缓慢乙肝T细胞功用 缓慢乙肝患者及HBV携带者CD8+T细胞外表活化分子CD38和HLA—DR表达研讨
冯江+俞加正+郑洁怀+陈华忠
[摘要] 意图 研讨缓慢乙肝（CHB）患者阿德福韦酯医治前后及HBV携带者CD8+T细胞外表活化分子CD38和HLA-DR表达情况，并评论其与疾病发展的联系。 办法 搜集32例经阿德福韦酯医治的CHB患者，31例HBV携带者和28例正常对照，搜集CHB患者医治前后及HBV携带者和正常对照外周血。选用流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞数量和份额，以及CD8+CD38+和CD8+HLA-DR+T细胞份额，HBV DNA和生化由本院查验室检测。 成果 CHB患者医治前CD8+CD38+T细胞份额显着高于HBV携带者和正常对照组，阿德福韦酯医治后显着下降（P<0.05）。HBV携带者CD8+CD38+T细胞份额高于正常对照组（P<0.05）。CHB患者医治前CD8+HLA-DR+T细胞份额显着高于正常对照组（P<0.01），但与HBV携带者无显着差异，阿德福韦酯医治后显着下降，仍高于正常水平（P<0.05）。 定论 HBV感染能够引起CD8+T活化水平显着升高，阿德福韦酯抗病毒医治能够下降CD8+T的活化。CD8+T活化水平是杰出的HBV感染病况点评目标。
[关键词] HBV；缓慢乙肝；免疫活化；CD38；HLA-DR
[中图分类号] R512.62 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）34-0014-04
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是一种非细胞致病性病毒，HBV感染的临床成果首要依赖于宿主的免疫应对情况。研讨发现T细胞免疫应对对HBV感染的发展十分重要[1]，其间CD8+T细胞免疫应对对操控病毒的仿制起首要效果[2]。缺少高强度的、特异性的免疫应对是导致缓慢乙肝（chronic hepatitis B，CHB）病毒铲除失利和疾病发展的首要原因[3，4]。研讨外周血T细胞免疫活化情况对提醒CHB发病机制具有重要含义，尤其是CD8+T细胞的免疫活化。CD38分子是一种表达在前期T细胞外表的糖蛋白，老练今后消失，可是T细胞活化后又从头呈现[5]。作为T细胞免疫活化的标志，CD38在许多急性或缓慢感染中均会表达升高，如人类免疫缺点病毒（HIV）、EB病毒（EBV）等感染[5，6]。别的一个T细胞免疫活化的目标是人类白细胞抗原-DR（HLA-DR），在HIV的感染中可作为猜测疾病发展的目标之一[7]。到现在为止，对HBV感染者及CHB患者T细胞免疫活化的研讨较少。本文对缓慢乙肝患者阿德福韦酯医治前后及HBV携带者CD8+T细胞外表活化分子CD38和HLA-DR表达情况进行研讨，并评论其与病毒仿制和疾病发展的联系。
1 目标与办法
1.1 研讨目标
选取我院2010年6月～2011年6月承受阿德福韦酯抗病毒医治的CHB者32例，其间男20例，女12例，均匀年龄（50.2±22.4），均匀病程（6.5±5.7）年。确诊规范契合2000年西安全国第10届病毒性肝炎会议所修订的《病毒性肝炎防治计划》确诊规范[3]，并扫除其他病毒性肝炎、酒精、药物引起的肝损害等。入组后承受阿德福韦酯10 mg/d 医治12个月以上。别的，选取HBs抗原阳性的乙肝携带者31例，其间男22例，女9例，均匀年龄（44.8±26.9）岁。以本院门诊体检者32人（均无特别病史，体检无反常发现，anti-HBsAg（-），近2个月无感染史）作为正常对照组，男18例，女10例，均匀年龄（42.1±20.6）岁。
1.2 样本的搜集
搜集缓慢乙肝患者医治前及医治12个月后的外周血2 mL/人，以及HBV携带者和正常对照组血样2 mL/人，无菌EDTA抗凝管搜集做流式细胞术检测，别的搜集血样别离送化验室进行生化及HBVDNA等检测。
1.3 流式细胞术检测
荧光符号的单克隆抗体购自美国BD公司，CD4+和CD8+T细胞计数选用BD公司的细胞计数管，其他细胞份额检测选用一般流式管。每管参加50 μl血样及相应抗体，抗体组合如下：CD3-PE/CD4-FITC，CD3-PE/CD8-FITC，CD3-PE/CD8-FITC/CD38-APC，CD3-PE/CD8-FITC/HLA-DR-APC。符号好的血样室温避光孵育15 min，裂解红细胞后，选用BD公司FACScan四色流式细胞仪进行检测。
1.4 统计学剖析
检测成果均以均数±规范差标明，使用SPSS 15.0软件进行数据剖析，定量材料两组间数据比较选用t查验，多组间数据比较选用One-Way ANOVA（SNK法），相关性剖析Persons查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 CHB患者、HBV携带者及对照组生化和免疫学比较
CHB患者均匀医治时刻为（18.8±5.7）个月，医治前后比较ALT、TBIL和HBV DNA均有显着下降（P<0.05），CD4+T细胞数量有所上升，CD8+T细胞数量下降（P均>0.05），但仍显着低于正常水平（P<0.01），CD4+T细胞份额改动不显着，CD8+T细胞份额医治前显着高于正常对照组，医治后与医治前比显着下降（P<0.05）。HBV携带者HBV DNA显着高于CHB医治前，CD4+T细胞数量和份额均高于CHB患者医治前水平，但CD4+T细胞数量低于正常水平（P均<0.05），CD8+T细胞水平与其他组比较无显着差异。见表1。
2.2 各组CD8+T细胞免疫活化情况比较
CHB患者医治前CD8+CD38+T细胞份额显着高于HBV携带者和正常对照组，阿德福韦酯医治后显着下降，低于HBV携带者水平，但仍稍高于正常水平，HBV携带者CD8+CD38+T细胞份额高于正常对照组。以上P均<0.05，见图1A。
各组CD8+HLA-DR+T细胞份额均低于CD8+CD38+T细胞份额，CHB患者医治前CD8+HLA-DR+T细胞份额显着高于正常对照组（P<0.01），但与HBV携带者无显着差异，阿德福韦酯医治后显着下降，仍高于正常水平（P<0.05）。见图1B。
2.3 CD8+T细胞免疫活化与病毒学和免疫学目标的相关性剖析
CD8+CD38+%和CD8+HLA-DR+%与HBV感染的病况目标均表现出杰出地相关性。详细为CD8+CD38+%和CD8+HLA-DR+%与HBV DNA 和ALT水平呈正相关（P<0.05），与CD8+T细胞数呈负相关（P<0.05），与CD4+T细胞数也呈负相关，但P>0.05。见表2。
3 评论
除了HBV DNA和肝功用外，T细胞的活化情况也是点评HBV感染的重要目标，可是现在这方面的研讨报导不多。既往的研讨发现，CHB患者与正常人群及HBV携带者比较，外周血T细胞亚群存在份额失衡，体现在CD8+T细胞份额增高、CD4+T细胞份额及CD4+/CD8+的下降[8，9]，这与咱们的研讨相符。在咱们的研讨中HBV感染能够引起CD8+T细胞的显着活化，而且CHB患者的活化程度高于HBV携带者，阐明CD8+T细胞的活化参加了CHB的发病进程。许多研讨发现，CD8+T细胞在病毒的铲除和疾病的发展方面起有重要效果，CD8+T细胞的活化反映了CD8+T细胞铲除病毒的才能[10，11]。但另一方面，CD8+T细胞的过度活化又会引起机体的免疫损害，形成疾病发展。咱们的研讨发现，CD8+CD38+和CD8+HLA-DR+T细胞的份额与CD4+和CDC8+T细胞的数量呈反比，阐明CD8+T细胞免疫活化或许是形成CHB患者和HBV携带者CD4+T细胞和CD8+T细胞数量下降的重要原因。Cao等[12]研讨发现，在CHB患者中存在继续的缓慢免疫活化，但不如在HIV和EBV感染中的激烈，这或许与HBV感染首要局限于肝脏有关。很多激活的T细胞，包含CD4+T细胞核CD8+T细胞，终究大部分会凋亡，只要少数会转化为静息型的回忆细胞存活下来。长时刻缓慢的过度免疫活化导致HBV感染者CD4+和CD8+T细胞很多耗费，最终导致免疫功用下降，不能按捺病毒的仿制，发展到缓慢肝病期[13]。
CD38和HLA-DR分子做为T细胞免疫活化的标志，与许多病原体感染有关[5，6]。有研讨发现，在HIV感染中，CD8+CD38+和CD8+HLA-DR+反映的免疫活化水平与HIV疾病的发展密切相关，CD4+T细胞的缺失与免疫活化水平有直接联系，CD8+CD38+和CD8+ HLA-DR+百分比比病毒载量更能反映机体的免疫活化情况[14，15]。咱们的研讨发现，在HBV感染中，CD8+CD38+和CD8+ HLA-DR+百分比与HBV DNA和ALT呈正相关，这与Cao等的研讨成果共同。咱们的研讨成果提示，CD8+T细胞的活化程度与HBV形成炎症反响程度密切相关，是引起肝脏炎症损害的重要原因之一。因而，免疫活化目标，尤其是CD8+T细胞上CD38和HLA-DR分子的表达是点评HBV感染者病况的杰出目标。
此外，咱们的研讨还发现，阿德福韦酯抗病毒医治不只能够按捺CHB患者体内HBV的仿制，使病毒载量显着下降，而且使免疫活化水平显着下降，挨近正常水平，但依然偏高。这一成果标明，CD8+T细胞的免疫活化的直接原因或许是HBV的很多仿制，CD8+T细胞免疫活化程度与HBV DNA拷贝数的正相关也证明了这一点。别的，在HIV-1感染中的研讨发现，承受高效抗逆转录病毒医治的艾滋病患者，即便HIV仿制被彻底按捺，病毒载量下降到检测不到的水平，CD8+CD38+和CD8+ HLA-DR+T细胞的份额依然高于正常水平，这或许是因为尽管病毒仿制水平被按捺到检测限以下，但依然有少数的病毒继续存在，使T细胞的免疫活化维持在较高水平[16]。对承受阿德福韦酯医治的CHB患者的随访研讨发现，CD8+T细胞的免疫活化在医治开端的12周内就开端下降，并跟着医治时刻的延伸发作敏捷、继续地下降，并有许多患者康复到正常水平[12]。这些研讨进一步证明，病毒颗粒自身是导致CD8+T细胞免疫活化的直接原因。因而，及时的、继续的抗病毒医治，最大极限地下降病毒载量，是削减HBV感染者CD8+T细胞免疫活化的重要医治办法。
综上，咱们的研讨标明，HBV感染能够导致机体CD8+T细胞的免疫活化，而且这种免疫活化与HBV感染病况发展有关，并或许参加了CHB的发病进程。阿德福韦酯不只能够按捺HBV的仿制，下降病毒载量，还能够经过下降CD8+T细胞的免疫活化，进而改进CHB患者的免疫情况，削减炎症损害和T细胞的耗费。进一步的研讨需求对承受抗病毒医治CHB患者进行更长时刻的随访。
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（收稿日期：2014-05-28）
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（收稿日期：2014-05-28）