24岁轻度脂肪肝严峻么：桑叶黄酮对2型糖尿病并发单纯性脂肪肝大鼠肝安排PPARγ的影响
薛城敬+++苏言辉+++王亚洲+等
[摘要] 意图 树立2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠模型，调查桑叶黄酮对大鼠肝安排PPARγ的影响，评论桑叶黄酮改进胰岛素灵敏性及脂肪肝发病的可能分子机制。 办法 用小剂量链脲佐菌素（STZ）打针加高脂饲料喂食，树立2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠模型；别离给予桑叶黄酮和罗格列酮喂食，测空腹血糖、胰岛素、PPARγ，调查大鼠肝安排PPARγ的改变。成果 ①模型对照组（MOD组）大鼠胰岛素灵敏指数相对正常对照组（NOR组）显着下降，但桑叶黄酮组（MLF组）、罗格列酮组（RGZ组）比MOD组胰岛素灵敏指数显着升高，而MLF组和RGZ组差异无显着性。②与NOR组比较，MOD组大鼠肝安排PPARγ表达显着削减；MLF组、RGZ组与MOD组比较，肝安排中PPARγ表达显着添加；MLF组与RGZ组比较，肝安排中的PPARγ表达差异无显着性。定论 桑叶黄酮能进步2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠胰岛素的灵敏性，改进胰岛素反抗，其胰岛素增敏效果可能与进步肝安排中的PPARγ表达有关。
[关键词] 桑叶黄酮；2型糖尿病；脂肪肝；PPARγ；胰岛素反抗
[中图分类号] R2-031；R587 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）26-0001-04
2型糖尿病的发病根底是胰岛素反抗（insulin resistance，IR），而脂肪细胞因子排泄异常是IR的一个重要机制[1-3]，影响着胰岛素信号转导通路。过氧化物酶体增殖体激活受体（PPARs）是脂肪细胞因子的调控子之一。桑叶黄酮可改进高脂喂食2型糖尿病大鼠IR，下降氧化应激水平[4-6]。这些效果可能与PPARγ有关。本研讨首要调查桑叶黄酮对2型糖尿病并发单纯性脂肪肝大鼠肝安排PPARγ的影响，以进一步了解桑叶黄酮改进胰岛素灵敏性的效果机制，为桑叶黄酮医治糖尿病的效果机制供给理论依据。
1 材料与办法
1.1 材料
1.1.1 首要试剂与药品 大鼠胰岛素ELISA试剂盒，PPARγ免疫组化试剂盒，PPARγ ELISA试剂盒。STZ溶液（用前以0.1mol/L、pH4.2的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液制造成0.5%溶液），枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，市售罗格列酮、桑叶提取物（提取纯化桑叶黄酮含量为5.4%）。
1.1.2 试验动物与饲料 规范清洁级雄性SD大鼠50只，体重130～160 g， 6～8周龄。一般饲料由我院动物房供给；高脂饲料喂食前一周暂时制造，4℃保存，总热量为18.7 KJ/g，其间碳水化合物30.04%、脂肪55.37%、蛋白质14.59%。
1.2 办法
1.2.1 动物模型的树立、动物分组及给药 雄性SD大鼠50只，参阅胡爱民等[7]的办法造模。先在动物房适应性喂食1周。从第2周开端，随机取大鼠10只为正常对照组（NOR组），予以一般饮食，自在饮水，连续7周，于试验第9周，按体重5 mL/kg于腹腔内打针枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液。其他40只大鼠予以高脂饮食，自在饮水，连续7周，于第9周按体重25 mg/kg于腹腔内打针0.5%STZ 1次。9周末检测大鼠空腹血糖（FBG）和胰岛素（Fins），以空腹血糖≥7.0 mmol/L，伴有IR即胰岛素灵敏性下降为2型糖尿病成模规范。成功造模36只，随机抽取6只以0.1%戊巴比妥钠腹腔打针麻醉（0.1 mL/100g）后取肝安排，调查大鼠肝安排病理改变状况。剩下30只大鼠随机分为模型对照组（MOD组）10只、桑叶黄酮组（MLF组）10只、罗格列酮组（RGZ组）10只。NOR组、MOD组于试验第10周开端每天用4 mL/kg生理盐水灌胃；MLF组于试验第10周开端每天用桑叶黄酮（8 g/kg）灌胃；RGZ组于试验第10周用罗格列酮（2 mg/kg）灌胃。干涉8周后，禁食12 h测FBG和Fins，并惯例制备血清于-20℃冰箱保存以待测相关目标。0.1%戊巴比妥钠腹腔打针麻醉（0.1 mL/100 g）后取肝安排于4%多聚甲醛固定，24 h内制成白腊块保存。
1.2.2 血糖、胰岛素测定 血糖用葡萄糖氧化酶法测定，胰岛素用大鼠胰岛素ELISA试剂盒测定，具体操作过程严厉按试剂盒说明书进行。胰岛素灵敏指数（ISI）= Fins与FBG乘积倒数的自然对数。
1.2.3 PPARγ检测 血清PPARγ用ELISA法检测，按试剂盒说明书进行操作。免疫组化与图画半定量分析检测肝安排PPARγ的表达。以阳性细胞所占百分率进行分级：<10%为-，10%～30%为+，30%～70%为++，70%以上为+++。
1.3 统计学处理
选用SPSS 12.0统计学软件进行数据处理，计量材料以（x±s）标明，选用配对t查验、方差分析和LSD查验。P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 药物干涉8周后各组FBG、Fins、ISI比较
MOD组与NOR组比较，上述各项目标均有显着差异（P<0.01）；与MOD组比较，医治组血糖值均有下降，差异有统计学含义（P<0.01），其间罗格列酮降血糖效果最为显着；MLF组与RGZ组比较较，差异无统计学差异（P>0.05）；MOD组大鼠胰岛素灵敏指数相对NOR组显着下降（P<0.01），MLF组和RGZ组比MOD组胰岛素灵敏指数显着升高（P<0.01），而MLF组和RGZ组差异无显着性（P>0.05）。
2.2 大鼠肝脏病理标本状况
成果显现，6只高脂饮食大鼠镜下肝安排均有显着脂肪变，胞浆内有大小不等的脂肪空泡。
2.3 各组血清PPARγ的比较
与NOR组（407.6±74.67）pg/mL比较，MOD组血清PPARγ[（119.8±21.71）pg/mL]显着下降，差异显着（P<0.01）。MLF组（252.2±68.50）pg/mL、RGZ组（305.1±65.47）pg/mL与MOD组比较均有显着差异（P<0.01）；RGZ组PPARγ高于MLF组，但差异无统计学含义。
2.4 各组PPARγ免疫组化图画和成果比较
2.4.1 免疫组化染色成果。
2.4.2各组PPARγ免疫组化成果比较 与NOR组比较，MOD大鼠肝安排中的PPARγ显着削减；MLF组和RGZ组与MOD组比较，肝安排中的PPARγ显着添加；MLF组与RGZ组比较，肝安排中的PPARγ差异无显着性。
3 评论
糖尿病和脂肪肝是损害人类健康的常见慢性病，两者关系密切。糖尿病能够引起肝脏损害，其间首要对错酒精性脂肪肝（多为单纯性脂肪肝）。非酒精性脂肪肝病是遗传-环境-代谢应激相关要素所造成的的以肝细胞脂肪变性为主的临床病理综合征。首要病因有肥壮、2型糖尿病和血脂紊乱等，并常与这些代谢性疾病伴发呈现。关于非酒精性脂肪肝的发病机制[8，9]，得到最广泛认可的是“二次冲击（two-hit）”学说。IR可能是促进对肝脏进行第1次冲击发生脂肪肝的首要要素[10，11]。而2型糖尿病的首要特征为IR。因而，医治2型糖尿病脂肪肝的关键在于添加体内胰岛素灵敏性，改进IR状况。
桑叶始载于《神农本草经》，味苦甘，性寒，含有丰厚的桑叶黄酮。我国《本草纲目》等中医药书本中有桑叶医治消渴病的记载。现代药理研讨亦证明桑叶中桑叶黄酮能够下降血糖[12]，防备和医治糖尿病。但其机制尚不明晰。
本试验大鼠模型具有中度IR、中度高血糖等特色，肝脏病理切片证明，肝细胞内呈现大小不等的脂滴，脂肪肝构成，大体契合2型糖尿病单纯性脂肪肝的临床特色，造模成功。试验中RGZ组、MLF组与MOD组比较，胰岛素灵敏指数升高，IR改进，血糖均下降，桑叶黄酮有显着的降糖效果，与文献共同[12]。桑叶黄酮在降血糖方面同罗格列酮比较，两者之间无统计学差异，标明桑叶黄酮降血糖的功用与罗格列酮挨近，显现了其很好的降糖效果。
PPARγ活化后，能够改进机体的IR，其效果机制可能有以下几点：①调理脂肪细胞的内排泄功用；②增强胰岛素信号的传导；③调理机体能量散布；④按捺胰高血糖素的生成[13]。咱们用桑叶黄酮灌胃医治大鼠后，大鼠血清PPARγ均匀含量为306 pg/mL，与MOD组比较，有统计学差异（P<0.01），2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠体内PPARγ表达增高；免疫组化成果显现，MLF组肝脏上PPARγ表达与MOD组比较，差异显着（P<0.05）。提示PPARγ表达削弱可能是2型糖尿病单纯性脂肪肝的发病机制之一。经过桑叶黄酮医治后，2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠血糖和血清胰岛素下降，IR改进。桑叶黄酮对上述几项目标的改进，可能与体内PPARγ的表达增强有关。
总归，桑叶黄酮可能经过添加体内PPARγ的表达，增强胰岛素灵敏性、改进IR等途径，医治2型糖尿病单纯性脂肪肝。其分子机制有待进一步研讨。
[参阅文献]
[1] Chapman MJ. Metabolic syndrome and type 2 diabetes： lipid and physiological consequences[J]. Diab Vasc Dis Res，2007，4（3）：S5-S8.
[2] Houstis N，Rosen ED，Lander ES. Reactive oxygen species have a causal ro1e in muhipie forms of insulin resistance[J]. Nature，2006，440（7086）：944-948.
[3] Meigs JB，I arson MG，Fox CS，et al. Association of oxidative stress，insulin resistance， and diabetes risk phenotypes：The Framingham offspring study[J]. Diabetes Care，2007，22：446-458.
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[7] 胡爱民，肖凤英，郑云. 2型糖尿病并脂肪肝试验性大鼠模型的树立及点评[J].我国中西医结合消化杂志，2006， 14（3）：156-159.
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[9] Wolfrum C，Asilmaz E，Luca E，et al. Foxa2 regulates lipid metabolism and ketogenesis in the liver during fasting and in diabetes[J]. Nature，2004，432（7020）：1027-1032.
[10] Asnat BD，Nava B. Proposed mechanisms for the induction of insulin resistance by oxidative stress[J]. Antioxidants&Redox Signaling，2005，7（11&12）：1553-1567.
[11] Fridlyand LE，Philipson LH. Reactive species and early manifestation of insulin resistance in type2 diabetes[J]. Diabetes Obes and Metab，2006，8（2）：136-141.
[12] 罗存敏，施新琴，徐升胜，等. 桑叶提取物对小鼠血糖血脂的影响及有效成分的测定[J]. 蚕业科学，2005，4：418-421.
[13] Kurosaki E，Nakano R，Shimaya A，et al. Differential effects of YM440 a hypoglycemic agent on binding to a peroxisome proliferators activated receptor gamma and its transactivation[J]. Biochem Pharmacol，2003，65：795-805.
（收稿日期：2014-03-19）
2.4 各组PPARγ免疫组化图画和成果比较
2.4.1 免疫组化染色成果。
2.4.2各组PPARγ免疫组化成果比较 与NOR组比较，MOD大鼠肝安排中的PPARγ显着削减；MLF组和RGZ组与MOD组比较，肝安排中的PPARγ显着添加；MLF组与RGZ组比较，肝安排中的PPARγ差异无显着性。
3 评论
糖尿病和脂肪肝是损害人类健康的常见慢性病，两者关系密切。糖尿病能够引起肝脏损害，其间首要对错酒精性脂肪肝（多为单纯性脂肪肝）。非酒精性脂肪肝病是遗传-环境-代谢应激相关要素所造成的的以肝细胞脂肪变性为主的临床病理综合征。首要病因有肥壮、2型糖尿病和血脂紊乱等，并常与这些代谢性疾病伴发呈现。关于非酒精性脂肪肝的发病机制[8，9]，得到最广泛认可的是“二次冲击（two-hit）”学说。IR可能是促进对肝脏进行第1次冲击发生脂肪肝的首要要素[10，11]。而2型糖尿病的首要特征为IR。因而，医治2型糖尿病脂肪肝的关键在于添加体内胰岛素灵敏性，改进IR状况。
桑叶始载于《神农本草经》，味苦甘，性寒，含有丰厚的桑叶黄酮。我国《本草纲目》等中医药书本中有桑叶医治消渴病的记载。现代药理研讨亦证明桑叶中桑叶黄酮能够下降血糖[12]，防备和医治糖尿病。但其机制尚不明晰。
本试验大鼠模型具有中度IR、中度高血糖等特色，肝脏病理切片证明，肝细胞内呈现大小不等的脂滴，脂肪肝构成，大体契合2型糖尿病单纯性脂肪肝的临床特色，造模成功。试验中RGZ组、MLF组与MOD组比较，胰岛素灵敏指数升高，IR改进，血糖均下降，桑叶黄酮有显着的降糖效果，与文献共同[12]。桑叶黄酮在降血糖方面同罗格列酮比较，两者之间无统计学差异，标明桑叶黄酮降血糖的功用与罗格列酮挨近，显现了其很好的降糖效果。
PPARγ活化后，能够改进机体的IR，其效果机制可能有以下几点：①调理脂肪细胞的内排泄功用；②增强胰岛素信号的传导；③调理机体能量散布；④按捺胰高血糖素的生成[13]。咱们用桑叶黄酮灌胃医治大鼠后，大鼠血清PPARγ均匀含量为306 pg/mL，与MOD组比较，有统计学差异（P<0.01），2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠体内PPARγ表达增高；免疫组化成果显现，MLF组肝脏上PPARγ表达与MOD组比较，差异显着（P<0.05）。提示PPARγ表达削弱可能是2型糖尿病单纯性脂肪肝的发病机制之一。经过桑叶黄酮医治后，2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠血糖和血清胰岛素下降，IR改进。桑叶黄酮对上述几项目标的改进，可能与体内PPARγ的表达增强有关。
总归，桑叶黄酮可能经过添加体内PPARγ的表达，增强胰岛素灵敏性、改进IR等途径，医治2型糖尿病单纯性脂肪肝。其分子机制有待进一步研讨。
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（收稿日期：2014-03-19）
2.4 各组PPARγ免疫组化图画和成果比较
2.4.1 免疫组化染色成果。
2.4.2各组PPARγ免疫组化成果比较 与NOR组比较，MOD大鼠肝安排中的PPARγ显着削减；MLF组和RGZ组与MOD组比较，肝安排中的PPARγ显着添加；MLF组与RGZ组比较，肝安排中的PPARγ差异无显着性。
3 评论
糖尿病和脂肪肝是损害人类健康的常见慢性病，两者关系密切。糖尿病能够引起肝脏损害，其间首要对错酒精性脂肪肝（多为单纯性脂肪肝）。非酒精性脂肪肝病是遗传-环境-代谢应激相关要素所造成的的以肝细胞脂肪变性为主的临床病理综合征。首要病因有肥壮、2型糖尿病和血脂紊乱等，并常与这些代谢性疾病伴发呈现。关于非酒精性脂肪肝的发病机制[8，9]，得到最广泛认可的是“二次冲击（two-hit）”学说。IR可能是促进对肝脏进行第1次冲击发生脂肪肝的首要要素[10，11]。而2型糖尿病的首要特征为IR。因而，医治2型糖尿病脂肪肝的关键在于添加体内胰岛素灵敏性，改进IR状况。
桑叶始载于《神农本草经》，味苦甘，性寒，含有丰厚的桑叶黄酮。我国《本草纲目》等中医药书本中有桑叶医治消渴病的记载。现代药理研讨亦证明桑叶中桑叶黄酮能够下降血糖[12]，防备和医治糖尿病。但其机制尚不明晰。
本试验大鼠模型具有中度IR、中度高血糖等特色，肝脏病理切片证明，肝细胞内呈现大小不等的脂滴，脂肪肝构成，大体契合2型糖尿病单纯性脂肪肝的临床特色，造模成功。试验中RGZ组、MLF组与MOD组比较，胰岛素灵敏指数升高，IR改进，血糖均下降，桑叶黄酮有显着的降糖效果，与文献共同[12]。桑叶黄酮在降血糖方面同罗格列酮比较，两者之间无统计学差异，标明桑叶黄酮降血糖的功用与罗格列酮挨近，显现了其很好的降糖效果。
PPARγ活化后，能够改进机体的IR，其效果机制可能有以下几点：①调理脂肪细胞的内排泄功用；②增强胰岛素信号的传导；③调理机体能量散布；④按捺胰高血糖素的生成[13]。咱们用桑叶黄酮灌胃医治大鼠后，大鼠血清PPARγ均匀含量为306 pg/mL，与MOD组比较，有统计学差异（P<0.01），2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠体内PPARγ表达增高；免疫组化成果显现，MLF组肝脏上PPARγ表达与MOD组比较，差异显着（P<0.05）。提示PPARγ表达削弱可能是2型糖尿病单纯性脂肪肝的发病机制之一。经过桑叶黄酮医治后，2型糖尿病单纯性脂肪肝大鼠血糖和血清胰岛素下降，IR改进。桑叶黄酮对上述几项目标的改进，可能与体内PPARγ的表达增强有关。
总归，桑叶黄酮可能经过添加体内PPARγ的表达，增强胰岛素灵敏性、改进IR等途径，医治2型糖尿病单纯性脂肪肝。其分子机制有待进一步研讨。
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[9] Wolfrum C，Asilmaz E，Luca E，et al. Foxa2 regulates lipid metabolism and ketogenesis in the liver during fasting and in diabetes[J]. Nature，2004，432（7020）：1027-1032.
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