羽叶丁香的叶的 羽叶丁香茎皮中1个新木脂素成分

白睿峰　苏国柱　冯晓　张瑞飞　尹旭　叶如此　陈苏依勒　屠鹏飞　柴兴云

[摘要] 经过色谱办法从羽叶丁香的茎皮中分到11个化学成分，经质谱、核磁共振谱及与文献数据比较判定其结构。其间化合物1为新木脂素，命名为反式羽叶丁香素A （Zpinnatifolin A），10個已知物别离判定为pinnatifolin A （2）， 乙基松柏苷ethylconiferin（3），甲基松柏苷（4），丁香素（5），β， 3， 4trihydroxyphenethyl alcohol（6）， （S）（+）2（3， 4dihydroxyphenyl）2ethoxyleth anol（7）， 3， 4dihydroxyβmethoxyphenethyl alcohol（8）， 3， 4， 5三羟基苯乙醇（9）， 红景天苷（10）， 羟基酪醇（11）， 其间3，4，8～11为丁香属内初次报导，5～7为该种初次报导。化合物1对神经小胶质细胞BV2的NO生成显现必定的按捺活性。该研讨为表征山沉香抗心肌缺血的药效物质供给了必定的参阅。

[关键词] 羽叶丁香； 蒙药； 反式羽叶丁香素A

A new lignan from stem bark of Syringa pinnatifolia

BAI Ruifeng1， SU Guozhu1， FENG Xiao1， ZHANG Ruifei1， YIN Xu1，

YE Yunyun1，2， CHEN Suyile3， TU Pengfei1， CHAI Xingyun1*

（1. Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine， School of Chinese Materia Medica，

Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China；

2. Pharmacy College， Ningxia Medical University， Yinchuan 750004， China；

3. Alashan League Mongolian Medicine Hospital， Alashan League 750300， China）

[Abstract] One new lignan， named Zpinnatifolin A， along with ten known analogues， were isolated from the stem bark of Syringa pinnatifolia by various chromatographic methods. Their structures were extensively determined on basis of MS and NMR spectroscopic data analyses， and comparison with those in literature. Among them， compounds 3，4， and 811 were isolated from this genus for the first time， and 57 were isolated from the specie for the first time. Compound 1 showed a moderate inhibition on NO production in BV2 cells. The present study provides a preliminary data for clarification of bioactive ingredients of S.pinnatifolia with antimyocardial ischemic effect.

[Key words] Syringa pinnatifolia； Mongolian folk medicine； Zpinnatifolin A

羽叶丁香Syringa pinnatifolia Hemsl.是我国丁香属特有种类，有限会集散布于内蒙古和宁夏接壤的贺兰山区域。羽叶丁香去皮的根、根茎及粗枝，是一种特征蒙药材——山沉香，具有抑赫依、清热、止痛等成效，蒙医用其医治胸闷气短、心肌缺血等心肺疾病，疗效明显 [12]。

此前本课题组报导了山沉香乙醇提取物的抗心肌缺血效果[3]及茎皮中的木脂素类和环烯醚萜类成分[47]。作为体系研讨的一部分，本文进一步报导从茎皮中别离得到的11个化学成分，其间1个新木脂素类命名为反式羽叶丁香素A （Zpinnatifolin A），10个已知物别离判定为pinnatifolin A（2），乙基松柏苷ethylconiferin（3），甲基松柏苷（4），丁香素（5），β，3，4trihydroxyphenethyl alcohol（6），（S）（+）2（3，4dihydroxyphenyl）2ethoxylethanol（7），3，4dihydroxyβmethoxyphen ethyl alcohol （8），3，4，5三羟基苯乙醇（9），红景天苷（10），羟基酪醇（11）。化合物3，4，8～11为丁香属内初次报导，5～7为本种内初次报导。本研讨为阐明山沉香抗心肌缺血的药效物质供给了必定的参阅。

1 资料

1.1 药材 羽叶丁香于2013年7月采自内蒙古阿拉善贺兰山区域，经阿拉善盟蒙医医院陈苏依勒判定为S. pinnatifolia，异名贺兰山丁香S.pinnatifolia var. alashanensis Y.C. Ma & S.Q. Zhou[2]，剥取茎木部分的皮层，阴凉处枯燥，药材标本存放于北京中医药大学中药现代研讨中心（SP201307B）。

1.2 细胞 BV2小胶质细胞系由我国医学科学院细胞中心供给。

1.3 仪器和试剂 Varian Inova500型核磁共振仪；日本岛津高效液相离子阱飞行时间质谱仪；美国鲁道夫Autopol IV旋光儀；Sephadex LH20（瑞典Amershan Biosciences）；Waters 2535制备液相（美国Waters）；半制备色谱柱Shimpack PREPODS （H） C18 （20 mm×250 mm，5 μm）。ODS（40～63 μm，德国Merck）；柱色谱用硅胶（200～300目）及薄层色谱用GF254硅胶预制板，均为青岛海洋化工厂出产；提取和别离中所用化学试剂均为剖析纯（北京化工厂）；SANYO MCO18AIC细胞培养箱；Motic AE2000倒置荧光显微镜；ESCO OptiMair超净工作台；瑞士TECAN M1000型多功能酶标仪；DMEM培养基（Hyclone，美国）；胎牛血清（Gibco，美国）；NO化学法试剂盒（南京建成生物公司）；阳性对照为槲皮素和姜黄素（Sigma，美国）。

2 提取与别离

羽叶丁香茎皮（1.3 kg），顺次用95%，80%的乙醇回流提取2次，每次2.5 L，提取1.5 h。提取液减压浓缩得浸膏325 g。选用正相硅胶柱色谱，顺次用氯仿甲醇（20∶1～0∶1）洗脱得到9个流分（A～I）。流分C（31.2 g）经正相硅胶柱色谱，顺次用二氯甲烷乙酸乙酯（3∶1～0∶1），甲醇洗脱得到10个流分（C1～C10）。C3 （330 mg）经Sephadex LH20 （二氯甲烷甲醇，1∶1）洗脱得3个流分（C3a～C3c）。流分C3c （80 mg）经制备薄层色谱得到化合物7 （20.5 mg）。C4 （980 mg）选用Sephadex LH20 （二氯甲烷甲醇，1∶1） 洗脱得到3个流分（C4a～C4c）。C4b （72 mg） 经制备HPLC （甲醇水，50∶50，7.0 mL·min-1） 纯化得到化合物11（tR=9.8 min，4.2 mg），其余部分经制备HPLC（甲醇水，40∶60，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物2（tR=29.5 min，9.4 mg）和1（tR=43.2 min，8.0 mg）。

流分E（10.6 g）和F （8.2 g）兼并，经正相硅胶柱色谱，顺次用乙酸乙酯甲醇（10∶1～0∶1），洗脱得到8个流分（EF1～EF8）和结晶化合物5 （2.5 g）。EF1 （1.2 g）选用ODS柱色谱，顺次用甲醇水（1∶2～1∶0）洗脱得到8个流分（EF11～EF18）和结晶10 （30.5 mg）。EF15 （310 mg） 经制备HPLC （乙腈水，18∶82，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物4（tR=26.0 min，7.5 mg）。EF18 （162 mg）经制备HPLC （乙腈水，20∶80，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物3（tR=35.0 min，7.5 mg）。EF7 （1.6 g）经Sephadex LH20 （甲醇）洗脱得到7个流分（EF7a～7f），其间EF7ce兼并为EFX（1.1 g），经正相硅胶柱色谱，顺次用乙酸乙酯甲醇（20∶1～0∶1），洗脱得到9个流分（EFX1～X9）。EFX8 （120 mg）经制备HPLC （甲醇水 20∶80，7.0 mL·min-1）纯化得到化合物6（tR=9.8 min，10.5 mg），9（tR=18.7 min，6.3 mg）和8（tR=21.8 min，3.5 mg）。

2 结构判定

化合物1 白色粉末；HRESIMS给出准分子离子峰359.151 3 [M-H]-，（核算值C20H23O6，359.150 0）； [α]25D-34.0° （c 0.1，MeOH）； UV （MeOH）λmax （logε） 264 （3.74），208 （4.14） nm； IR （KBr） vmax 3 432，2 922，1 637，1 515，1 273，1 032 cm-1，显现有羟基和苯环等吸收峰。ECD （MeOH） λmax （Δε） 219 （+1.26），227 （-0.66），251 （-0.52），261 （+0.82），281 （-0.82），290 （-0.73）。1H和13CNMR 见表1，数据显现2组ABX巧合体系[δH 6.84 （1H，d，J=1.5 Hz，H2），6.70 （2H，overlapped，H5，H5′），6.68 （1H，overlapped，H6）]，[δH 6.77 （1H，d，J=1.5 Hz，H2′），6.70 （H5′），6.64 （1H，dd，J=1.5，8.0 Hz，H6′）]，1个烯氢单峰δH 6.32 （H7），2个连氧亚甲基δH 4.01，4.21/δC 60.6 （C9）和δH 3.66，3.72/δC 65.8 （C9′），1个亚甲基（C7′）和1个次甲基（C8′）。以上信息并结合HMBC剖析可知，1与已知的pinnatifolin A相似，不同之处在H8′ （δH 2.76/3.37）和C8′ （δC 51.3/45.2）[8]数据，见图1。

NOESY数据显现1的H7与H7′及H8′有关，阐明1的Δ7，8双键为Z构型。经过核算ECD发现，化合物1构象多且核算进程杂乱，有待后续更多依据断定其肯定构型，判定为Z4，4，9，9四羟基7烯木脂素，为1个新结构，命名为反式羽叶丁香素A （Zpinnatifolin A）。

化合物1 1HNMR （CD3OD， 500 MHz）： δ：6.84（1H， d，J=1.5 Hz， H2）， 6.70 （2H， overlapped， H5， 5′）， 6.68（1H， overlapped，H6）， 6.32 （1H， s， H7）， 4.21 （1H， d，J=11.5 Hz， H9a）， 4.01 （1H， d，J=11.5 Hz， H9b）， 6.77 （1H， d，J=1.5 Hz， H2′）， 6.64 （1H， dd，J=1.5， 8.0 Hz， H6′）， 2.70 （1H， m， H7′a）， 2.86 （1H， m， H7′b）， 2.76 （1H， m， H8′）， 3.72 （1H， m， H9′a）， 3.66 （1H， m， H9′b）， 3.78 （3H， s， OMe3）， 3.82 （3H， s， OMe3′）。13CNMR见表1。

化合物2 白色粉末；[α]25D-14.5° （c 0.01 MeOH）； ESIMS m/z 359[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ： 6.46 （2H，overlapped，H2，6），6.70 （2H，d，J=8.0 Hz，H5，5′），2.75 （1H，dd，J=6.0，14.0 Hz，H7a），2.59 （1H，dd，J=6.0，14.0 Hz，H7b），3.37 （1H，m，H8），3.71 （1H，m，H9a），3.65 （1H，m，H9b），6.55 （3H，overlapped，H2′，6′，7′），4.11 （1H，d，J=13.0 Hz，H9′a），4.28 （1H，d，J=13.0 Hz，H9′b），3.74 （3H，s，OMe3），3.62 （3H，s，OMe3′）。13CNMR数据，见表1；NOESY相关数据显现H7与H7′及H8′无法观察到，阐明化合物2为E构型，以上NMR数据与文献[8]对照，判定为pinnatifolin A。

化合物3 白色粉末状；ESIMS m/z 371[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：7.07 （1H，d，J=2.0 Hz，H2），7.10 （1H，d，J=8.5 Hz，H5），6.94 （1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H6），6.71 （1H，d，J=16.0 Hz，H7），6.23 （1H，dt，J=4.5，16.0 Hz，H8），4.11 （2H，dd，J=1.0，6.0 Hz，H9），3.86 （3H，s，3OMe），3.60 （2H，m，H1″），1.21 （3H，br t，J=7.0 Hz，H2″），4.89 （1H，J=7.0 Hz，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：133.2 （C1），111.4 （C2），150.9 （C3），147.7 （C4），117.9 （C5），120.8 （C6），133.4 （C7），126.0 （C8），72.3 （C9），56.7 （3OMe），66.6 （C1″），15.9 （C2″），102.7 （C1′），74.9 （C2′），77.9 （C3′），71.3 （C4′），78.2 （C5′），62.5 （C6′）。以上數据与文献[9]对照，判定为乙基松柏苷（ethylconiferin）。

化合物4 白色粉末状；ESIMS m/z 379[M+Na]+； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.74 （1H，d，J=1.5 Hz，H2），7.11 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），6.95 （1H，dd，J=1.5，8.0 Hz，H6），6.58 （1H，d，J=16.0 Hz，H7），6.23 （1H，dt，J=4.5，16.0 Hz，H8），4.07 （2H，dd，J=1.0，6.0 Hz，H9），3.88 （3H，s，3OMe），3.87 （3H，9OMe），4.89 （1H，J=7.0 Hz，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：133.3 （C1），111.4 （C2），150.9 （C3），147.8 （C4），117.9 （C5），120.9 （C6），133.6 （C7），125.6 （C8），74.2 （C9），56.7 （3OMe），58.1 （9OMe），102.7 （C1′），74.9 （C2′），77.9 （C3′），71.3 （C4′），78.2 （C5′），62.5 （C6′）。以上数据与文献[10]对照，判定为甲基松柏苷（methylconiferin）。

化合物5 白色粉末状；ESIMS m/z 371[M-H]-；1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.74 （2H，s，H2，6），6，53 （1H，d，J=16.0 Hz，H7），6.32 （1H，dt，J=4.5，16.0 Hz，H8），4.21 （2H，d，J=5.5 Hz，H9），3.85 （6H，s，OMe×2），4.85 （1H，overlapped，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：135.3 （C1），105.4 （C2，6），135.9（C4），154.3 （C3，5），130.0 （C7），131.2 （C8），63.6 （C9），57.0 （OMe×2），105.3 （C1′），75.7 （C2′），77.8 （C3′），71.3 （C4′），78.3 （C5′），62.6 （C6′）。以上数据与文献[11]对照，判定为紫丁香素（syringin）。

化合物6 褐色粉末状；ESIMS m/z 169[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz）δ：6.80 （1H，br s，H2），6.71 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），6.66 （1H，dd，J=1.5，8.0 Hz，H6），3.55 （2H，d，J=6.0 Hz，Hα），4.51 （1H，br t，J=7.0 Hz，Hβ）。13CNMR （CD3OD，125 MHz）δ：134.8 （C1），114.6 （C2），146.2 （C3），145.8 （C4），116.1 （C5），118.9 （C6），68.8 （Cα），75.8 （Cβ）。以上数据与文献[12]报导共同，判定为β，3，4 trihydroxyphenethyl alcohol。

化合物7 白色粉末状；ESIMS m/z 197[M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.74 （2H，overlapped，H2，6），6.61 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），3.58 （1H，m，Hαa），3.46 （1H，overlapped，Hαb），4.20 （1H，d，J=5.0 Hz，Hβ），3.37 （2H，overlapped，H1′），1.15 （3H，br t，J=6.5 Hz，H2′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：132.3 （C1），114.9 （C2），146.3 （C3），146.0 （C4），116.2 （C5），119.6 （C6），67.9 （Cα），84.1 （Cβ），65.1 （C1′），15.5 （C2′）。以上数据与文献[13]对照，判定为（S）（+）2（3，4dihydroxyphenyl）2ethoxylethanol。

化合物8 白色膠状物；ESIMS m/z 183[M-H]-；1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.72 （2H，overlapped，H2，6），6.61 （1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H5），3.58 （1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，Hαa），3.48 （1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，Hαb），4.08 （1H，dd，J=4.0，8.5 Hz，Hβ），3.22 （3H，s，αOMe）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：131.6 （C1），114.9 （C2），146.5 （C3），146.2 （C4），116.2 （C5），119.8 （C6），67.9 （Cα），86.1 （Cβ），56.8 （αOMe）。以上数据与文献[14]对照，判定为3，4dihydroxyβmethoxyphenethyl alcohol。

化合物9 褐色粉末状；ESIMS m/z 169[M-H]-；1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.70 （1H，br s，H2），6.50 （1H，br s，H6），3.48 （2H，m，Hα），2.47 （2H，m，Hβ）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：134.1 （C1），117.4 （C2），145.3 （C3），129.1 （C4），144.1 （C5），118.5 （C6），64.0 （Cα），37.0 （Cβ）。以上数据经过剖析，判定为3，4，5三羟基苯乙醇（3，4，5trihydroxyphenethyl alcohol）。

化合物10 白色晶体；ESIMS m/z 323[M+Na]+； 1HNMR （CD3OD，500 MHz） δ：6.70 （2H，d，J=8.5 Hz，H2，6），7.06 （2H，d，J=8.5 Hz，H3，5），4.04 （1H，dd，J=7.0，13.0 Hz，Hαa），3.69 （1H，overlapped，Hαb），2.83 （2H，m，Hβ），4.30 （1H，d，J=8.0 Hz，H1′），3.20～3.80 （6H，overlapped，H2′～6′）。13CNMR （CD3OD，125 MHz） δ：130.7 （C1），130.9 （C2，6），116.1 （C3，5），156.7 （C4），72.0 （Cα），36.3 （Cβ），104.3 （C1′），75.0 （C2′），77.8 （C3′），71.5 （C4′），78.0 （C5′），62.7 （C6′）。以上数据与文献[15]对照，判定为红景天苷（salidroside）。

化合物11 褐色粉末状；ESIMS m/z 153 [M-H]-； 1HNMR （CD3OD，500 MHz）δ：6.64 （1H，d，J=1.0 Hz，H2），6.67 （1H，d，J=8.0 Hz，H5），6.51 （1H，dd，J=1.0，8.0 Hz，H6），3.66 （2H，br t，J=7.0 Hz，Hα），2.65 （2H，br t，J=7.0 Hz，Hβ）。13CNMR （CD3OD，125 MHz）δ：131.8 （C1），116.3 （C2），146.1 （C3），144.6 （C4），117.1 （C5），121.2 （C6），64.6 （Cα），39.6 （Cβ）。以上数据与文献[16]对照，判定为羟基酪醇（hydroxytyrosol）。

4 体外抗炎活性

本研讨选用此前报导的相同办法[16]挑选了化合物1和2对BV2细胞的体外抗炎活性。成果显现，二者对BV2细胞中NO生成有必定的按捺效果，IC50别离为46.4，50.7 μmol·L-1，阳性对照槲皮素的IC50为15.3 μmol·L-1。

5 成果与评论

羽叶丁香去皮的根、根茎及粗枝即为特征蒙药山沉香，但茎皮并不入药。本课题组为初次对羽叶丁香茎皮进行化学成分研讨，一方面能为羽叶丁香的植物学分类供给化学依据，而羽叶丁香地点属以下的层级分类一向存在很大的争议[1]，一起茎皮成分研讨也有助于后续使用HPLCMS等手法化学表征山沉香药效部位，由于山沉香和茎皮的成分有必定相似性，首要区别在倍半萜和环烯醚萜类成分[2，7]，前者首要来自于去皮茎木，而后者多在皮中，其他如本文所报导的木脂素、苯丙素和苯乙醇等在本植物2个部位中皆有。多酚类具有潜在的抗氧化和神经细胞保护效果[2]，与山沉香抗心肌缺血效果有必定的相关，但相似单体化合物的体外活性和总提取物的体内药效之间，还需要更多的依据使之相相关。

上述结构一个明显特点是部分化合物有甲氧基或乙氧基替代，尤其是乙氧基的存在，很容易与药材在乙醇提取时的人工产品相关。乙氧基人为引进或天然存在这两种状况此前都有过报导 [1819]，在没有清晰的验证前，暂不扫除化合物4，7，8为人工产品。

[参阅文献]

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[责任编辑 丁广治]