黄芪甲苷含量测定：HPLC法测定健腰通颗粒中黄芪甲苷的含量

孙永慧+赵静+孙楠

[摘要]意图 树立健腰通颗粒中黄芪甲苷的含量测定办法。办法 以高效液相色谱法测定健腰通颗粒中黄芪甲苷的含量，选用Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；活动相为乙腈-水（30∶70）；流速：1.0 ml/min；柱温：40℃；蒸腾光散射检测器参数中氮气流量：2.5 L/min；漂移管温度：105℃。成果 黄芪甲苷进样量在0.56～4.20 μg（r=0.9994）范围内线性关系杰出。加样收回率为95.83%（RSD为1.39%，n=5）。定论 本含量测定法重复性和精细度杰出，成果牢靠精确，可作为该制剂质量的检测办法。

[关键词]健腰通颗粒；黄芪甲苷；高效液相色谱法；含量测定

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）11（c）-0140-03

[Abstract]Objective To establish the method for the determination of astragaloside Ⅳ in Jianyaotong Granules.Methods HPLC was used the quality of astragaloside Ⅳ in Jianyaotong Granules，analytical column was Diamonsil C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）.Mobile phase was Acetonitrile-Water（30∶70）.Flow rate was 1.0 ml/min，the parameter of ELSD detector：the flow rate of N2 was 2.5 L/min；the temperature of drift tube was 105℃.Results The linear range of astragaloside Ⅳ was from 0.56 to 4.20 μg（r=0.9994）.The average recovery was 95.83%（RSD=1.39%，n=5）.Conclusion This method is proved to be sensitive and reliable.It can be the quality detection method of Jianyaotong Granules.

[Key words]Jianyaotong Granules；Astragaloside Ⅳ；HPLC；Content determination

健腰通颗粒是由黄芪、鸡血藤、骨碎补、桑寄生、牛蒡子、补骨脂、三七、淫羊霍、水蛭、鹿茸等多种中药组成的复方制剂。具有疏筋养血，补肾益气，强腰健肾的成效。用于腰间盘突出，腰椎增生及颈腰综合症，具有杰出的医治作用。黄芪是该制剂中起首要作用的药物，本试验以高效液相色谱（HPLC）法对健腰通颗粒中黄芪甲苷进行了含量测定[1-14]，以操控该制剂的质量。

1仪器与试药

Waters 2695-2998型高效液相色谱仪（Waters公司，Empower工作站）；蒸腾光散射检测器（Alltech 2000型，奥泰克公司）；BP221S型电子天平（德国赛多利斯公司）；健腰通颗粒（批号：20150301，20150302，2015 0303），由黑河市中医院制剂室出产；黄芪甲苷对照品（批号：110781-201209）， 从我国药品生物制品檢定所购得。甲醇（色谱纯，迪马公司）；D101型大孔吸附树脂（天津市克复精细化工研讨所，批号：20140510）；三氯甲烷（天津化学试剂厂，批号：20150915）；正丁醇（天津化学试剂厂，批号：20151020）；氨水（天津化学试剂厂，批号：20151201）；无水乙醇（天津化学试剂厂，批号：20151208）；甲醇（天津化学试剂厂，批号：20150815）。

2办法与成果

2.1色谱条件

色谱柱类型：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；活动相：乙腈-水（30∶70）；流速为1.0 ml/min；蒸腾光散射检测器参数中氮气流量：2.5 L/min；漂移管温度：105℃；柱温是40℃。此别离检测条件下，供试品中黄芪甲苷色谱峰与其它色谱峰别离度杰出，基线平稳，阴性制剂无搅扰，HPLC色谱图见图1。

2.2供试品溶液的制备

取健腰通颗粒（批号：20150301）3袋，破坏，取粉末25 g，精细称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷适量，加热回流2 h。弃去三氯甲烷提取液，滤纸筒挥干三氯甲烷，再加甲醇适量，加热回流4 h。甲醇提取液收回溶剂并浓缩至干，残渣加水20 ml，略微水浴加热拌和使溶解，室温放冷，用水饱满的正丁醇振摇提取4次，40 ml/次。正丁醇提取液兼并，用氨试液振摇洗刷2次，40 ml/次，弃去氨试液，正丁醇提取液蒸干，残渣加水10 ml使溶解。水液经过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，装入树脂高12 cm），用水50 ml洗脱，弃去水洗脱液，再用40%乙醇30 ml洗脱，弃去洗脱液，持续用70%乙醇80 ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并转移至5 ml量瓶中，参加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，得健腰通颗粒待测供试品溶液。

2.3黄芪甲苷对照品溶液的制备

取黄芪甲苷对照品约3 mg，精细称定，置于10 ml容量瓶中，加色谱甲醇至刻度，振摇使溶解混匀，得每1 ml含0.28 mg的黄芪甲苷对照品溶液。

2.4线性关系的调查

取黄芪甲苷对照品溶液别离进样2、5、8、10、12、15 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以进样量微克数的自然对数为横坐标，以黄芪甲苷色谱峰面积的自然对数为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程为：Y=1.6418 X+10.9741（r=0.9996），提示黄芪甲苷对照品的进样量在0.56～4.20 μg有杰出的线性关系，可以用外标两点法进行含量测定。

2.5精细度试验

取黄芪甲苷对照品溶液，汲取5 μl，接连进样6次，测得黄芪甲苷对照品色谱峰面积的RSD值为1.97%，成果表明精细度杰出。

2.6安稳性试验

取健腰通颗粒供试品溶液，在7个不一起刻点进样测定，别离是：0、2、4、6、8、10、12 h，每次精细进样20 μl，成果健腰通颗粒的供试品溶液在12 h之内测定，黄芪甲苷峰面积数值是安稳的，RSD=2.56%。

2.7重复性试验

取同一批健腰通颗粒，破坏后称取6份，每份约25 g，精细称定，依照“2.2”项下办法提取制备供试品溶液。别离精细汲取黄芪甲苷对照品溶液5 μl、10 μl以及供试品溶液20 μl，依照前述色谱条件进样，测定，以外标两点法对数方程核算供试品中黄芪甲苷的含量。成果测得黄芪甲苷含量别离为0.0328、0.0336、0.0351、0.0343、0.0358、0.0353 mg/g，均匀值为0.0345 mg/g（RSD=3.24%），成果显现本药含量测定办法有较好的重复性。

2.8加样收回率试验

取同一批健腰通颗粒供试品，破坏，别离取细粉6份，每份约12.5 g，精细称定分量，在每份供试品细粉中别离参加黄芪甲苷对照品0.42 mg（精细汲取浓度为0.28 mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液1.5 ml），依照前述“2.2”供试品溶液制备项下的办法进行提取以及进行含量测定见表1。

五份健腰通颗粒供试品的均匀加样收回率为94.79%（RSD=1.46%）。成果显现该药收回率较高，测定办法牢靠。

2.9供试品测定

取三批健腰通颗粒（批号：20140901，20140902， 20140903）各3份，破坏，每份取约25 g，精细称定分量，依照前面2.2项下供试品溶液制备办法操作，得到待测黄芪甲苷含量的健腰通颗粒供试品溶液。别离精细汲取黄芪甲苷对照品溶液5、10 μl以及供试品溶液20 μl，依照前述办法进样、测定、核算供试品中黄芪甲苷的含量，见表2。

成果显现，三批健腰通颗粒中黄芪甲苷含量均匀为0.0373 mg/g，按均匀值80%制定健腰通颗粒中黄芪甲苷含量[15]，每克健腰通颗粒中黄芪甲苷含量应≥0.03 mg。

3评论

本方中黄芪起首要作用，其首要成分为黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷等，本试验经过测定该药中黄芪甲苷的含量来操控该制剂的质量。含量测定参阅《我国药典》2015年版一部“黄芪”药材[含量测定]项下的办法[1]，并参阅文献[2-14]，选用高效液相色谱-蒸腾光散射法进行测定，依据实践色谱别离作用调整活动相乙腈-水的份额，在乙腈-水（30∶70）时黄芪甲苷色谱峰别离度杰出，保存时刻适合，且阴性对照无搅扰，是该制剂黄芪甲苷含量测定最优的色谱条件。

蒸腾光散射检测器用于测定黄芪甲苷的含量，重复性、活络度、安稳性均能契合含量测定的要求。本试验对漂移管温度、雾化器温度、活动相流速以及载气流速等试验参数进行了研讨试验、优化调整。本试验的终究优化条件：活动相为乙腈-水（30∶70），流速为1.0 ml/min，柱温为40℃，蒸腾光蒸腾温度为105℃，载气（氮气）流速为2.5 L/min。

综上所述，本黄芪甲苷含量测定办法快速、活络、简洁，精细度、线性、重复性、安稳性以及加样收回率均契合要求，成果精确牢靠，重复性好，可用于健腰通颗粒的质量操控。

[参阅文献]

[1]国家药典委员会.我国药典[M].一部北京：我国医药科技出版社，2015：302.

[2]薛志红，许凤清.HPLC-ELSD法测定参芪养心颗粒中黄芪甲苷的含量[J].山东化工，2016，45（7）：66-72.

[3]李永华.HPLC-ELSD法测定恢复春口服液中黄芪甲苷的含量[J].我国现代药物使用，2015，9（15）：286-287.

[4]杨庆珍，刘德旺，黄林芳，等. 蒙古黄芪不同药用部位中黄芪甲苷的含量测定[J].我国生化药物杂志，2015，35（3）：156-158.

[5]曹桂萍，王晓晶.HPLC-ELSD法测定股痹灵片中黄芪甲苷的含量[J].现代中药研讨与实践，2014，28（6）：65-67.

[6]宋敏.HPLC-ELSD法测定妇安栓剂中黄芪甲苷的含量[J].我国药房，2014，25（7）：647-648.

[7]关欣，徐雅娟，解生旭，等.HPLC法测定芪丹颗粒剂中黄芪甲苷的含量[J].長春中医药大学学报，2015，31（2）：245-247.

[8]李广胜，覃芳，杨季菱，等.HPLC法测定当归补血配方颗粒中黄芪甲苷的含量[J].我国药房，2015，26（36）：5131-5133.

[9]孟艳，吴鹏，唐玉秋，等.妇血宁颗粒中黄芪甲苷和特女贞苷含量测定[J].山东中医杂志，2015，34（12）：944-947.

[10]单丽芳，袁彩，杨红梅，等.HPLC-ELSD一起测定参芪复方颗粒中皂苷类成分的含量[J].我国试验方剂学杂志，2016，22（14）：102-105.

[11]谢紫薇，谭天林，王瑷萍，等.高效液相色谱-蒸腾光散射检测器法测定健儿宝颗粒中黄芪甲苷含量[J].我国药业，2016，25（13）：77-79.

[12]刘维海，张小飞，吕腾，等.高效液相色谱法测定肾康分散片干膏中黄芪甲苷含量[J].现代中医药，2016，36（2）：82-87.

[13]吴佳，张正锋，胡娟娟，等.HPLC-ELSD一起测定参芪颗粒中6个成分的含量[J].药物剖析杂志，2016，36（1）：68-73.

[14]王红，杨慈海，宋军，等.高效液相色谱-蒸腾光散射检测器法测定康栓通络丸中黄芪甲苷含量[J].我国药业，2016， 25（4）：75-77.

[15]国家药典委员会.我国药典[M].四部.北京：我国医药科技出版社，2015：附录374.

（收稿日期：2016-08-29 本文修改：顾雪菲）