冻融安稳性以及样品处理后室温条件下24 h内安稳。
1.9 数据处理
选用DAS3.0（drug and statistics，version3.0）软件对血药浓度-时刻数据选用非房室模型剖析办法（计算矩法）求得首要药动学参数，选用SPSS 16.0（statistical product and service solutions 16.0）软件，计量材料以（x±s）标明，选用两样本t查验对各参数进行计算学剖析，P<0.05标明差异有计算学含义。
2 成果
2.1血药浓度-时刻曲线
A组与B组大鼠血浆中氨茶碱的均匀血药浓度-时刻曲线。
2.2药动学参数
经过非房室模型剖析办法求得首要药动学参数如表2。计算成果标明AUC（0-12）（用药时曲线下面积）和Clz/F（铲除率）有显著性差异（P<0.05），合用组AUC（0-12）比单用组下降28.49%，合用组Clz/F比单用组进步45.07%；MRT（0-12）（均匀驻留时刻）、Vz/F（表观别离容积）、Cmax（药峰浓度）、Tmax（达峰时刻）、t1/2z（半衰期）无显著性差异（P>0.05）。
3 评论
本试验前期建立了UPLC法检测大鼠血浆中茶碱的浓度，选用乙腈-水梯度洗脱，茶碱和咖啡因的别离度高，内源性杂质无搅扰，保存时刻短。本试验对文献[6-8]已有报导的药物萃取有机溶剂做了调查，成果发现氯仿-异丙醇有乳化现象，二氯甲烷毒性较大，不易挥干，极性大或小的药物用乙酸乙酯萃取均有较好的作用，选用乙酸乙酯为萃取有机溶剂，茶碱萃取率契合试验研讨的要求。茶碱的办法学调查契合规范，提示该法科学、牢靠，可用于氨茶碱药动学研讨。
近年来西药与中药发生的相互作用越来越引起人们的留意。因为中药成分杂乱，某些成分或许与某些西药在体内共享相同的酶或许转运蛋白，进而对西药的作用产生影响[9，10]。在这进程中，细胞色素P450酶（cytochrome enzymes P450，CYP450）扮演着重要的人物。诱导或许按捺CYP450酶或许导致相关药物医治无效乃至引起中毒[11]。中药制剂经过诱导或按捺肝药酶CYP450进而导致的药物代谢性相互作用是现在中西药相互作用的中药研讨部分[12，13]。CYP1A2亚型是CYPs宗族中的重要成员，大约占总量的13%左右，可代谢多种临床常用药物如非那西汀、氯氮平、普萘洛尔以及咖啡因等[14]。
氨茶碱是临床上常用的药物，在生物体内，氨茶碱分解出茶碱和乙二胺，10 mg 氨茶碱的量等同于7.88 mg的茶碱[15]。临床常用口服剂量为每人每次 200 mg，转化为大鼠灌胃剂量为 20.8 mg/kg[16]，故本试验选用此浓度。氨茶碱血药浓度在5～10 μg/mL 时表现出抗炎和调理免疫的作用，在10～20 μg/mL时则表现为支气管扩张作用，在15～20 μg/mL经常有毒性反响发生，大于20 μg/mL 可呈现心动过速、心律失常，嚴重的乃至引起呼吸、心跳中止致死[17，18]。因为氨茶碱医治呼吸道疾病的医治窗窄，且其药动学特征易受其它要素的影响，因而临床特别需求监测其血药浓度。
黄芪打针液具有益气养元、扶正驱邪、养心通脉、健脾利湿的功用，临床上广泛用于心脑血管疾病，呼吸系统疾病的医治中[19]。现在有报导黄芪打针液在体外对CYP1A2酶有按捺作用，在大鼠体内则表现为诱导作用。茶碱首要经过细胞色素P450酶代谢，其间以CYP1A2酶代谢途径为主[20]，因而常常被作为研讨CYP1A2酶活性的底物。所以黄芪打针液很有或许经过诱导CYP1A2酶影响茶碱的体内进程进而影响临床作用。
本试验研讨了黄芪打针液单次给药后对氨茶碱在大鼠体内药动学的影响，成果标明，两组间茶碱的AUC（0-12）和 Clz/F的差异有计算学含义（P<0.05），阐明黄芪打针液在大鼠体内可以导致茶碱的代谢加速，铲除率添加，使茶碱药时曲线下面积削减。含有黄芪的药物、食物和保健品与氨茶碱合用时需求留意监测氨茶碱血药浓度，及时调整剂量，避免或许影响医治作用。
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（收稿日期：2017-02-06）